院內制劑七龍天中三七及紅景天的提取工藝優選

余曉玲， 張韶湘， 付 義

(昆明市中醫醫院，云南中醫學院第三附屬醫院， 云南 昆明 650011)

紅景天和三七是本院院內制劑“七龍天”的兩種重要藥材。紅景天為景天科多年生草本植物，全世界有90多種，中國有70多種，進行過化學成分研究的有20 多種[1]，紅景天具有增強機體免疫機能、降血脂，提高體內SOD 活性，增強運動耐力等多方作用[2]。三七[Panax notoginseng(BurK.)F.H.Chen]為五加科人參屬植物，是中國特有的名貴中藥材[3]。一般認為三七總皂苷(PNS)是三七的主要藥理活性成分，近年的研究表明 PNS具有擴張血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延長凝血時間、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等藥理作用[4～8]。為提高兩種藥材有效成分的提取率，需對提取工藝進行優選。一般中藥材的提取方法主要有：冷浸發[9]、滲漉法[10]、煎煮法、醇回流法[11]、超聲提取法[12]，其中以超聲提取法的提取率最高，但不宜于工藝上放大進行大規模生產[13]。“七龍天”制劑最后將進行大規模生產所以舍棄超聲提取法而選用提取率次之的醇回流法進行提取。本次試驗采取三七、紅景天按一定比例混合后用乙醇提取，最后以紅景天苷含量為參考指標的方法選擇最佳提取。

1 材料與儀器

1.1 材料 三七；紅景天；紅景天苷對照品(中國生物制品檢定所，批號：110818-200404)；甲醇、乙醇均為分析純；乙腈為色譜純；純水；磷酸。

1.2 儀器 電子天平；循環水式多用真空泵；旋轉蒸發儀；電子恒溫水浴鍋；高效液相色譜儀(Agilent1101)；色譜柱(ZORBOX 4.6×250nm)；超聲儀 。

2 實驗方法

2.1 提取

2.1.1 正交試驗設計 采用正交實驗法，選定乙醇濃度、提取時間、提取次數、料液比作為考察的4個因素，各取3個水平(見表1)按照L9(34)正交表進行實驗。

表1 因素水平

2.1.2 提取流程工藝設計 三七紅景天混合→乙醇回流→合并濾液→濃縮→干燥待測

2.1.3 提取實驗結果 按表1選擇因素、水平和提取流程進行試驗，結果見表2。

表2 提取實驗結果

2.2 含量測定

2.2.1 流程設計 取1 g浸膏→超聲溶解30 min→定容至25 mL→過濾→濾液待測。

2.2.2 溶劑選擇 以甲醇作為溶劑。

2.2.3 色譜分析條件 色譜柱ZORBOX 4.6×250 nm。

2.2.4 檢測波長 紅景天苷的最大吸收波長為278 nm，以此作為檢測波長。

2.2.5 流動相選擇 進樣5 uL，流速1 mL/min的條件下以乙腈水=7∶93，水中加0.05‰磷酸時的峰型良好，紅景天苷與其他組分達基線分離。以此作為測定條件。

2.2.6 標注曲線的繪制 精密稱取紅景天苷標準品2.5 mg，甲醇溶解定容至25 mL(C=0.1 mg/mL)。分別進樣5、10、15、20、25、30 uL，測定峰面積，繪制標準曲線。見圖1。

圖1 紅景天苷標準曲線

2.2.7 樣品含量測定 取3份樣品，按設計流程重復3次測定，計算平均值。結果見圖2，圖3及表3。

圖2 紅景天苷標準品HPLC圖

圖3 樣品HPLC圖

表3 3次測得峰面積

3 結果和討論

根據峰面積用標準曲線法計算紅景天苷濃度和含量結果見表4，表5。

表4 紅景天苷含量

表5 正交試驗數據分析

注：Ⅰj、Ⅱj、Ⅲj表示不同因素的三個水平；R表示極差，既某因素水平之間平均值的最大值與最小值之差。

一個因素對實驗結果的影響最大，這個因素就是最主要因素，在正交表中影響的大小通過極差類反應，極差值大，影響也大，反之亦然。從表中計算結果來看，RD>RB>RC>RA因此，影響提取效率的主要因素為回流次數，其次是回流時間、料液比，醇濃度的影響最小。在同一因素中，哪一個水平最好，可以通過每一個水平的實驗平均值Ⅰj、Ⅱj、Ⅲj比較來確定，值最大，水平最好。比較可知ⅢA>ⅡA>ⅠA；ⅢB>ⅠB>ⅡB；ⅡC>ⅢC>ⅠC；ⅢD>ⅡD>ⅠD 。通過上述分析得最佳工藝組合為AⅢBⅢCⅡDⅢ。即10倍75%的乙醇，回流3次，每次2 h。

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