PPARγ mRNA在胃癌組織中的表達及其與胃癌預后的關系

李 強 黨誠學

胃癌是常見的惡性腫瘤，目前胃癌手術后的預后不佳，嚴重危害著人類健康。過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)是一類核轉錄因子，包括PPARα、PPARβ及PPARγ 3種亞型。近年來研究表明，PPARγ具有調控腫瘤細胞分化，抑制腫瘤細胞增殖的作用。PPARγ與胃癌發生、發展及預后的關系，目前研究較少。本研究采用實時定量PCR檢測胃癌組織和正常切緣胃組織中PPARγmRNA的表達，并結合胃癌患者的臨床病理特征及生存資料，探討PPARγ mRNA在胃癌發生、發展及預后中的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2004年5月～2010年5月陜西省腫瘤醫院就診的胃癌手術患者53例作為研究對象。胃癌標本手術切除后立即取胃癌組織、正常切緣胃組織，快速放置在液氮罐中，-80℃冰箱保存備用。胃癌組織標本及正常切緣胃組織均經術后病理檢查證實。53例胃癌患者中，男性38例，女性15例；年齡33～67歲，中位年齡55歲。根據國際抗癌聯盟(UICC) 第6版胃癌TNM分期標準，Ⅰ期7例，Ⅱ期14例，Ⅲ期27例，Ⅳ期5例；淋巴結轉移41例，無轉移12例。所有患者均行根治性切除，術前均未行放、化療，術后行2～6個周期輔助化療，中位化療周期數為4個周期。對53例胃癌患者進行隨訪，手術治療時間作為生存的起始時間，隨訪結束時間作為終止時間，以死亡作為結局事件。結局事件發生的時間與起始時間之間的時間間隔定義為患者的生存時間。隨訪截止到2011年5月。采取電話和信件隨訪。

1.2 實驗方法

1.2.1 RNA提取和cDNA合成 采用RNAfast200試劑盒提取完整的RNA，按照Ferments(MBI)公司的逆轉錄試劑盒合成cDNA。

1.2.2 PPARγ mRNA檢測 按 Realtime PCR Master Mix (ferments)試劑盒操作說明，在實時PCR儀上進行檢測。以cDNA為模板擴增PPARγ mRNA和β-actin基因。反應體系SYBR Green Realtime PCR Master Mix(2×)12.5 μl，正向引物0.5 μl，反向引物0.5 μl，模板DNA 2 μl，加水至25 μl。PPARγmRNA擴增引物：上游引物5’-TGGAATTAGATGACAGCGACTTGG -3’，下游引物5’-AGGACTCAGGGTGGTTCAGC-3’；β-actin擴增引物：上游引物5’-ATCGTGCGTGACATTAAGGAGAAG-3’,下游引物5’-AGGAAGGAAGGCTGGAAGAGTG-3’。反應條件：50℃ 2 min，95℃ 10 min,95℃ 15 s,60℃ 30 s，72℃ 30 s，共40個循環。

1.2.3 數據處理 用2-△△Ct法處理實時定量PCR所測數值(Ct值)，得出PPARγmRNA相對表達量，△△Ct=△Ct實驗組-△Ct對照組；△Ct=△CtPPARγ-△Ctβ-actin。2-△△Ct≥2為高表達，反之為低表達。

1.3 統計學方法

應用SPSS16.0統計學軟件進行統計分析，利用配對t檢驗分析胃癌組織和切緣正常胃組織中PPARγ mRNA表達,獨立樣本的t檢驗分析胃癌組織中PPARγ mRNA表達與臨床病理特征之間的關系，采用Kaplan—Meier和log rank進行生存分析，顯著性檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 PPARγ mRNA 在胃癌組織中的表達

胃癌組織中PPARγ mRNA表達水平為(3.14±2.80)，較切緣正常胃組織(1.03±0.27)高，差異有統計學意義(P<0.05)。胃癌中PPARγ mRNA高表達30例，高表達率為56.6%；PPARγ mRNA低表達23例，低表達率為43.4%。

2.2 胃癌組織中PPARγ mRNA表達與臨床病理參數的關系

胃癌組織中PPARγ mRNA表達量與胃癌的TNM分期有關(P=0.027)，與患者性別、年齡、淋巴結轉移、腫瘤大小及分化程度無關(P>0.05)(表 1)。

表1 胃癌組織中PPARγmRNA表達與臨床病理參數的關系

2.3 PPARγ mRNA與胃癌患者預后的關系

53例胃癌患者平均中位生存時間為47個月，PPARγ mRNA高表達的胃癌患者中位生存時間為60個月，PPARγ mRNA低表達的胃癌患者中位生存時間為36個月。Kaplan-Meier曲線分析(圖1)。Log-rank檢驗表明，PPARγ mRNA高表達患者的生存率高于低表達者(P=0.015)。

圖1 胃癌PPARγ mRNA不同表達水平組患者的生存曲線(月)

3 討論

胃癌是常見的惡性腫瘤，2008年全世界新增胃癌患者，占全部腫瘤的7.8%[1]。目前，胃癌患者的主要治療手段是手術治療，但患者術后的生存期并不樂觀，其死亡率僅次于肺癌、肝癌，全球每年新發胃癌病例41%發生在中國；中國占全球每年胃癌死亡人數的35%[2]。

近年來,胃癌的分子生物學和發病機制的研究揭示了胃癌是1種異質性腫瘤,腫瘤的個體化治療日益受到重視。傳統的胃癌預后指標TNM分期，已無法滿足個體化治療的要求。

隨著分子生物學的研究進展，過氧化物酶體增殖物激活受體( PPARs)與腫瘤的關系越來越引起人們的重視。過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)，是一類核轉錄超家族,它對基因的表達具有調節和轉錄作用，因而它調節著多種生理過程，在一些疾病中扮演著重要角色。它包括PPARα、PPARβ及PPARγ 3種亞型。它們分布在不同的組織中，具有調節細胞的生長、分化、凋亡和代謝平衡等多種生物功能。PPARγ是核受體超家族的成員，當被配體激活并與維甲類X受體(retinoid X receptor，RXR)形成異二聚體后，可以結合位于目標基因上游的過氧化物酶增殖體反應元件( peroxisome proliferating response element，PPRE)，調節基因轉錄。

PPARγ在乳腺、結腸、肺、卵巢、前列腺，甲狀腺等多種組織中表達。文獻報道PPARγ活化后，通過誘導腫瘤細胞凋亡和阻滯細胞周期等作用來發揮腫瘤的抑制效應[3]。

目前對于PPARγ mRNA與胃癌的生物學特性及預后之間的關系研究較少。我們采用real-time PCR定量方法測定PPARγ mRNA在胃癌中的表達，結果顯示PPARγ mRNA在胃癌組織中的表達明顯高于正常組織，與王麗萍[4]、Yao[5]報道的一致。我們的研究結果表明PPARγmRNA的表達量與TNM分期有關，和患者的性別、年齡、組織分化、腫瘤大小和淋巴結轉移無關。以上研究結果提示：PPARγ與腫瘤的發生、腫瘤的進展有關。

我們通過對PPARγ mRNA表達量和胃癌手術后生存期的研究發現，PPARγ mRNA表達量高的患者中位生存期為60個月，PPARγ mRNA表達量低的患者中位生存期達36個月，差異有統計學意義(P<0.05)。國外學者在對結腸癌、肺癌、舌癌[6，7]的研究中發現PPARγ高表達腫瘤患者預后較低表達者好。這表明，PPARγ mRNA表達水平對判斷胃癌預后有重要的臨床意義，是1個有價值的預后指標。

PPAR-γ激動劑在腫瘤細胞系中已經顯示出抗腫瘤增殖作用[8，9]。研究表明PPARγ通過多種途徑發揮腫瘤抑制效應，主要包括:①阻滯細胞周期；②誘導細胞凋亡；③抑制炎癥反應和血管生成；④抑制腫瘤侵襲和轉移。臨床研究[10,11]也顯示接受PPARγ激活劑治療的患者，發生肺癌的風險低，提示PPARγ具有保護作用。

綜上所述，胃癌組織中PPARγ mRNA的表達與胃癌的分期和預后密切相關，PPARγmRNA在胃癌組織中的表達，有可能成為1個有用的預后指標，對胃癌的發展和預后做出準確的判斷，同時發揮化學預防和治療的作用，更好地進行胃癌的個體化治療。

[1] Ferlay J，Shin HR，Bray F,et al.Estimates of worldwide burden of cancer in 2008:GLOBOCAN 2008〔J〕.Int J Cancer，2010，127(12):2893.

[2] 季加孚，季 鑫.胃癌治療的新進展〔J〕.循證醫學，2011,11(2):82.

[3] Ondrey F.Peroxisome proliferator-activated receptor gamma pathway targeting in carcinogenesis:implications for chemoprevention〔J〕.Clin Cancer Res,2009,15(1):2.

[4] 王麗萍,李洪亮,劉愛東,等.PPARγ和MMP-9在胃癌中的表達及臨床意義〔J〕.山東醫藥，2010,50(32):50.

[5] Yao L，Liu F，Sun L,et al.Upregulation of PPARg in tissue with gastric carcinoma〔J〕.HYBRIDOMA，2010,29(4):341.

[6] Ogino S，Shima K，Baba Y,et al.Colorectal cancer expression of peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARG，PPARgamma)is associated with good prognosis〔J〕.Gastroenterology,2009,136(4):1242.

[7] Theocharis S，Klijanienko J，Giaginis C,et al.Peroxisome proliferator- activated receptor-γ in mobile tongue squamous cell carcinoma:associations with clinicopathological parameters and patients survival〔J〕.J Cancer Res Clin Oncol，2011,137(2):251.

[8] Blanquicett C，Roman J，Hart CM.Thiazolidinediones as anti-cancer agents 〔J〕.Cancer Ther，2008,6(A):25.

[9] 朱理輝，張 琍.PPARγ激活劑羅格列酮對人胃癌MGC803細胞周期及其PTEN表達的影響〔J〕.實用癌癥雜志，2006，21，(3)：238.

[10] Govindarajan R，Ratnasinghe L，Simmons DL,et al.Thiazolidinediones and the risk of lung，prostate，and colon cancer in patients with diabetes〔J〕.J Clin Oncology，2007,25(12):1476.

[11] Girnun GD，Chen L，Silvaggi J,et al.Regression of drug resistant lung cancer by the combination of rosiglitazone and carboplatin〔J〕.Clin Cancer Res，2008，14(20):6478.