基層醫(yī)院自制反定型試劑紅細(xì)胞的應(yīng)用及評價

隆維東，劉萬彬，李 堅，張玲玲

(重慶市巴南區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 401320)

成分輸血是臨床醫(yī)學(xué)重要的治療手段，而ABO血型鑒定是開展臨床成分輸血的重要基礎(chǔ)[1]。按照《臨床輸血技術(shù)規(guī)范》要求，輸血科在交叉配血前，需復(fù)查受血者和供血者ABO血型(正反定型)。在臨床血型鑒定過程中,諸多因素可對血型正定型試驗(yàn)造成干擾，而同時開展反定型試驗(yàn)時,可及時發(fā)現(xiàn)和糾正正定型中的錯誤。在基層醫(yī)院，血型鑒定及交叉配血標(biāo)本量少，而商品化的血型反定型試劑紅細(xì)胞價格昂貴、有效期短。同時，其他文獻(xiàn)報道的自制反定型試劑紅細(xì)胞方法、原材料準(zhǔn)備及配制過程復(fù)雜,故部分基層醫(yī)院未做血型反定型鑒定[2]。本院通過一種簡便、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的自制反定型試劑紅細(xì)胞方法，在基層醫(yī)院運(yùn)用，效果較好，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1材料與試劑 BIOBASE生物安全柜,由濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司提供。Nikon YS100光學(xué)顯微鏡由南京覃思科技有限公司提供。隱血(FOB)檢測試劑(膠體金法)，批號：201101014，由艾康生物技術(shù)有限公司提供。抗A、抗B血型定型試劑(單克隆抗體)，批號：20100610，由長春博德生物技術(shù)有限公司提供。ABO血型反定型試劑紅細(xì)胞(人紅細(xì)胞)，批號：201008005，由江陰力博醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供。各型紅細(xì)胞懸液，由重慶市血液中心提供。一次性真空采血管(無附加劑)，批號：100824，由成都市雙流雙陸醫(yī)療器械有限公司提供。

1.2方法

1.2.1反定型試劑紅細(xì)胞配制 收集距離失效期大于20 d的A、B、O型紅細(xì)胞懸液血袋上多余的交叉配血小辮。在生物安全柜內(nèi)，將3個相同血型的不同獻(xiàn)血員交叉配血小辮內(nèi)的血液混合在一起，置于一次性無菌真空采血管(無附加劑)內(nèi)。再通過ABO血型鑒定復(fù)核血型后，在試管上注明血型，配制日期，配制人，有效期，置2～6 ℃冰箱保存。

表1 自制反定型試劑紅細(xì)胞溶血情況

表2 自制反定型試劑紅細(xì)胞抗原穩(wěn)定性檢測結(jié)果

-：此項(xiàng)無數(shù)據(jù)。

1.2.2自制反定型試劑紅細(xì)胞穩(wěn)定性觀察 自試劑配制當(dāng)日起，每2天觀察上清液有無出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，并記錄上清液顏色及透明度。同時,吸取紅細(xì)胞層,推薄片,在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。然后再吸取少量上清液，用無菌等滲生理鹽水作倍比稀釋,用隱血試紙條檢測溶血程度,記錄出現(xiàn)隱血陰性時的稀釋倍數(shù)。

1.2.3自制反定型試劑紅細(xì)胞抗原穩(wěn)定性檢測 自試劑配制當(dāng)日起，每2天用單克隆抗A、抗B血清分別與各型自制反定型試劑紅細(xì)胞作凝集試驗(yàn)，肉眼觀察凝集狀況，凝集強(qiáng)度以4+、3+、2+、1+、±表示。

1.2.4自制反定型試劑紅細(xì)胞臨床驗(yàn)證 收集本院成年健康體檢人員標(biāo)本520份，同時用商品化ABO血型反定型試劑紅細(xì)胞(人紅細(xì)胞)及自制試劑紅細(xì)胞做ABO血型鑒定，對比兩種試劑血型鑒定結(jié)果是否相符。

2 結(jié) 果

2.1自制反定型試劑紅細(xì)胞溶血情況 從第1～15天，各型自制試劑紅細(xì)胞，肉眼觀察試劑底部的紅細(xì)胞呈鮮艷紅色，上清液呈微黃色,清澈透明。16 d后,上清液出現(xiàn)輕度溶血,呈淺紅色。紅細(xì)胞推薄片顯微鏡下觀察，第1～15天，紅細(xì)胞呈正常的圓盤狀，均勻分布，無皺縮及其他異常情況。16 d后，少量紅細(xì)胞出現(xiàn)皺縮或碎片。通過隱血試紙條檢測的溶血情況結(jié)果(該隱血試紙條檢出限為0.1 g/L，1∶8稀釋陰性相當(dāng)于含量低于0.8 g/L)，見表1。

2.2自制反定型試劑紅細(xì)胞抗原穩(wěn)定性檢測結(jié)果 第1～9天A、B型試劑紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗A、抗B血清產(chǎn)生4+凝集強(qiáng)度，第10～15天A、B型試劑紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗A、抗B血清產(chǎn)生3+凝集強(qiáng)度，17 d后A、B型試劑紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗A、抗B血清產(chǎn)生2+凝集強(qiáng)度。而O型試劑紅細(xì)胞19 d內(nèi)與抗A、抗B血清未產(chǎn)生凝集反應(yīng)，見表2。

2.3自制反定型試劑紅細(xì)胞臨床應(yīng)用驗(yàn)證結(jié)果 520例成年健康體檢人員商品化試劑紅細(xì)胞與自制試劑紅細(xì)胞血型鑒定結(jié)果完全相符，見表3。

表3 自制反定型試劑紅細(xì)胞臨床應(yīng)用驗(yàn)證結(jié)果

3 討 論

現(xiàn)代輸血發(fā)展的啟動是由于ABO紅細(xì)胞血型系統(tǒng)的發(fā)現(xiàn),而ABO血型的準(zhǔn)確鑒定是開展臨床成分輸血的基礎(chǔ)。進(jìn)行ABO血型鑒定時，需通過已知抗A、抗B標(biāo)準(zhǔn)血清檢查紅細(xì)胞表面抗原成分(正定型)和已知的反定型試劑紅細(xì)胞來檢查血清中的抗體成分(反定型)，只有正、反定型結(jié)果相符的情況下，才能準(zhǔn)確判斷ABO血型。而當(dāng)正、反定型結(jié)果不相符時，須進(jìn)一步查找原因來明確血型[3]。

本文通過混合相同血型血袋上交叉合血小辮內(nèi)的血液來配制成反定型試劑紅細(xì)胞。因血袋上交叉配血小辮內(nèi)的血液與血袋內(nèi)的紅細(xì)胞懸液經(jīng)過了同樣的處理，其中包括獻(xiàn)血員篩查，如HBsAg、HCV、抗HIV、梅毒、ALT的檢測，故該自制試劑傳染性相對較少。同時，細(xì)胞保存液能有效地為細(xì)胞代謝提供能量，防止溶血，保持紅細(xì)胞活性[4]。在試劑穩(wěn)定性方面,從第1～15天，各型自制試劑紅細(xì)胞穩(wěn)定性較好，16 d后,出現(xiàn)少量紅細(xì)胞破壞現(xiàn)象。溶血情況從表1可以看出,各型試劑配制 16 d后，上清液游離血紅蛋白含量仍低于0.8 g/L，與其他相關(guān)文獻(xiàn)報道基本一致[5]。抗原穩(wěn)定性方面，從表2可以看出，試劑配制17 d后A、B型試劑紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗A、抗B血清產(chǎn)生2+凝集強(qiáng)度，而O型試劑紅細(xì)胞19 d內(nèi)與抗A、抗B血清不產(chǎn)生凝集反應(yīng)。從臨床應(yīng)用驗(yàn)證來看，520份健康成年體檢人員標(biāo)本,通過長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供的抗A、抗B血清做正定型鑒定，使用商品化試劑紅細(xì)胞與自制試劑紅細(xì)胞同時作反定型試驗(yàn)，520份標(biāo)本血型鑒定結(jié)果完全相符(100％)。

自制反定型試劑紅細(xì)胞細(xì)胞濃度較高,在臨床反定型應(yīng)用過程中,需吸取底層紅細(xì)胞,用無菌等滲生理鹽水洗滌3次，再稀釋至5％左右濃度后使用，保質(zhì)期為24 h[6]。從以上試驗(yàn)可以看出，通過該方法配制的反定型試劑紅細(xì)胞,在15 d有效期內(nèi)，試劑穩(wěn)定性、抗原穩(wěn)定性及臨床應(yīng)用效果較好[7]，15 d后，自制試劑溶血加重，抗原穩(wěn)定性下降，故本文建議將自制試劑的有效期控制在15 d內(nèi)。在日常應(yīng)用過程中，每天需通過抗A、抗B血清進(jìn)行抗原確認(rèn)及質(zhì)量控制，防止細(xì)菌生長或交叉污染。同時，為穩(wěn)定紅細(xì)胞正常功能及保證細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性，在試劑配制和使用過程中，要盡量減少機(jī)械損傷對紅細(xì)胞的破壞[8]。因該試劑配制方法無需特殊試劑、材料及儀器，操作簡便，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，故適合在基層醫(yī)院推廣。

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