丹參對哮喘患者外周血CD4+ CD25+調節性T細胞影響機制的研究

[摘要] 目的 觀察丹參對哮喘患者治療的療效，進一步探討其對哮喘患者外周血CD4+和CD25+調節性T細胞的影響機制。 方法 選取90例哮喘患者，采用隨機對照的研究方法，將90例支氣管哮喘患者隨機分為觀察組（常規治療+丹參）和對照組（常規治療）各45例，于治療前和治療后比較兩組患者治療的療效、肺功能的變化情況以及治療后兩組CD4+CD25+Treg的變化情況。 結果 經過治療后，觀察組的療效明顯優于對照組，兩組肺功能治療后均較治療前明顯改善，且觀察組較對照組改善更明顯，治療后兩組的CD4+CD25+Treg均較治療前明顯升高，且觀察組較對照組升高更明顯，差異有統計學意義（P < 0.05）。 結論 應用丹參治療支氣管哮喘療效確切，可明顯改善患者的肺功能，且分析其療效可能是通過調節CD4+CD25+Treg而發揮免疫作用機制而實現的。

[關鍵詞] 哮喘；丹參；外周血CD4+和CD25+調節性T細胞；肺功能

[中圖分類號] R562.25；R725.6 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2012）06-0004-02

The mechanism of salvia on peripheral blood CD4+ and CD25+ regulatory T cells in patients with asthma

LIU Xiaohong1 PAN Yan2

1.Department of Internal Medicine， Jiubao Community Health Center in Jianggan District， Hangzhou 310019， China; 2.Department of Respiratory Medicine， Fifth Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College， Zhejiang Province， Wenzhou 323000， China

[Abstract] Objective To explore the efficacy of salvia on treatment asthma， and further to exploreies mechanism on the peripheral blood CD4+ and CD25+ regulatory T cells. Methods All of 90 patients with bronchial asthma were randomly divided into two groups: observation group （conventional treatment and salvia） and control group （conventional therapy） of 45 patients， and before treatment and after treatment the treatment efficacy for patients， lung function changes， as well as changes of CD4+ CD25+ Treg after treatment were compared. Results After treatment， the efficacy of the observation group was better than the control group， after treatment， two groups lung function significantly improved than before treatment， and the observation group was improved more significantly than the control group， after treatment compared with before treatment， two groups CD4+ CD25+ Treg was significantly increased， and the observation group was increased more significantly than the control group; these indicators were compared and the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion Salvia treatment of bronchial asthma may significantly improve lung function， and its effect may be due to regulating CD4+ CD25+ Treg and playing a role in the immune system.

[Key words] Asthma; Salvia; Peripheral blood CD4+ and CD25+ regulatory T cells; Lung function

哮喘的發病機制目前尚不明確，多年來認為T輔助性細胞（Th1/Th2）失衡是哮喘發病的重要基礎[1]。隨著對T細胞研究的深入，調節性T細胞（Treg）在哮喘發病機制中的作用成為近年來研究的熱點之一。Treg屬于抑制性T細胞，起著對Th細胞反饋調節的作用。Treg包括CD4Tr、CD25Tr、Tr1、Th3、NKT等亞型，近年來研究顯示，CD4+CD25+調節性T細胞（CD4+CD25+Treg）是一種表型和功能特異的T細胞亞群，它在抑制自身免疫性疾病的發生，誘導機體免疫耐受機制中發揮著重要作用[2]，如CD4+CD25+調節性T細胞參與并影響了支氣管哮喘的發病機制的發生、發展過程，對調節性T細胞或其相關基因的干預成為治療支氣管哮的新方向。本研究旨在觀察丹參對哮喘患者治療的療效，進一步探討其對哮喘患者外周血CD4+CD25+調節性T細胞的影響機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2008年1月～2010年1月我院住院及門診已診斷的支氣管哮喘患者90例作為研究對象，符合中華醫學會呼吸病學分會哮喘學組制定的《支氣管哮喘防治指南》的診斷標準[3]，治療過程中均順利完成治療。其中男53例，女37例，年齡14～58歲，平均（41.5±2.4）歲。病程2.5～13年，平均（7.2±2.3）年。主要臨床表現為發作性呼氣性呼吸困難、胸悶咳嗽、咳黃色痰、發熱等；體檢胸部呈過度充氣樣，有廣泛的哮鳴音，呼氣音延長；治療及隨訪時患者均簽署了知情同意書。納入標準及排除標準：近2周無呼吸道感染；排除嚴重的心肝腎等疾病及心理障礙、哺乳及妊娠等因素。

1.2 分組

采用隨機對照的方法，隨機數字通過隨機數字表產生。將90例支氣管哮喘患者隨機分為觀察組和對照組各45例，兩組患者的年齡、性別、病程、哮喘情況等一般資料比較，經統計學處理顯示，差異無統計學意義（P ＞ 0.05）。見表1。

1.3 治療方法

治療前各組均測血常規、肝腎功能、血糖、心電圖及肺功能等，治療1周后復查上述指標。兩組患者均給予包括吸氧、β受體激動劑、激素、抗生素等常規治療。觀察組在常規治療的基礎上予以丹參注射液20 mL，加入5%葡萄糖注射液中靜滴，1次/d，1療程14 d。

1.4 檢測指標

①CD4+CD25+調節性T細胞的測定：采集哮喘患者外周靜脈血2 mL，肝素抗凝；取肝素抗凝的全血100 μL，加入CD4-FITC和CD25-PE單克隆抗體20 μL，IgG1-FITC和IgG1-PE作為同型對照，室溫避光反應30 min，加2 mL optiLyseC溶血素室溫下溶解紅細胞20 min[4]；PBS洗滌10 min，棄上清液后加2 mL PBS后用流式細胞儀檢測。FACS Calibur型流式細胞儀由美國 Becton Dickinson 公司提供。所有試劑均由蘇州生物基因有限公司提供。②肺功能檢測：應用JEAGER肺功能儀，分別于同一時間段（每日上午的9：00～11：00）測定用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼氣容積（FEV1）、FEV1占預計值的百分數（FEV1%）。

1.5 療效評判標準[3]

明顯好轉：呼吸困難、氣喘、胸悶、咳黃痰、發燒完全消失；好轉：呼吸困難、氣喘、胸悶明顯減輕，咳黃痰、發燒完全消失；無效：呼吸困難、氣喘無改善，發燒減退、 咳黃痰減少。

1.6 統計學方法

應用SPSS 12.0統計學軟件處理數據，計量資料采用（x±s）表示，治療前后采用配對t檢驗，計數資料比較應用χ2檢驗，P < 0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

經過治療后，觀察組的療效明顯優于對照組，兩組肺功能治療后均較治療前明顯改善，且觀察組較對照組改善更明顯，治療后兩組的CD4+CD25+Treg均較治療前明顯升高，且觀察組較對照組升高更明顯，兩組上述指標分別比較，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表2～4。

2.1 兩組治療后的療效比較

如表2所示。

2.2 研究組與對照組患者治療前后肺功能比較

如表3所示。

2.3 兩組治療前后CD4+CD25+Treg的變化比較

3 討論

在哮喘的發病機制中T細胞的活化及其細胞因子的分泌是調節氣道炎癥反應的中心環節，是造成哮喘難以控制的主要原因。目前認為 CD4+CD25+Treg在氣道免疫耐受的形成中發揮重要的調節功能，其在哮喘發病機制中的作用成為人們關注的方面之一。胸腺源性CD4+CD25+Treg源于胸腺的功能成熟的細胞群，Tregs在支氣管哮喘發病中的作用證據：最初在動物試驗中發現了 Tregs 抑制過敏反應的作用[5]。Lewkowi CH等[6]通過用抗CD25單抗去除小鼠體內的 CD4+CD25+調節性T細胞研究發現，CD4+CD25+調節性 T細胞對實驗性哮喘有保護作用，其機制可能是通過部分抑制樹突狀細胞的激活來實現的。現在的許多研究也認為，控制哮喘不能僅僅糾正 Th1/Th2平衡，而是應該抑制炎癥發生的機制，像CD4+CD25+Treg參與的免疫調節過程。因此，這提示我們可以通過改變 CD4+CD25+調節性T細胞的功能，使其成為新的治療靶目標之一，為哮喘的治療提供廣闊的前景[7-9]。

大量研究和臨床觀察均表明，使用丹參注射液可以明顯改善哮喘患者的呼吸功能，對哮喘患者副作用小，可以長期使用。丹參具有擴張血管、降低血壓、 降低血脂、增加血流量增強心肌收縮力、減慢心率等作用[10]。本組研究中，我們在常規治療的基礎上應用丹參注射液，結果顯示，治療后，觀察組的總有效率為93.33%，其療效明顯優于對照組，說明在常規治療基礎上加用丹參注射液治療支氣管哮喘可明顯提高療效，且可防治和減輕糖皮質激素的不良反應， 適于臨床常規治療，與李峰等[10]報道基本一致，且本研究兩組肺功能治療后均較治療前明顯改善，且觀察組較對照組改善更明顯。

另一方面，我們的研究結果顯示，治療后兩組的CD4+CD25+Tre均較治療前明顯升高，且觀察組較對照組升高更明顯，差異有統計學意義（P < 0.05），說明在常規治療的基礎上聯合丹參可有效治療哮喘，其機制可能與促進 CD4+CD25+Treg的產生有關，這個研究結果與薛克營[11]等研究報道基本一致。現代醫學研究發現：丹參為自由基的強力清除劑，復方丹參注射液尚可使哮喘的T 淋巴細胞百分率上升，還能增加毛細血管開放， 加快血液流速，改善微循環[12]。

綜上，應用丹參治療支氣管哮喘療效確切，可能明顯改善患者的肺功能，且分析其療效考慮可能是由于通過調節CD4+CD25+Tre而發揮免疫作用機制而實現的，但具體機制仍需擴大樣本數，進行進一步深入的研究。

[參考文獻]

[1] Chen X，Murakami T，Oppenheim JJ，et al. Differentiares Donse of murine CD4+CD25+ and CD4+CD25-T cel1s examethas0ne-induced cell death[J]. Eur J Immunol，2004，34859-34869.

[2] Kearley J，Barker JE，Robinson Ds，et a1. Reso1ution of airway inflammation and hyperreactivity after in vivo transfer of CD4+CD25+ regulatory T cells is interleukin 10 dependent[J]. J Exp Med，2005，20Z：1539-1547.

[3] 中華醫學會呼吸病學分會哮喘學組. 支氣管哮喘防治指南[J]. 中華結核和呼吸雜志，2003，26（3）：132-138.

[4] 馬祥，毛輝，梁宗安. CD4+CD25+調節性T細胞及其分子標記物與支氣管哮喘[J]. 中華哮喘雜志（電子版），2009，3（4）：49-50.

[5] 楊玉梅，趙楊，楊炯. CD4+CD25+Foxp3+Treg細胞在過敏性哮喘中的作用[J]. 四川醫學，2010，31（3）：392-393.

[6] Lewkowich IP，Herman NS，Schleifer KW，et al. CD4CD25 T cells protect against experimentally induced asthma and alter pulmonary dendritic cell phenotype and function[J]. J Exp Med，2005，202：1549-1561.

[7] 郭胤仕，許以平. 調節性T細胞及其與支氣管哮喘發病的關系[J]. 國際呼吸雜志，2007，27（7）：502-503.

[8] 譚楠，吳昌歸. 哮喘患者外周血CD4+CD25+調節性T細胞的表達及臨床意義[J]. 陜西醫學雜志，2007，36（1）：102-103.

[9] 李營營，馮學斌. CD4+CD25+調節性T細胞在支氣管哮喘中的研究進展[J]. 國際內科學雜志，2007，34（9）：545-546.

[10] 李峰，王峰，陳勇，等. 復方丹參注射液治療支氣管哮喘發作期23例[J]. 現代中西醫結合雜志，2002，11（16）：1560-1561.

[11] 薛克營，柯明耀，姜燕，等. 丹參注射液對哮喘患者的療效及CD4+CD25+調節性T細胞的影響[J]. 臨床肺科雜志，2011，16（1）：24-26.

[12] 呂健. 丹參的藥理及臨床應用[J]. 吉林醫學信息，2011，27（1-2）：32-33.

[13]

（收稿日期：2011-12-19）