蘋果褪綠葉斑病毒外殼蛋白基因的原核表達及抗血清制備
2012-01-01 00:00:00耿超牟安麗等
果樹學報 2012年5期
摘要： 【目的】為了制備蘋果褪綠葉斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV）的抗血清，【方法】將ACLSV外殼蛋白（Coat protein，CP）基因克隆到原核表達載體pEHISTEV和pEHISEGFPTEV，轉化大腸桿菌Rosetta，切膠回收誘導表達的CP融合蛋白免疫新西蘭長耳兔，制備ACLSV的抗血清。【結果】利用原核表達載體pEHISTEV和pEHISEGFPTEV在Rosetta中分別表達出了分子質量為25 ku和55 ku的ACLSV CP融合蛋白。切膠回收25 ku的融合蛋白免疫新西蘭長耳兔。經ELISA測定，所制備的抗血清效價為1∶1 024，Western blot及組織印跡分析表明抗血清能與ACLSV CP發生特異性的免疫反應。【結論】該血清特異性強，效價高，可用于蘋果葉片、果實和枝條等樣品中ACLSV的檢測。
關鍵詞： 蘋果褪綠葉斑病毒； 外殼蛋白基因； 原核表達； 抗血清； 組織印跡分析
中圖分類號：S661.1 文獻標志碼：A 文章編號：1009—9980（2012）05—0755—04
