生物微矩陣(芯片)方法檢測(cè)100例幽門螺桿菌抗體的臨床分析

作者單位：161000 齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院

通訊作者：田淑梅

【摘要】 目的 生物微矩陣芯片技術(shù)檢測(cè)患者血清中幽門螺桿菌（Hp）毒素相關(guān)蛋白（CagA）、空泡毒素（VacA）及尿素酶抗體（Ure），快速提供胃十二指腸疾病診斷的依據(jù)。方法 對(duì)100例胃病患者留取血清，用生物微矩陣芯片方法檢測(cè)。結(jié)果 CagA陽性為55%，VacA陽性為29%，Ure陽性為16%。結(jié)論 芯片法在幽門螺桿菌感染的診斷、篩查和防治中具有重要意義。

【關(guān)鍵詞】 生物微矩陣芯片； 幽門螺桿菌； 空泡毒素； 毒素相關(guān)蛋白； 尿素酶

胃十二指腸疾病與幽門螺桿菌（Helicobacter Pyloyi，Hp）感染的關(guān)系密切，胃黏膜或胃液中幽門螺桿菌的檢測(cè)可作為診斷和治療的重要依據(jù)。Hp感染呈全球性分布，與消化性潰瘍、慢性胃炎、胃癌及MAK 淋巴瘤的發(fā)生率密切相關(guān)^［1］。在我國人群中，幽門螺桿菌的感染率已達(dá)50%～60%^［2］，西方國家大約為30%～50%。在中國，其感染率的比例隨年齡增長而提高。自從1983年Warren等人首次發(fā)現(xiàn)Hp以來，國內(nèi)外關(guān)于Hp的研究甚快，Hp現(xiàn)已被公認(rèn)為是上消化道疾病的重要因素。芯片法檢測(cè)幽門螺桿菌操作簡單，樣品用量少，具有快速、準(zhǔn)確、 特異性高等優(yōu)點(diǎn)。

1 材料和方法

1.1 試劑與儀器 生物芯片檢測(cè)儀，批號(hào)：LE-01-B，西安聯(lián)爾生物技術(shù)有限公司提供。幽門螺桿菌蛋白芯片檢測(cè)試劑，批號(hào)：SXA120401，由西安聯(lián)爾生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 標(biāo)本 隨機(jī)收集本院2010年8月胃病患者的血清樣本100例，用生物芯片檢測(cè)儀，以上標(biāo)本均排除溶血和脂血。

1.3 方法 幽門螺桿菌蛋白芯片檢測(cè)步驟如下：（1）在芯片上片盒窗口內(nèi)滴加4滴試劑A，使膜表面完全浸濕；（2）待完全滲入后，室溫放置1 min，加待檢血清100 μl；（3）待血清完全滲入后，再滴加6滴試劑B；（4）待試劑B完全滲入后，滴加10滴試劑C；（5）待試劑C完全滲入后，最后滴加6滴試劑D；（6）反應(yīng)完畢后30 min內(nèi)，將芯片放入芯片閱讀系統(tǒng)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 在100例胃病患者中，蛋白芯片法檢測(cè)出CagA陽性為55%，VacA陽性為29%，Ure陽性為16%。

2.2 CagA（+），VacA（+）， Ure（+）三者都陽性屬于Ⅰ型Hp感染，毒性強(qiáng)，與十二指腸炎、十二指腸潰瘍及胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，可能正處在發(fā)病期應(yīng)立即檢查治療。

2.3 CagA（+），VacA（-）， Ure（+）或CagA（-），VacA（+）， Ure（+），其中兩者陽性屬于中間型Hp感染。毒性較強(qiáng)，與消化性潰瘍等密切相關(guān)，部分功能性消化不良亦與之相關(guān)。發(fā)病概率較大，應(yīng)積極配合臨床治療，小心保養(yǎng)胃腸道。

2.4 CagA（-），VacA（-）， Ure（+）屬于Ⅱ型Hp感染。毒性弱，主要與慢性淺表性胃炎的發(fā)生相關(guān)，可觀察治療，注意保養(yǎng)胃部。

2.5 CagA（-），VacA（+），Ure（-）或CagA（+），VacA（+）， Ure（-）比例較低，人群中較為少見，建議積極觀察，定期復(fù)查。

2.6 CagA（-），VacA（-）， Ure（-），無Hp感染。

3 討論

3.1 細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A（Cytotoxin associated gene A，CagA） CagA蛋白具有很強(qiáng)的免疫原性，能誘導(dǎo)宿主胃黏膜局部產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，尤其是IL-8，進(jìn)而通過促進(jìn)中性粒細(xì)胞的聚集和活化啟動(dòng)炎癥過程。在胃黏膜表面，所有消化道潰瘍的患者和60%的功能性消化不良患者均產(chǎn)生CagA抗體，血清中檢測(cè)到CagA為幽門螺桿菌感染的一個(gè)高度特異性指標(biāo)。CagA與幽門螺桿菌毒力呈高度相關(guān)，十二指腸潰瘍患者分離的菌珠90%呈CagA陽性，而淺表性胃炎患者CagA陽性僅為50%～60%，100例胃病患者血清中CagA陽性占55%，與文獻(xiàn)資料相符。

3.2 毒素A蛋白（Vacuolating cytotoxin A，VacA） VacA陽性為29%，VacA因其可致細(xì)胞空泡變性而得名，與消化性潰瘍密切相關(guān)。在小鼠動(dòng)物模型中，純化的VacA能誘導(dǎo)小鼠形成胃潰瘍。CagA和VacA抗體的聯(lián)合檢測(cè)，有利于幽門螺桿菌毒珠和非毒珠的分型，從而判斷患者的感染類型和預(yù)后。

3.3 尿素酶（Ure） Ure陽性為16%，尿素酶是幽門螺桿菌主要抗原之一，所有的野生型幽門螺桿菌均產(chǎn)生尿素酶。它可以引起患者產(chǎn)生IgG和IgA，檢測(cè)血清中相應(yīng)抗體可作為幽門螺桿菌感染的依據(jù)之一。

綜上所述，幽門螺桿菌是慢性胃炎、消化性潰瘍的主要致病因素，與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)^［3～5］。我國人群感染率高達(dá)50%～80%，防治任務(wù)十分艱巨。幽門螺桿菌蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)利用基因重組技術(shù)、斑點(diǎn)免疫滲濾技術(shù)和微陣列技術(shù)，為快速、方便、準(zhǔn)確地檢測(cè)幽門螺桿菌提供了一個(gè)科學(xué)先進(jìn)的方法和手段，是幽門螺桿菌檢測(cè)快速診斷的一大突破。對(duì)Hp毒素抗體的測(cè)定主要是采用ELISA方法和免疫印跡法，但其操作繁瑣費(fèi)時(shí)，往往不能滿足臨床的需要。生物芯片的概念來自計(jì)算機(jī)芯片，進(jìn)展迅速。與傳統(tǒng)的試驗(yàn)方法相比，生物芯片具有高通量、大規(guī)模、高度并行性、快速高效及高靈敏度的特點(diǎn)。蛋白芯片研究的對(duì)象是蛋白質(zhì)，其原理是對(duì)固相載體進(jìn)行特殊的化學(xué)處理，再將已知的蛋白分子固定其上（如酶、抗原、抗體、受體等）。根據(jù)這些生物分子的特性，捕獲能與之特異性結(jié)合的待測(cè)蛋白（存在于血清、血漿、間質(zhì)液、尿等），經(jīng)洗滌、純化，再進(jìn)行確認(rèn)和生化分析。幽門螺桿菌蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)是對(duì)傳統(tǒng)的免疫學(xué)檢測(cè)手段的發(fā)展，在幽門螺桿菌感染的診斷、篩查和防治中具有重要意義，是一種值得推廣的新型檢測(cè)技術(shù)。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 劉曉峰，尚瑞蓮，孫自勤.幽門螺桿菌研究歷程的啟示.醫(yī)學(xué)與哲學(xué)，2006，27（1）:69-70.

［2］ 陳顴珠.內(nèi)科學(xué).第4版.北京:人民衛(wèi)生出版，2001：1738.

［3］ 童明宏，孫晨光.幽門螺桿菌感染及其毒力因子和胃十二指腸疾病關(guān)系的研究.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2002，17（2）:96-98.

［4］ 童明宏，孫晨光.幽門螺桿菌感染、P53基因突變與胃癌的相關(guān)性研究.上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2003，18（5）:393-395.

［5］ Hoda M. Helicobacter pylori in dental workers: A seroepide miology study.Am J Gastroentero，1992，87（12）:1728-1731.

（收稿日期：2011-04-01）

（本文編輯：陳丹云）