SLE患者血清中MMP-9及TGF-β₁水平測定及臨床意義

【摘要】 目的 探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者血清中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）及轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β1）表達特點及臨床意義。方法 用雙抗體夾心ELISA法檢測和比較分析64例SLE患者和25名健康人血清TGF-β1及MMP-9的水平。結(jié)果 SLE患者組血清MMP-9和TGF-β1水平比健康對照組明顯降低（P<0.05）；相關(guān)性分析顯示TGF-β1與MMP-9成正相關(guān)（r=0.554，P=0.000）?；顒悠赟LE血清MMP-9低于緩解期，而TGF-β1和緩解期水平差異無顯著性（P＞0.05），兩者與SLEDAI評分無明顯相關(guān)性；血清MMP-9和TGF-β1水平與PLT成正相關(guān)（P＜0.05），而與其他指標(biāo)：ESR、CRP、BUN、C3、C4等無明顯相關(guān)。結(jié)論 MMP-9與TGF-β1或兩者的相互作用參與SLE的發(fā)病機制，血清MMP-9水平可作為觀察SLE活動程度的指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 系統(tǒng)性紅斑狼瘡； 轉(zhuǎn)化生長因子-β； 金屬蛋白酶-9

Detection of serum matrix metalloproteinase-9 and transforming growth faction-β1 in patients with systemic lupus erythematosus and its clinical significance XIE Li-hu，CHEN Zhan-rui，ZHAO Cheng，et al.Guangxi Medical University First Affiliated Hospital，Nanning 530021，China

【Abstract】 Objective To detect the level of serum matrix metalloproteinase-9 （MMP-9） and transforming growth faction-β1（TGF-β1）in patients with systemic lupus erythematosus （SLE） and investigate its clinical significance.Methods Serum levels of MMP-9 and TGF-β1were measured by ELISA in 54 patients with SLE and 25 healthy controls.Results The serum levels of MMP-9 and TGF-β1 were lower in SLE patients than in the healthy controls;In SLE patients，a positive correlation was found between TGF-β1 and MMP-9.The serum levels of MMP-9 were lower in active SLE patients than in inactive SLE patients，but no significant differences in serum TGF-β1 was observed between active SLE patients and inactive SLE patients;The serum levels of MMP-9 and TGF-β1 were no correlation to SLEDAI;A significantly positively correlation of MMP-9 and TGF-β1 in SLE patients with PLT concentrations was foud，whereas，the MMP-9 and TGF-β1serum levels were no correlated with ESR、CRP、BUN、C3、C4.Conclusion TGF-β1 and MMP-9 might be involved in the pathogenesis of SLE，and MMP-9 could reflect the activity of the disease.

【Key words】 Systemic lupus erythematosus； Transforming growth faction-β； Matrix metalloproteinase-9

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系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種典型的異質(zhì)性自身免疫性疾病，其主要表現(xiàn)為免疫系統(tǒng)的過度激活和紊亂，產(chǎn)生大量的自身抗體、細胞外基質(zhì)（ECM）大量沉積繼而引起組織器官損傷。在其發(fā)病過程中各類細胞因子、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）在維持免疫耐受、保持ECM平衡中發(fā)揮重要的作用，MMP-9作為MMPs中一種主要功能是降解ECM，使血管基底膜完整性被破壞，可能參與血管炎的過程，而TGF-β1是細胞因子中重要一員，有較其他因子更強的免疫抑制作用，同時可抑制MMPs表達和增加ECM的沉積，參與SLE的發(fā)病。近年來研究發(fā)現(xiàn)，SLE患者血清中TGF-β1及MMP-9的水平表達異常。本文應(yīng)用ELISA法檢測SLE患者血清中MMP-9及TGF-β1的水平，并結(jié)合臨床資料進行相關(guān)分析，探討二者在SLE的發(fā)病機制中的作用及其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年3月~2010年12月廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院的SLE患者血清標(biāo)本64例，其中男10例，女54例，年齡15～78歲，平均（36.20±14.81）歲。診斷均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)［1］，并根據(jù)SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI-2000）［2］對患者的疾病活動程度進行評分，≥9分者為活動組，≤8分者為緩解組［3］，活動組38例，緩解組26例。對照組25例為本院健康體檢者，男5例，女20例，年齡16～53歲，平均（33.88±10.15）歲，兩組性別和年齡等方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 標(biāo)本采集 抽取清晨空腹靜脈血3 ml，離心分離血清，-80 ℃凍存待測。患者血清在入院后采集，健康人標(biāo)本在檢測前采集。

1.3 標(biāo)本檢測 嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，用雙抗體夾心ELISA方法檢測血清MMP-9和TGF-β1的水平。檢測試劑盒均購自美國R＆D Systems公司，主要儀器為Thermo MK3型酶聯(lián)免疫檢測儀。

1.4 其他項目檢測 入院后采集靜脈血行血常規(guī)、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、C3、C4、ESR、C反應(yīng)蛋白（CRP）、抗ds-DNA定量等檢測，收集24 h尿行蛋白定量檢測。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)處理，血清MMP-9和TGF-β1水平均為偏態(tài)計量資料，用中位數(shù)和四分位數(shù)（25%，75%）表示，其組間差異比較用Mann-Whitney U檢驗，與SLEDAI評分以及臨床實驗指標(biāo)的相關(guān)性用Spearman秩相關(guān)分析方法，顯著性檢驗水平α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 SLE患者組與對照組，活動組和緩解組TGF-β1、MMP-9水平 SLE患者組MMP-9、TGF-β1水平較正常對照組明顯降低（P＜0.05）；相關(guān)性分析顯示TGF-β1與MMP-9成正相關(guān)（r=0.554，P=0.000）；活動組SLE患者MMP-9較緩解組降低（P＜0.05），而TGF-β1在兩組間無明顯差異（P＞0.05）；相關(guān)性分析顯示TGF-β1、MMP-9與SLEDAI評分無相關(guān)性（r=-0.071，P=0.576；r=-0.144， P=0.257）；見表1。2.2 MMP-9、TGF-β1與實驗室指標(biāo)相關(guān)性 TGF-β1、MMP-9與PLT成正相關(guān)（P＜0.01）；MMP-9及TGF-β1與Hb、WBC、24 h Upro、BUN、Scr、C3、C4、ESR、CRP、抗dsDNA均無相關(guān)性（P＞0.05），見表2。

3 討論

在SLE的發(fā)病過程中炎性細胞浸潤、血管炎性損傷、ECM代謝紊亂和異常沉積是重要的環(huán)節(jié)。MMP-9是MMPs的家族重要成員，主要功能是降解ECM，使血管基底膜的完整性被破壞，在炎癥細胞和腫瘤的移行、浸潤、組織破壞中起著重要作用。有研究證明［4，5］MMP-9通過降解血管基底膜的主要成分，使內(nèi)皮細胞通透性增加，有利于炎性細胞侵入血管壁導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，并可調(diào)節(jié)細胞因子的活性，從而多方面參與SLE的發(fā)病。

目前關(guān)于SLE患者血清MMP-9水平報道并不一致，有臺灣學(xué)者報道SLE患者外周血中MMP-9較對照組明顯升高達4倍，提示MMP-9與SLE發(fā)病有關(guān)［6］。而國內(nèi)劉暘等［7］報道，SLE血清MMP-9水平明顯下降，與SLEDAI積分值呈負相關(guān)。Robak等［8］發(fā)現(xiàn)SLE患者的MMP-9及TIMP-1水平明顯低于對照組，且活動組水平明顯低于非活動組。本次研究結(jié)果顯示，SLE患者MMP-9水平顯著低于對照組，且活動組MMP-9明顯低于緩解組，與劉暘、Robak報道相同。說明了MMP-9可作為疾病活動的一個新的敏感性指標(biāo)。但與劉暘、Robak報道不同的是SLE血清MMP-9水平與病情活動指數(shù)（SLEDAI）、相關(guān)免疫指標(biāo)未見明顯相關(guān)，故其不能作為反映疾病活動動態(tài)變化的指標(biāo)。SLE患者血清MMP-9水平降低的原因可能為：（1）特異性調(diào)節(jié)。MMP-9受到特異性抑制因子（TIMP-1）調(diào)節(jié)，抑制MMP-9表達。（2）轉(zhuǎn)錄抑制。IL-10，IFN- γ等細胞因子能抑制MMP-9基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達，SLE患者血清細胞因子IL-10、IFN- γ等水平均升高，致使MMP-9 水平降低。（3）激活抑制。在SLE患者中纖溶酶原激活抑制因子-1（PAI-I）表達增強，使纖溶酶（PA）激活MMP-9受限。

TGF-β1是一種免疫抑制因子，在體外抑制大多數(shù)T、B淋巴細胞的增殖和分化［9］。正常機體內(nèi)，它與眾多免疫細胞和細胞因子共同作用維持機體的免疫平衡。在SLE患者血體內(nèi)TGF-β1的降低使得淋巴細胞的激活增加，導(dǎo)致致敏T淋巴細胞和多種自身抗體的產(chǎn)生，發(fā)生自身免疫反應(yīng)。姜有金等［10］通過比較SLE患者和健康對照者血清TGF-β1的水平，發(fā)現(xiàn)活動組水平明顯低于健康對照組，也低于穩(wěn)定組，且與SLEDAI評分正相關(guān)，提示TGF-β1在SLE發(fā)病中起一定作用，并對判斷病情活動度可能有臨床意義。張江淮等［11］報道SLE患者血清TGF-β1低于正常組，但活動組和緩解組沒有差別，與SLEDAI也無相關(guān)性。

本實驗研究結(jié)果顯示，SLE患者組TGF-β1水平較對照組明顯降低，但進一步檢測活動組與緩解組無明顯差別，與SLEDAI評分亦無相關(guān)性，與張江淮結(jié)果一致，而與姜有金等結(jié)果部分不同，提示其在SLE發(fā)病中具有一定作用，但是對判斷病情活動度可能沒有明顯意義。同時，筆者的研究結(jié)果并沒有發(fā)現(xiàn)TGF-β1表達水平與臨床常用檢驗指標(biāo)如抗ds-DNA量、24 h尿蛋白定量、補體等存在明顯相關(guān)性，提示TGF-1的作用并沒有疾病特異性， 可能只是SLE發(fā)病的一個因素。SLE患者血清中TGF-β1下降的原因考慮主要有以下因素：（1）在免疫系統(tǒng)中，多種免疫細胞可產(chǎn)生TGF-β1，但是以單核細胞和NK細胞為主，而SLE外周血淋巴細胞尤其是NK細胞產(chǎn)生活性TGF-β1的能力下降。（2）人類血小板能生成較多的TGF-β1，而SLE患者很多都有PLT降低，有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)SLE患者血清TGF-β1水平與PLT數(shù)量呈正相關(guān)［12］，與筆者研究的結(jié)果（r=0.693，P＜0.01）是一致的。（3）有文獻報道，TGF-β1與多種細胞因子如IFN-γ、IL-1、TNF-α等有拮抗作用，SLE患者血清中這些因子的活性均升高，使TGF-1的含量下降［13］。

MMP-9可降解ECM，TIMP-1為其特異性抑制劑，兩者的異?？梢餎CM沉積異常，而TGF-β1可引起ECM分泌增加，組織纖維化，同時在轉(zhuǎn)錄水平可抑制MMP-9及促進TIMP-1表達從而引起ECM大量沉積，根據(jù)報道TGF-β1與MMP-9在組織纖維化過程中應(yīng)為負相關(guān)關(guān)系［14］，但是筆者的實驗發(fā)現(xiàn)TGF-β1與MMP-9為正相關(guān)，主要可能是以下原因引起：（1）在SLE中MMP-9不光受到TGF-β1的調(diào)控，多種細胞因子均可上調(diào)或下調(diào)TGF-β1、MMP-9。（2）兩者在血清中和組織中的分布不平衡。（3）兩者均和血小板成正相關(guān)，而血小板水平受SLE免疫反應(yīng)的影響同時可導(dǎo)致TGF分泌減少。以上原因可能影響兩者相關(guān)性，但具體兩者在SLE患者中的相互關(guān)系需要進一步研究。 

綜上所述，本研究通過對TGF-β1及MMP-9檢測，結(jié)果顯示，SLE患者血清TGF-β1、MMP-9降低，提示TGF-β1與MMP-9或者兩者的相互作用參與SLE血管炎、免疫沉積的發(fā)病過程，且提示MMP-9可作為監(jiān)測SLE活動性的一個指標(biāo)，為今后SLE治療提供新的研究方向。

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（收稿日期：2011-08-25）

（本文編輯：郎威）