新型藏藥吉堪明目滴眼液的質量標準研究

基金項目：青海省重點科技攻關項目，新型藏藥“吉堪明目液”開發研究（項目編號：2008-N-137）

作者單位：810003 青海省藏醫藥研究院藥物研究所

通訊作者：杜連平

【摘要】 目的 建立藏成藥吉堪明目液的質量標準。方法 采用薄層色譜法對制劑中訶子、紅花進行定性鑒別；采用高效液相色譜法對制劑中吉堪（小檗膏）的成分鹽酸小檗堿進行定量測定。結果 可鑒別訶子、紅花，陰性對照無干擾，專屬性強。鹽酸小檗堿在0.0722～0.433 μg范圍內呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率（n=6）為98.3%，RSD為1.7%。結論 該方法簡便、準確、重復性好，可作為該制劑質量控制方法。

【關鍵詞】 吉堪明目液； 質量標準； TLC； HPLC； 鹽酸小檗堿

Study on quality standard for Tibetan Medicine of JiKan Eye drops DU Lian-ping，MA Wen-jun，SUN Yue-ning，et al.The Drug Research Institute of Tibetan Medicine Research Institute of Qinghai，Xining 810003，China

【Abstract】 Objective To establish the quality standard for Tibetan Medicine of Jikan eye drops.Methods Fructus Chebulae、Flos Carthami were identified by TLC;The content of Berberine hydrochloride in Berberis kansuensis Schneid Extract was determined by HPLC.Results Fructus Chebulae、Flos Carthami could be identified by TLC.The concentration of Berberine hydrochloride was linear in the range of 0.0722～0.433 μg，r=0.9999，The average recovery rate was 98.3%，RSD was 1.7%.Conclusion These methods were simple，accurate，repeatability and could control the quality of preparation effectively.

【Key words】 Jikan eye drops； Quality standard； TLC； HPLC； Berberine hydrochloride

吉堪明目液由吉堪（小檗膏）、紅花、冰片、熊膽粉、麝香等組成，具有消炎止痛的功效，臨床用于目赤癢痛、流淚、沙眼等眼病。公元16世紀著名藏醫藥學家措麥堪欽釋迦旺久在《四部醫典》收載的原配方基礎上增加藥物，完善了現用的小檗眼藥膏并收載于其編著的《醫療精要簡介》中。后來云旦加措將其載入著作《藏醫臨床札記》（藏文版），藏名為“目曼接堪”。《中華人民共和國衛生部藥品標準#8226;藏藥》87、92和95版也都收錄了該處方［1］。為了有效地控制吉堪明目液的質量，進行了定性定量研究，制定了訶子、紅花的薄層鑒別方法及鹽酸小檗堿高效液相色譜定量測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 KQ-250型超聲波清洗器；島津LC-20 AT高效液相色譜儀。

1.2 試藥 吉堪明目液由青海省藏醫藥研究院藥物研究所工藝室提供，批號：20100901，20100902，20100903；鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-200208，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；沒食子酸對照品（批號：110831-200302，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；紅花對照藥材（批號：供鑒別用，中國藥品生物制品檢定所）；硅膠G板（青島海洋化工廠）；雙蒸餾水（自制）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 訶子薄層色譜鑒別［2］ 取本品10 ml，置分液漏斗中，用乙酸乙酯提取2次，每次20 ml，收集乙酸乙酯液移至蒸發皿中，在水浴上蒸干，殘渣用2 ml甲醇溶解，作為供試品溶液；另取沒食子酸對照品適量，用甲醇制成每1 ml含0.1 mg的對照品溶液。吸取上述2種溶液各10 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（8∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，應顯相同的藍黑色斑點。見圖1。

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1、訶子對照藥材，2~4、樣品，5、陰性對照

2.1.2 紅花薄層色譜鑒別［2，3］ 取本品3 ml，加80%丙酮10 ml，密塞，振搖20 min，靜置，吸取上清液，作為供試品溶液。另取紅花對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取供試品溶液10 μl，對照藥材溶液5 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-水（4∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，應顯相同顏色的斑點。見圖2。

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1、紅花對照藥材，2~4、樣品，5、陰性對照

2.2 含量測定［2］

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1 mol/L磷酸溶液(65∶36)（每100 ml中加十二烷基硫酸鈉0.1 g）為流動相；檢測波長為265 nm；流速1.0 ml/min；理論板數按鹽酸小檗堿峰計算應不低于5000。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品4.51 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即為對照品儲備液。精密吸取此儲備液2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得對照品溶液。

2.2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取本品2.0 ml，置10 ml容量瓶中，加甲醇：鹽酸（100∶1）溶液約8 ml，超聲處理40 min，放至室溫，用甲醇：鹽酸（100∶1）溶液稀釋至刻度，用0.45 um濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.2.2.3 陰性對照液的制備 取除去吉堪（小檗膏）的其他藥材適量，按處方比例依照吉堪明目液的制備工藝和供試品制備方法，制成陰性對照溶液。

2.2.3 陰性干擾實驗 陰性樣品在與對照品色譜峰相應的位置上無吸收峰。說明處方中其它成分對測定結果無影響。見圖3。

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上：鹽酸小檗堿對照品；中：吉堪明目液樣品；下：吉堪明目液陰性對照

2.2.4 提取方法考察 對樣品采取不同的制備方法進行處理，結果以超聲處理40 min效果最好，可消除對所有待測組分的干擾并且含量（以鹽酸小檗堿計）較高。結果見表1。

2.2.5 線性關系實驗 精密吸取對照品溶液2 μl、4 μl、6 μl、8 μl、10μl、12 μl注入液相色譜儀測定，按2.2.1項下的色譜條件測定峰面積，以進樣量為橫坐標（X），以峰面積的積分值為縱坐標(Y)繪制標準曲線。得鹽酸小檗堿回歸方程為Y=175793.26X+31218.24，r=0.9999。結果表明，在上述色譜條件下，鹽酸小檗堿在0.0722～0.433 μg范圍內呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度實驗 吸取2.2.2.1項下制備的對照品溶液10 μl，在上述色譜條件下連續進樣6次，測定峰面積，結果對照品的RSD為0.31%（n=6），說明儀器性能良好。

2.2.7 穩定性實驗 吸取2.2.2.2項下制備的供試品溶液10 μl，于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h進樣，測定峰面積，結果供試品的RSD為0.51%（n=5），說明測定時間內供試品穩定。

2.2.8 重復性實驗 取同一批號樣品5份，分別按樣品溶液制備法制備，測定其鹽酸小檗堿峰面積值，其結果樣品中鹽酸小檗堿平均含量為0.033 mg/ml，RSD為1.53%（n=5），表明分析方法精密度良好。

2.2.9 回收率實驗 精密吸取已知含量的樣品6份，分別精密加入低（17.1 μg/ml）、高(24.1 μg/ml)兩個梯度的鹽酸小檗堿對照品各1.0 ml，按樣品制備工藝和樣品制備方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定，計算回收率。結果見表2。

2.2.10 樣品的測定結果 按上述色譜條件，依法測定3批樣品中鹽酸小檗堿的含量，結果見表3。

3 討論

本文采用TLC法對吉堪明目液中熊膽、麝香及訶子所含的沒食子酸、紅花進行了薄層鑒別，選擇的展開劑主要參照藥典方法，實驗結果表明，訶子所含的沒食子酸、紅花分離效果好，重復性好，可作為定性鑒別的方法；方中麝香、熊膽可能由于量少等原因，斑點不明顯，效果不好，因此，未將其列入正文。

吉堪（小檗膏）為吉堪明目液的主要成分之一，鹽酸小檗堿為吉堪的主要活性成分。本文以鹽酸小檗堿作為含量測定指標，可用于吉堪明目藥液的質量控制。試驗結果表明鹽酸小檗堿的提取方法簡便，制劑中其他成分對鹽酸小檗堿峰不產生干擾，而且與其他成分的色譜峰分離良好。本法具有回收率高、精密度好、重現性好、分析快速等優點，可以有效地控制產品的質量。

參 考 文 獻

［1］ 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準#8226;藏藥［S］.1995：266.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［S］.北京：化學工業出版社，2005.

［3］ 徐綏緒，邱珊，張士杰.紅花抗炎成分的有效研究［J］.沈陽藥學院學報，1983，17（3）:48.

（收稿日期：2011-10-12）

（本文編輯：郎威）