TGF-α在結(jié)腸癌組織的表達(dá)及臨床意義

【摘要】 目的 轉(zhuǎn)化生長因子α（TGF-α）是細(xì)胞因子家族中發(fā)現(xiàn)較早的一類生長因子，參與調(diào)節(jié)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞生長和分化促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)DNA合成，可致細(xì)胞惡性變。本研究通過檢測結(jié)腸癌患者組織中TGF-α的表達(dá)，旨在探討TGF-α在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床治療的關(guān)系。方法 選取本院2005年9月~2010年9月手術(shù)切除后的結(jié)腸癌組織石蠟標(biāo)本60例，選取結(jié)腸鏡下慢性結(jié)腸炎活檢標(biāo)本60例作為對照。兩批標(biāo)本均進(jìn)行連續(xù)切片并行免疫組織化學(xué)染色檢測TGF-α。用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果 TGF-α在慢性結(jié)腸炎組不表達(dá)，在60例結(jié)腸癌中共43例陽性表達(dá)，陽性率為71.6%，結(jié)腸癌組織的陽性率明顯高于慢性結(jié)腸炎組織，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義。TGF-α在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)與結(jié)腸癌的臨床病理分期密切相關(guān)。結(jié)論 TGF-α在結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，參與了結(jié)腸癌的形成，且與結(jié)腸癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。對評價結(jié)腸癌的進(jìn)展程度、有無轉(zhuǎn)移和預(yù)后有一定的參考價值，為治療方案的選擇提供了臨床依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)腸癌； TGF-α

TGF-α expression in colon cancer and its clinical significance CAO Feng-jun， HUANG Dong-li，JIANG Wei-ming.Changyi Peoples Hospital in Shandong Province， Changyi 261200，China

【Abstract】 Objective Transforming growth factor α (TGF-α) was a cytokine family discovered a class of early growth factors involved in regulating normal cell and tumor cell growth and differentiation to promote cell DNA synthesis，could cause m alignant change.The detection of colon cancer tissue by TGF-α expression，to investigate the TGF-α expression in colon cancer and the relationship between the clinical treatment of colon cancer.Methods Shandong Changyi Peoples Hospital 2005.9-2010.9 of colon cancer after surgical resection specimens of 60 cases of paraffin，selected colonoscopy biopsy specimens of 60 cases of chronic colitis as controls.Two groups of specimens were examined for both parallel immunohistochemical staining TGF-α.SPSS11.5 statistical software with data processing，P <0.05 was considered statistically significant.Results TGF-α was not expressed in the chronic colitis group，60 cases of colon cancer in 31 patients with positive expression of the CPC， the positive rate was 71.6%， colon cancer tissue were significantly higher than that of chronic colitis， the difference was statistically Significance. And TGF-α expression in colon cancer and colon cancer are closely related to clinical staging.Conclusion TGF-α in the development of colon cancer play an important role in the formation of colon cancer and colon cancer invasion，metastasis and prognosis of relations.Evaluation of the extent of the progress of colon cancer，metastasis and prognosis of some reference value for the choice of treatment provides a clinical basis.

【Key words】 Colon cancer; TGF-α



目前研究認(rèn)為，結(jié)腸癌發(fā)病是一個多因素、多步驟、多基因參與的復(fù)雜病理過程，涉及到多種癌基因、DNA修復(fù)基因、生長因子/受體等的變化。TGF-α是表皮生長因子(EGF)家族的重要成員。結(jié)腸黏膜癌前病變與TGF-α過表達(dá)有關(guān)，提示TGF-α與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。本研究采用免疫組化法檢測TGF-α在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)，并探討結(jié)腸癌的發(fā)生及臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，進(jìn)一步明確結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機(jī)制，為結(jié)腸癌的臨床診斷和治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇筆者所在醫(yī)院2005年9月~2010年9月手術(shù)切除后的結(jié)腸癌組織石蠟標(biāo)本60例，選取結(jié)腸鏡下慢性結(jié)腸炎活檢標(biāo)本60例作為對照。兩批標(biāo)本均進(jìn)行連續(xù)切片并行免疫組織化學(xué)染色檢測TGF-α。其中，兩類標(biāo)本均為男39例，女21例。結(jié)腸癌標(biāo)本組≥60歲34例，<60歲26例，平均年齡58.56歲；慢性結(jié)腸炎標(biāo)本組≥60歲39例，<60歲21例，平均年齡56.32歲。所選結(jié)腸癌病人術(shù)前均未行放化療，并且排除結(jié)腸癌家族史。病理分型、分級和病變范圍的確定以手術(shù)后病理檢查結(jié)果為依據(jù)，根據(jù)手術(shù)中所見記錄腫瘤部位、大小、大體類型、漿膜受侵犯及器官轉(zhuǎn)移情況。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）關(guān)于結(jié)腸癌TNM分期法進(jìn)行臨床分期。

1.2 實驗器材及試劑 Olympus XQ-240電子內(nèi)鏡、Olympus病理圖像采集分析系統(tǒng)、病理組織漂洪儀、Leica RM2015切片機(jī)、10%中性福爾馬林、濃縮型DAB試劑、正常山羊血清工作液、生物素化二抗工作液、辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液、枸櫞酸鹽緩沖液兔抗人EGFR單克隆抗體、鼠抗人轉(zhuǎn)化生長因子α單克隆抗體、兔抗人VEGF單克隆抗體、濃縮型DAB試劑、PV-9000通用型二步法檢測試劑盒。

1.3 實驗方法 免疫組織化學(xué)染色：石蠟切片脫蠟。蒸餾水沖洗，PBS浸泡，高壓熱修復(fù)抗原；切片脫蠟入水，蒸餾水沖洗；滴加兔抗人EGFR單克隆抗體、 鼠抗人轉(zhuǎn)化生長因子α單克隆抗體（TGF-α），PBS沖洗；滴加PV-9000通用型二步檢測試劑1（polymer helper），室溫孵育，PBS沖洗；滴加試劑2（poly perocidase-anti-mouse/rabbit IgG），室溫孵育， PBS沖洗DAB顯色；自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，脫水透明，中性樹膠封片。對照設(shè)計：免疫組織化學(xué)實驗同時需要設(shè)立陰性對照，以PBS代替一抗進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，余步驟同前，以已知的陽性切片做陽性對照。染色結(jié)果的判定以細(xì)胞內(nèi)(胞漿或胞核)含有棕黃色染色顆粒為陽性染色細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行分析，計數(shù)資料比較采用卡方檢驗。檢驗水準(zhǔn)為α=0.01。

2 結(jié)果

Olmpus病理圖像采集系統(tǒng)采集圖片，同機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)分析。綜合結(jié)果進(jìn)行判斷： TGF-α主要表達(dá)于胞漿。染色陽性以細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞漿呈棕色顆粒狀染色為標(biāo)準(zhǔn)，且著色明顯高于背景或背景不著色而細(xì)胞著色者為陽性細(xì)胞染色。

2.1 TGF-α在結(jié)腸炎黏膜、結(jié)腸癌組織中的表達(dá) 結(jié)腸炎中TGF-α無表達(dá)，結(jié)腸癌中陽性表達(dá)率為71.6%，結(jié)腸癌組織中陽性表達(dá)率明顯高于結(jié)腸炎。

2.2 TGF-α在結(jié)腸癌中的表達(dá)與其生物學(xué)行為之間的關(guān)系 TGF-α在結(jié)腸癌中的表達(dá)與患者年齡、性別、病變部位、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度無關(guān)，而與臨床分期密切相關(guān)，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期的陽性率為48.7%，Ⅲ+Ⅳ期的陽性率為85.7%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表1。

3 討論

TGF-α是細(xì)胞因子家族中發(fā)現(xiàn)較早的一類生長因子，于20世紀(jì)70 年代末，首先從幾種實體腫瘤細(xì)胞介質(zhì)中得到分離，并鑒定為一種多肽類生長因子。TGF-α的生物功能廣泛而復(fù)雜，取決于其傳遞方式及靶細(xì)胞的生理狀態(tài)。除在早期的胚胎發(fā)育中存在外，正常組織產(chǎn)生的TGF-α量很少，多種腫瘤細(xì)胞系可產(chǎn)生TGF-α，在對卵巢癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌等的研究中均發(fā)現(xiàn)TGF-α表達(dá)時與腫瘤不良預(yù)后及短生存率有關(guān)。但近年來有相反的報道，在對甲狀腺癌、子宮內(nèi)膜癌、外陰癌的研究中發(fā)現(xiàn)， TGF-α有抑制細(xì)胞增殖的作用［1］。TGF-α的適度表達(dá)可以促進(jìn)黏膜損傷后的修復(fù)，但它對多種上皮組織的促增殖作用卻提示TGF-α具有潛在的致癌或促癌作用。一方面過表達(dá)的TGF-α能誘導(dǎo)c-myc和c-fos等癌基因的表達(dá)，刺激腫瘤細(xì)胞通過自分泌

作用與EGFR形成自身環(huán)路，另一方面， TGF-α可能與結(jié)腸癌中過表達(dá)的EGF家族其他成員，如兩性蛋白(AR)、肝素結(jié)合生長因子(HB-EGF)Cript和pS2(雌激素調(diào)節(jié)蛋白)共同參與了黏膜的癌變和進(jìn)展。實體瘤快速生長離不開血管的生成，新生的血管網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)為腫瘤的生長提供充分的營養(yǎng)物質(zhì)，以助腫瘤細(xì)胞快速增殖［2］。TGF-α的致癌作用常表現(xiàn)為與其他因素的共同作用。有研究證明，豚鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞在惡性轉(zhuǎn)化過程中出現(xiàn)TGF-α的過量表達(dá)，提示它可能與胰腺癌的起源有關(guān)［3］。Chu等［4］發(fā)現(xiàn)，部分肝細(xì)胞癌及其癌旁組織表達(dá)TGF-α，且與HBSAg 有密切關(guān)系。所以認(rèn)為，TGF-α在肝癌發(fā)生發(fā)展中有重要作用。有研究顯示，某些腫瘤中的TGF-α水平與腫瘤細(xì)胞的惡性程度呈線性關(guān)系，如腦膠質(zhì)瘤［5］。Alberto等［6］發(fā)現(xiàn)，TGF-α在結(jié)腸癌和結(jié)腸炎性病組織中有高表達(dá)，認(rèn)為TGF-α與結(jié)腸癌細(xì)胞增生和刺激DNA 合成有關(guān)。多種結(jié)腸黏膜癌前病變與TGF-α過表達(dá)有關(guān)，提示TGF-α與結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。Filipe等［7］運用免疫組化法對25例結(jié)腸癌患者(結(jié)腸癌組)和56例結(jié)腸潰瘍和慢性結(jié)腸炎患者(結(jié)腸病組)的對比分析顯示，結(jié)腸癌組TGF-α的表達(dá)強度明顯高于結(jié)腸病組，其表達(dá)強度在結(jié)腸病組正常黏膜區(qū)、結(jié)腸癌組正常黏膜區(qū)、結(jié)腸病組腸化區(qū)、結(jié)腸癌組腸化區(qū)和結(jié)腸癌組不典型增生區(qū)逐漸增強。這提示了TGF-α的過表達(dá)與多種結(jié)腸黏膜癌前病變有關(guān)，可能是結(jié)腸癌形成的一個重要因素［8］。有學(xué)者采用放射免疫法對手術(shù)前后結(jié)腸癌患者血清TGF-α水平進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)手術(shù)后血清TGF-α水平明顯低于手術(shù)前，提示動態(tài)檢測血清TGF-α水平對評價結(jié)腸癌治療療效有一定的參考價值［9］。

本研究采用免疫組化法檢測60例結(jié)腸癌組織中TGF-α，結(jié)果顯示43例呈陽性表達(dá)，陽性率71.6%，在慢性結(jié)腸炎組織中的陽性表達(dá)率為0%，兩者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；TGF-α在結(jié)腸癌組織中的陽性表達(dá)水平與結(jié)腸癌患者的性別、年齡、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、分化程度無關(guān)，而與臨床分期有關(guān)，TNM分期Ⅰ+Ⅱ期的陽性率為48.7%，Ⅲ+Ⅳ期的陽性率為85.7%，差異有顯著性（P<0.01），可作為惡性程度的參考指標(biāo)。在正常組織中，TGF-α呈低表達(dá)，表達(dá)水平的升高有利于腫瘤的早期診斷。TGF-α可通過多種途徑促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，與結(jié)腸癌的生長及預(yù)后均有關(guān)，因此可成為檢測結(jié)腸癌發(fā)生和判斷預(yù)后的標(biāo)志物，有助于選擇治療方案。對TGF-α的深入研究，將更有效的提高結(jié)腸癌的防治水平。

參 考 文 獻(xiàn)

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（收稿日期：2011-09-26）

（本文編輯：梅宏偉）