Mta-1在甲狀腺腫瘤中的表達及其臨床意義

【摘要】 目的 探討Mta-1蛋白在甲狀腺腫瘤組織中的表達及其臨床意義。方法 應用免疫組織化學Envision法檢測140例甲狀腺癌組織、50例甲狀腺腺瘤及30例正常甲狀腺組織中Mta-1蛋白的表達，分析Mta-1蛋白的表達與甲狀腺癌臨床病理特征之間的關系。結果 甲狀腺癌中Mta-1陽性表達明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤(P<0.05)。甲狀腺癌組織中，Mta-1的表達與腫瘤大小、AJCC分期、分化程度、是否有頸部淋巴結轉移以及浸潤深度密切相關(P<0.01)，而與年齡及性別無關（P>0.05）。結論 Mta-1參與了甲狀腺癌的形成過程，并與甲狀腺癌的浸潤、轉移和預后密切相關，為甲狀腺癌的分子靶向治療提供了新的靶點。

【關鍵詞】 甲狀腺腫瘤； 免疫組織化學； Mta-1

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甲狀腺腫瘤起病隱匿，在臨床上發現時多以無痛性甲狀腺結節為主要表現，但其具有多變的生物學特征，這給臨床術前判斷甲狀腺腫瘤的良惡性及轉移浸潤潛力帶來一定的困難。近年來甲狀腺腫瘤領域研究的熱點課題已逐漸集中于探討甲狀腺腫瘤的生物學特性與轉移浸潤及預后的關系，并尋找相關的分子診斷標志物以提高鑒別診斷甲狀腺良惡性腫瘤和判斷甲狀腺癌轉移潛力的準確性，并為分子靶向治療研究指明新的方向^{［1，2］}。轉移相關基因(metastasis associated -1，Mta-1)是近年來發現在許多惡性腫瘤的浸潤、轉移過程中扮演重要角色的新基因組^［3］。目前尚少見Mta-1蛋白在甲狀腺良、惡性腫瘤發生、發展、侵襲轉移中作用的研究報道^［4］。本研究通過觀察Mta-1蛋白在甲狀腺良、惡性腫瘤中的表達情況，并分析它與甲狀腺癌臨床病理特征間的關系，旨在探討Mta-1蛋白在鑒別甲狀腺良、惡性腫瘤的診斷價值及其在腫瘤形成、癌變及浸潤轉移過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2005年8月16日～2010年9月15日于東莞石碣醫院和暨南大學第一附屬醫院行手術治療的甲狀腺腫瘤患者190例，其中男46例，女144例；年齡21～72歲，平均(40.5±4.6)歲；甲狀腺腺瘤50例，甲狀腺癌140例(乳頭狀癌45例，濾泡狀癌45例，髓樣癌25例，未分化癌25例)，均經手術切除后送組織病理活檢證實。另選擇同期甲狀腺腺瘤旁的正常甲狀腺組織30例為對照組，均經組織病理活檢證實。

1.2 方法

1.2.1 試劑 Elivsion試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自廣州安必平醫藥科技有限公司，Mta-1鼠抗人多克隆抗體均購自Bioworld Technology公司(抗體稀釋度1∶150)。

1.2.2 免疫組織化學染色 所有手術切除標本經10%福爾馬林液固定，常規石蠟包埋，連續4 μm切片。采用Elivsion兩步法Mta-1蛋白的表達，操作程序按說明書進行：脫蠟、脫水、抗原修復，30 ml/L過氧化氫溶液室溫封閉10 min，滴加第一抗體Mta-1，37 ℃孵育2 h，滴加第二抗體辣根酶標記羊抗鼠IgG多聚體，37 ℃孵育20 min，DAB顯色3～5 min，蘇木素對比襯染，光鏡下觀察。陰性對照以PBS替代一抗，用已知陽性標本作陽性對照。

1.2.3 結果判斷 Mta-1蛋白主要在細胞核表達，呈棕黃色顆粒狀。隨機選擇5個高倍鏡視野(400倍)，以染色強度和陽性細胞率的得分之和進行判斷：無染色記0分，弱染色(淺黃色)記1分，中等染色(棕黃色)記2分，強染色(黃褐色)記3分；陽性細胞率≤5%記0分，＞5%～25%記1分，＞25%～50%記2分，＞50%記3分。上述兩項積分相加，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中等陽性(++)，5～6分為強陽性(+++)。

1.3 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件包進行數據分析。計數資料運用χ2檢驗法。以P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Mta-1在各型甲狀腺腫瘤組織和正常甲狀腺組織中的表達 30例正常甲狀腺組織中無Mta-1陽性表達；甲狀腺腺瘤HIF-1α陽性表達率為8.0%(4/50)；甲狀腺癌HIF-1α陽性表達率為55.7%(78/140)。正常甲狀腺組織與甲狀腺腺瘤中Mta-1陽性表達差異無統計學意義(P>0.05)，甲狀腺癌中Mta-1陽性表達明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤，差異均有統計學意義(P<0.05)，而不同類型甲狀腺癌組織間Mta-1陽性表達差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

2.2 甲狀腺癌組織中Mta-1與臨床病理特征的關系 甲狀腺癌組織中，Mta-1的表達與腫瘤大小、AJCC分期、分化程度、是否有頸部淋巴結轉移以及浸潤深度密切相關(P<0.01)，而與年齡及性別無關（P>0.05）。見表2。

3 討論

近年來影像學技術的發展飛速，在一定程度上提高了甲狀腺腫瘤的早期診斷率，但影像學技術對早期鑒別診斷甲狀腺腫瘤的良惡性仍存在不確定性。因此，尋找能鑒別良、惡性甲狀腺腫瘤并評估其生物學特性的腫瘤分子標志物已成為學者們最迫切需要解決的問題^［5～6］。

Mta-1是1993年Pencil等應用差異雜交技術從具有轉移潛能的鼠乳腺癌細胞株13762NF中篩選克隆出的，因該基因的表達與乳腺腫瘤轉移成正相關，故被命名為（腫瘤）轉移相關基因。研究表明，Mta-1在人正常組織，包括心、腎、肺、肝等均呈低水平表達，而在腫瘤組織中表達水平較高，且與人類許多惡性腫瘤的侵襲轉移過程緊密相關^［7～9］。本研究結果顯示，甲狀腺癌中Mta-1陽性表達明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤，差異有統計學意義(P<0.05)，且不同類型甲狀腺癌組織間Mta-1陽性表達差異無統計學意義(P>0.05)。表明Mta-1與甲狀腺癌發生發展密切相關，可能參與促進腫瘤細胞異常增殖的過程，且在不同病理類型甲狀腺癌發生過程中發揮的作用是相似的。提示Mta-1可以作為輔助甲狀腺癌早期鑒別診斷的輔助分子學指標。

同時本研究結果分析了Mta-1表達與甲狀腺癌的臨床病理特征之間的關系，發現Mta-1的表達與甲狀腺癌組織的腫瘤大小、是否有頸部淋巴結轉移、浸潤深度、分化程度以及AJCC分期密切相關(P<0.01)。提示Mta-1的過度表達不僅與甲狀腺癌發生密切相關，而且與甲狀腺癌的增殖、浸潤和淋巴轉移等惡性生物學行為密切相關。但目前對其確切機制及其與其他腫瘤轉移基因間的關系尚不明了，仍有待進一步探討。相信隨著Mta-1在甲狀腺癌發生發展過程中作用機制研究的不斷深入，Mta-1將可能成為甲狀腺癌的分子靶向治療的新靶點。

參 考 文 獻

［1］ Ronald A，Delellis，Rieardo V，et al.WHO classification.Pathology and geneties of Tumours of Endocrine Organs，2004:51-61.

［2］ 王新華，崔力.良惡性甲狀腺腫瘤鑒別相關因子的研究進展.吉林醫學，2008，29(20):1822-1823.

［3］ Kumar Rakesh，Rui-Au Wang，Bagheri-Yarmand R.Emerging roles of MTA family members in human cancers.Semin Oncol，2003，30(5)：30-37.

［4］ 張立海，王嬌，孟凡石，等.MTA1基因在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及其臨床意義.黑龍江醫藥科學，2006，29(6):55-56.

［5］ Troviseo V，Soares P，Preto A，et al.Moleettlar genetics of papillary thyroid carcinoma：great expectation.Arq Bras Endocrinol Metabol，2007，51(5)：643-653.

［6］ 姚橡樣.甲狀腺癌的分子生物學研究進展.臨床外科雜志，2006，14(3)：140-141.

［7］ Toh Y， Kuninaka S， Endo K，et al.Molecular analysis of a candida metastasis associated gene， MTA1: possible interaction with histodeacety-lase.J Exp Clin Cancer Res，2000，19(1): 105-111.

［8］ Toh Y，Ohga T，Endo K，et al.Expression of the metastasis associated MTA1 protein and its relationship to deacetylation of the histone H4 in esophageal squamous cell carcinomas.Int J cancer，2004，110(3):362-367.

［9］ Bachelder RE， Crago A， Chung J， et al. Vascular endothelial growth factor is an autocrine survival factor for neurop ilin-expressing breast carcinoma cell.Cancer Res，2001，61(7): 5736-5740.

（收稿日期：2011-09-19）

（本文編輯：陳丹云）