湖北規?；└圬i場豬瘟陽性率血清學調查研究

摘要：采用ＥＬＩＳＡ豬瘟抗體檢測試劑盒檢測湖北１０個規模化供港豬場的各豬群血清，評價各供港豬場豬瘟防制水平和各場豬瘟免疫方案所取得的免疫效果。結果顯示，１０個供港豬場種豬群均有較高且較均勻的抗體水平，免疫效果好；而仔豬群、育肥豬群則有部分陽性感染，感染率為１％～３％。表明湖北供港豬場對豬瘟的控制措施有效，豬瘟免疫方案符合各場實際，取得了預期的防疫效果。

關鍵詞：豬瘟；ＥＬＩＳＡ；陽性率；血清；供港豬場

中圖分類號：Ｓ８52．5文獻標識碼：A文章編號：１００７－２７３Ｘ（２０11）08-0006-04

豬瘟（Cｌａｓｓｉｃａｌ ｓｗｉｎｅ ｆｅｖｅｒ，ＣＳＦ）是由豬瘟病毒（ＣＳＦＶ）引起的豬的高度致死性、接觸性傳染?。郏保荨Ｄ壳柏i瘟遍布全世界，根據ＯＩＥ制定的《陸生動物衛生法典》（２００６年版），豬瘟被列為必須報告的動物傳染病之一，在我國被列為一類動物疫病［２］。在豬瘟免疫防制方面，我國成功培育了具有國際領先水平的疫苗，經過幾十年的努力，該病在我國的大規模流行已得到基本控制。但是近２０年來由于諸多因素的存在，使得非典型豬瘟、溫和型豬瘟出現［３］，所引發的種豬持續性感染與繁殖障礙、仔豬的先天性感染與免疫失敗以及與偽狂犬和藍耳病的混合感染時有發生［４］，每年造成巨大的經濟損失。并且近幾年的發病特征與臨床表現更為復雜，發生典型癥狀和典型病理特征的情況也同時存在［５］，給獸醫工作者控制該病提出了挑戰。

目前，我國防控豬瘟的主要手段仍然以高密度防疫為主，規模化豬場在實際工作中免疫失敗的現象也時有發生［６］。因此，了解湖北規?；└圬i場各豬群豬瘟免疫抗體的現狀，為供港豬場科學合理防控豬瘟，以保證供港活豬的食用安全和健康，具有十分重要的意義。本研究在湖北范圍內選取10個規?；└圬i場的公豬、母豬、仔豬、育肥豬等血清樣作樣本，用商品化的豬瘟ＥＬＩＳＡ抗體檢測試劑盒對其豬瘟抗體水平進行了血清學調查。

１材料與方法

１．１試劑

武漢科前動物生物制品有限責任公司提供的試劑盒，由抗原包被板、羊抗豬酶標二抗及稀釋液等其他反應輔助物組成，應用間接ＥＬＩＳＡ檢測豬血清中抗豬瘟病毒抗體。

１．２檢測樣品

選取１０個規模化供港豬場，每個場分別采取種公豬血清１０份，后備母豬血清１０份，經產母豬血清１５份，哺乳仔豬血清３０份，保育仔豬血清３０份，育肥豬血清５０份，每個豬場１４５份血清，共計１ ４５０份血清。血清收集后當天分離，制備過程中要求血清清亮，無溶血。

１．３檢測方法

（１）樣品稀釋：在血清稀釋板中按１∶４０（V/V）稀釋待檢血清樣品（１９５μＬ樣品稀釋液中加５μＬ待檢血清樣品即成）

（２）對照稀釋：在血清稀釋板中按１∶４０（V/V）分別稀釋陽性對照和陰性對照（２３４μＬ樣品稀釋液中加６μＬ對照血清即成）

（３）取預包被的檢測板（根據樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清?。保埃唉蹋碳尤氲綑z測板孔中。陰性對照和陽性對照各設２孔，每孔１００μＬ。輕輕振勻孔中樣品（勿溢出），置３７℃溫育３０ｍｉｎ。

（４）甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板５次，２００μＬ／孔，每次靜置３ｍｉｎ倒掉，再在干凈吸水紙上拍干。

（５）每孔加羊抗豬酶標二抗１００μＬ，置３７℃溫育３０ｍｉｎ。

（６）洗滌５次，方法同（４）。切記每次在干凈吸水紙上拍干。

（７）每孔先加底物液Ａ一滴（５０μＬ）、再加底物液Ｂ一滴（５０μＬ），混勻，室溫（１８~２５℃）避光顯色１０ｍｉｎ。

（８）每孔加終止液１滴（５０μＬ），１０ｍｉｎ內測定結果（測定前在振蕩器上輕輕振動一下）。

１．４結果判定

在酶標儀上測各孔ＯＤ６３０ｎｍ值。樣品ＯＤ６３０ｎｍ值大于０．３５，判為陽性；樣品ＯＤ６３０ｎｍ值小于０．３５，判為陰性，ＯＤ６３０ｎｍ值大于０．４５（對應抗體水平大于１︰６４）判為合格。（注：試驗成立的條件是陽性對照孔平均ＯＤ６３０ｎｍ值大于或等于１．０，陰性對照孔平均ＯＤ６３０ｎｍ值必須小于０．３）

２結果

應用豬瘟抗體ＥＬＩＳＡ檢測試劑盒檢測了１０個規?；i場１ ４５０份血清，檢測結果見表１-５。

表１列出了１０個豬場種豬群血清抗體的ＯＤ６３０ｎｍ值。由表１可以看出，種公豬、后備母豬、經產母豬的ＯＤ６３０ｎｍ值均大于０．３５，為陽性值，表明各場種豬群體內均有病毒抗體產生；３場和９場各有１頭種公豬ＯＤ６３０ｎｍ值在０．３５～０．４５之間，判為免疫不合格；除此之外，其他種豬ＯＤ６３０ｎｍ值均為０．４５以上。表明１０個場種豬群免疫合格率很高，對豬瘟病毒有較強的免疫能力。

表２表明，哺乳仔豬在２場、３場、８場檢出ＯＤ６３０ｎｍ值小于０．３５共４頭，判為豬瘟感染，占哺乳仔豬檢測總數的１．３％，哺乳仔豬群免疫合格率平均為９５％；保育仔豬在３場、４場和８場檢出ＯＤ６３０ｎｍ值小于０．３５共４頭，判為豬瘟感染，占保育仔豬檢測總數１．３％，保育仔豬群免疫合格率平均為９２％，其抗體保護率略低于哺乳仔豬群。

表３表明，育肥豬群在１、２、３、５、６、９、１０場檢出ＯＤ６３０ｎｍ值小于０．３５共１４頭，判為豬瘟感染，占被檢育肥豬群的２．８％，育肥豬群免疫合格率平均為９３．６％，大部分供港豬場育肥豬群均有不同程度豬瘟病毒感染。

由表４可以看出，所檢測的１０個豬場種公豬、后備母豬，經產母豬絕大多數能達到１００％的豬瘟免疫合格，哺乳仔豬、保育仔豬、育肥豬的豬瘟免疫合格率絕大多數達到９０％以上，其中１場、６場、８場各豬群均表現出較好的免疫合格率。顯示在各不同的免疫程序下，豬群的免疫合格率存在一定差異。

從表５可以看出，１０個豬場各豬群的豬瘟ＯＤ６３０ｎｍ值變異系數（ＣＶ值）皆低于２５％，表明１０個豬場各豬群具有很整齊的豬瘟抗體水平，各個場的豬瘟免疫程序和免疫效果基本達到了預期的目的。

３結論與討論

（１）１０個供港豬場的豬瘟免疫方案取得了確實的免疫效果，能有效防止豬瘟在本場的擴散。本次研究調查結果顯示，１０個供港豬場的豬瘟免疫方案基本一致，尤其是后備母豬、經產母豬、種公豬的免疫，各場在疫苗類型、疫苗生產廠家、免疫劑量、免疫時間的選擇上非常統一。而本研究的抗體檢測結果也表明了各場獲得了接近的免疫效果，說明在湖北規?；└圬i場的種豬的豬瘟免疫方案上，各場基本取得了共識并已相當成熟。

各場仔豬的豬瘟免疫主要在首免日齡及是否進行超前免疫上有所不同，總體上看，各場的哺乳仔豬及保育仔豬均有較高的免疫合格率及抗體水平。各場應該依據本場實際和近幾年的仔豬抗體水平情況，來制定是否進行超前免疫，來達到提高仔豬成活率和降低豬瘟感染率的目的。

（２）規模化豬場保持種豬群較高的豬瘟抗體水平是整個豬場的生命線。眾所周知，種豬群（后備母豬、公豬、生產母豬）的穩定是整個豬場穩定的前提，種豬群疾病的穩定也是整個豬場穩定的前提。種豬群不穩定或帶毒有可能會產出免疫系統不健全或持續感染的仔豬，更可怕的是會導致母源抗體早期消失的仔豬感染病毒，從而形成疾病的傳播鏈［７］。因此，在規?；i場豬瘟的控制過程中，保證種豬群有一個較高的穩定的豬瘟抗體水平對整個豬場豬群的健康具有至關重要的作用。１０個規?；└圬i場憑借多年的實踐經驗，這方面已做得很好，為保證供港食品的安全起到了重要的保障作用。

（３）對于豬群來說，血清陽性合格率達到９０％以上才能比較有效地預防豬瘟的流行。前幾年部分規?；└圬i場豬瘟免疫效果差，主要原因是豬場發生其他免疫抑制性疾病，近兩年各場通過采取綜合防控措施和適當的對癥治療，使得各場豬瘟免疫效果不斷增強［８］。因此，通過對本場豬瘟抗體水平的監測，用豬瘟免疫合格率和抗體水平數據，一方面可以評價本場或本地區豬瘟免疫程序的科學性，另一方面，對本場采取的疫病綜合防制措施的實際效果也可以進行有效的評價。

（４）本次研究結果顯示，目前湖北供港豬場仔豬群和育肥豬群仍存在豬瘟野毒感染，但感染率較低，如表３所示，嚴重的如１０場育肥豬感染４頭，占該場被檢育肥豬群的８．０％，而這些豬群實際均為免疫豬群，這可能主要與母豬持續性感染，仔豬發生先天性免疫耐受有關［９］。而母豬持續感染和仔豬胎盤感染是目前引起豬瘟免疫失敗的主要原因［１０］，這也是連年注射豬瘟疫苗連年還發生豬瘟的主要原因。

（５）本次研究結果顯示，在不同豬群中，種豬群豬瘟免疫效果最好。主要是各豬場對種豬的免疫都比較重視，其抗體水平隨豬瘟疫苗免疫次數的增加而提高；哺乳仔豬免疫效果也很好，但值得注意的是這些抗體大多來自于母源；而保育仔豬的免疫效果低于哺乳仔豬。實際上豬瘟難以控制的主要原因就在保育階段，因為這個階段的仔豬逐漸失去母源抗體的保護而變得極為易感，因此現實生產中應在２０日齡豬瘟首免后進行抗體檢測，以確定二免日齡或者進行補免。從表３可以看出，各場育肥豬群均有不同程度病毒感染或免疫不合格，尤其是８０～１００日齡的育肥豬，其血清抗體陽性率遠遠達不到疫苗免疫后抗體保護的標準，是受豬瘟感染威脅較大的群體，應加強監測［１１］，并采取綜合防治措施和強制免疫的方法防止豬瘟對育肥豬群的感染，以提高經濟效益。

（６）豬瘟ＥＬＩＳＡ診斷試劑盒檢測方法克服了傳統檢測方法復雜、檢測時間長等缺點，且具有特異性強、靈敏度高、重復性好、檢測時間短等特點，非常適合檢測豬血清中豬瘟病毒抗體［１２］、評估豬場豬瘟疫苗免疫效果和進行感染豬的血清學診斷。本研究應用了此方法對湖北１０個規模化豬場的１ ４５０份血清病料進行了檢測，檢出１０個豬場易感豬群豬瘟感染率也僅為１％～3％，說明湖北規模化供港豬場在豬瘟的防制上具有較高的水平。

（７）豬瘟的凈化是當前養豬業所面臨的重大實際問題，也是控制、消滅豬瘟的重要手段。根據各豬場追求最大經濟效益的實際情況，采用全部撲殺的辦法顯然是不現實的，難于實行，而在豬瘟污染場，實施以凈化種公、母豬為主的豬瘟綜合防制技術措施是切實可行的，可以達到事半功倍的效果。豬瘟抗體的檢測固然對了解豬群的抗體動態水平有積極的作用，但抗體的高低不能說明豬只是否帶毒［9］，因此對豬群實行定期的豬瘟抗原檢測是很有必要的，然后根據其檢測結果及時淘汰帶毒豬，才能有效控制豬瘟的流行。

（8）本次研究的１０個供港豬場的豬瘟免疫效果較好，說明各場的免疫程序是成功的。但并不意味著這些對豬瘟的免疫方案就一定適合湖北所有豬場，最直接的是豬瘟母源抗體水平受到多種因素如飼養環境、管理水平、母豬的免疫等的影響［１3］，而各個豬場的仔豬母源抗體水平及持續時間都存在差異。因此各場制定合理的免疫程序必須根據本場實際情況，建議各場從實際出發探究本場仔豬母源抗體消長規律，繪制母源抗體消長曲線，摸索出適合本場的最合理的免疫程序，才能使本場的豬瘟防制達到最佳的效果。

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