合浦珠母貝C型凝集素2的序列特征和表達分析

摘要：構建了合浦珠母貝（Ｐｉｎｃｔａｄａ ｆｕｃａｔａ）的ｃＤＮＡ文庫，并通過ＥＳＴ序列篩選和重新測序獲得了一個新的Ｃ型凝集素基因的ｃＤＮＡ序列，命名為ＰｏＬＥＣ２，其長度為１ ６５９ ｂｐ，５’端非編碼區(qū)為３９ ｂｐ，３’端非編碼區(qū)為４５ ｂｐ，開放閱讀框為１ ５７５ ｂｐ，可編碼５２4個氨基酸；ＰｏＬＥＣ２蛋白的分子量約５８．０ ｋＤ，等電點為５．２；ＰｏＬＥＣ２蛋白包含一個信號肽序列（Ｍ１－Ａ１６）、一個ＭＡＭ－２結構域和一個Ｃ型凝集素的糖識別結構域。同源性分析結果表明，ＰｏＬＥＣ２與其他物種Ｃ型凝集素的糖識別結構域序列的同源性在２６．５％～３３．６％，相似性在４５．１％～５５．６％。組織表達分析表明，ＰｏＬＥＣ２基因在肝胰臟、鰓、外套膜、性腺及腸組織中均有表達，經(jīng)溶藻弧菌刺激后８ｈ在腸組織中的表達量顯著上調。

關鍵詞：合浦珠母貝（Ｐｉｎｃｔａｄａ fucata）；Ｃ型凝集素；序列特征；表達分析

中圖分類號：Ｓ９１７．４ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０11）19－4026-05

Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｃ－ｔｙｐｅ Ｌｅｃｔｉｎ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｐｅａｒｌ Ｏｙｓｔｅｒ Ｐｉｎｃｔａｄａ fucata

ＨＵ Ｙｕ－ｔｉｎｇ１，２，ＺＨＡＮＧ Ｄｉａｎ－ｃｈａｎｇ１，ＪＩＡＮＧ Ｓｈｉ－ｇｕｉ１，ＳＵ Ｔｉａｎ－ｆｅｎｇ１，ＣＵＩ Ｓｈｕ－ｇｅ１，３，ＧＵＯ Ｈｕａ－ｙａｎｇ１，２，ＣＨＥＮ Ｍｉｎｇ－ｑｉａｎｇ１

（１． Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ｓｅａ Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｆｉｓｈｅｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０３００， Ｃｈｉｎａ；

２． College ｏｆ Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｏｃｅａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１３０６， Ｃｈｉｎａ；

３． College ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｊｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０６３２， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｃＤＮＡ ｌｉｂｒａｒｙ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｐｅａｒｌ ｏｙｓｔｅｒ（Ｐｉｎｃｔａｄａ fucata）． Ａ Ｃ－ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ ｇｅｎｅ， ｎａｍｅｄ ａｓ ＰｏＬＥＣ２， ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ using ＥＳＴ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ． Ｔｈｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｃＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗａｓ １ ６５９ ｂｐ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅ ｗａｓ １５７５ ｂｐ． Ｔｈｅ ５’-ＵＴＲ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ３９ ｂｐ ａｎｄ ３’-ＵＴＲ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ４５ ｂｐ． Ｔｈｅ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｄ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ５２4 ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ， ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ａｂｏｕｔ ５８．０ ｋＤ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｏｉｎｔ ｏｆ ５．２． Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ａ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗｉｔｈ １６ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ （Ｍ１-Ａ１６）， ａ ＭＡＭ－２ ｄｏｍａｉｎ ａｎｄ ａ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ Ｃ－ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ． Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｏｆ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ Ｐ． fucata ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ were ２６．５％~３３．６％ ａｎｄ ４５．１％~５５．６％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｉｓｓｕｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＰｏＬＥＣ２ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｉｓｓｕｅs ｏｆ Ｐ． fucata， ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｍａｘｉｍｕｍ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ａｆｔｅｒ ８ ｈｏｕｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｐｉｎｃｔａｄａ fucata； Ｃ－ｔｙｐｅ ｌｅｃｔｉｎ； ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｅａｔｕｒｅｓ； ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ

Ｃ型凝集素為一類鈣離子依賴活性的糖蛋白，具有至少一個糖識別結構域（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎｓ，ＣＲＤ），能夠識別和結合細胞膜表面的糖基，其結合糖基具有專一性，即一種凝集素只能結合一種糖基［１，２］。Ｃ型凝集素是一種模式識別受體（Ｐａｔｔｅｒｎ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＰＲＲ）蛋白，主要有Ｍａｎ型配體（Ｍａｎ－ｔｙｐｅ ｌｉｇａｎｄｓ）和Ｇａｌ型配體（Ｇａｌ－ｔｙｐｅ ｌｉｇａｎｄｓ），Man型配體與Ｄ－甘露糖、Ｄ－葡萄糖結合，Gal型配體與Ｄ－半乳糖及其衍生物結合［２］。ＰＲＲ蛋白能識別病原微生物引起宿主的免疫應答，在無脊椎動物免疫防御中發(fā)揮著重要作用［１，２］。

合浦珠母貝（Ｐｉｎｃｔａｄａ ｆｕｃａｔａ）又稱馬氏珠母貝，是我國海水珍珠的主要種類，由其所產(chǎn)的珍珠即為舉世聞名的“南珠”。近年來，由于養(yǎng)殖技術落后、養(yǎng)殖環(huán)境污染和種質退化，致使養(yǎng)殖合浦珠母貝出現(xiàn)了生長緩慢、病害頻發(fā)及死亡率高等現(xiàn)象［３］，嚴重影響了合浦珠母貝養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。因此，必須加強合浦珠母貝免疫防御分子機制的研究，為其免疫防治策略的制定提供理論依據(jù)。……