喜樹堿和10-羥基喜樹堿提取方法的比較與優化

摘要：以乙醇為溶劑，比較了浸提法、超聲波法、微波法和勻漿提取法從喜樹（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ Ｄｅｃａｉｓｎｅ）幼葉中提取喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的效果，并通過正交試驗設計對提取溫度、提取時間以及勻漿時間對提取效率的影響進行了分析。利用反向－高效液相熒光法檢測喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的濃度。結果顯示提取１０－羥基喜樹堿的最優條件為勻漿１２ ｍｉｎ、６０ ℃浸提３０ ｍｉｎ、超聲處理３０ ｍｉｎ；提取喜樹堿的最優方案為勻漿１２ ｍｉｎ、６０ ℃浸提３０ ｍｉｎ、超聲處理１５ ｍｉｎ。多種提取工藝混合使用能顯著提高喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的產率。

關鍵詞：喜樹堿；１０－羥基喜樹堿；喜樹（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ）；提取方法

中圖分類號：Ｒ２８４．２文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）21－4459-04

Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ａｎｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ

１０－Hｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｆｒｏｍ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ

ＳＨＥＮ Ｓｈａｏ－ｈｕａ，ＬＩＵ Ｊｉ－ｙａｎ，ＨＵ Ｊｉａｎｇ－ｑｉｎ，ＣＨＥＮ Ｂｏ，ＷＡＮＧ Ｌｉ－ｌｉｎ

（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００３６，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｓｉｎｇ ｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｓｏｌｖｅｎｔ， ４ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｔｉｒｒｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ， ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ， ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｗａｖｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗere ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（ＣＰＴ） ａｎｄ １０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ（ＨＣＰＴ） ｆｒｏｍ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ＣＰＴ ａｎｄ ＨＣＰＴ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ． Ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ reverse-high performance liquid fluorescence method． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ＨＣＰＴ ｗｅｒｅ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ １２ ｍｉｎ， ６０ ℃ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ； ｗｈｉｌｅ ｆｏｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ＣＰＴ ｗｅｒｅ ｈｏｍｏｇｅｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ １２ ｍｉｎ， ６０ ℃ ｗａｔｅｒ ｂａｔｈ ｆｏｒ ３０ ｍｉｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ １５ ｍｉｎ. Ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｃｏｕｌｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ； １０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ； Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ

喜樹（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ Ｄｅｃａｉｓｎｅ）為山茱萸目（Ｃｏｒｎａｌｅｓ）珙桐科（Ｎｙｓｓａｃｅａｅ）旱蓮屬植物，是中國特有的多年生高大落葉喬木。喜樹堿（Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ， ＣＰＴ）最早從喜樹中分離，具有獨特的抗癌功效，１０－羥基喜樹堿（１０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ， ＨＣＰＴ）是喜樹堿的衍生物（圖１），與喜樹堿相比，其毒副作用更小［１］。研究表明，喜樹堿及其衍生物對多種癌癥均有一定療效［２－５］，而結合其他藥物能顯著提高其抗癌功效［６－９］。喜樹堿和１０－羥基喜樹堿廣泛分布于喜樹各組織器官，關于喜樹堿和１０－羥基喜樹堿提取方法的報道很多，有研究表明以體積分數５５％左右的乙醇溶液為溶劑，提取喜樹堿和１０－羥基喜樹堿效果最佳［１０－１３］。考慮到試驗的安全性以及成本因素，本試驗以５５％的乙醇為提取劑，以三年生喜樹的幼葉為材料，采用浸提法、超聲波提取法、勻漿法，并首次利用微波處理提取喜樹中喜樹堿和１０－羥基喜樹堿，應用反向高效液相熒光檢測法（ＲＰ－ＨＰＬＣ）檢測其提取效果，以期找到同時提取喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的最佳方法。

１材料與方法

１．１試驗材料

以溫室內生長的三年生喜樹幼苗的葉片為供試材料，６０ ℃烘干至恒重，研磨成粉末，避光保存備用。喜樹堿和１０－羥基喜樹堿標準品購自美國Ｓｉｇｍａ公司（純度＞９８％）。

試劑：乙腈為ＨＰＬＣ級，水為超純水，其他試劑均為分析純。儀器：ＫＱ５２００ＤＥ型超聲波清洗儀，ＰＴ１３００Ｄ勻漿儀；美國Ｗａｔｅｒｓ公司高效液相色譜儀Ｗａｔｅｒｓ ６００高壓泵、Ｗａｔｅｒｓ ２４７５熒光檢測器、Ｗａｔｅｒｓ ７１７ ｐｌｕｓ自動進樣器、Ｗａｔｅｒｓ Ｅｍｐｏｗｅｒ色譜工作站，浙江大學分析測試中心。

１．２方法

１．２．１喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的提?、俳岱ǎ悍Q?。保埃?ｇ喜樹嫩葉粉末，溶于２０ ｍＬ ５５％的乙醇溶液中，在不同的溫度下（５０、６０、７０ ℃）過夜提取喜樹堿和１０－羥基喜樹堿；②超聲波提取法：稱?。保埃?ｇ喜樹嫩葉粉末，溶于２０ ｍＬ ５５％的乙醇溶液中，在３０ ℃，４０ ０００ Ｈｚ的條件下，分別超聲提?。保怠ⅲ常?、４５和６０ ｍｉｎ；③勻漿提取法。試驗首次采用勻質乳漿機提取喜樹堿和１０－羥基喜樹堿，稱取１．００ ｇ喜樹嫩葉粉末，溶于２０ ｍＬ ５５％的乙醇溶液中，在室溫（２０～２５ ℃）下勻漿提取喜樹堿；④微波提取法：首次將微波法用于喜樹中喜樹堿的提?。郏保担?。稱?。担埃?ｇ喜樹嫩葉粉末（過６０目篩），溶于１００ ｍＬ ５５％的乙醇溶液中，１００ Ｗ功率下微波１ ｍｉｎ，然后立刻冷卻２ ｍｉｎ，如此反復微波提?。炒巍⒏鞣N方法所得的提取液１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，上清液過０．４６ μｍ濾膜后進樣檢測。

１．２．２正交試驗優化喜樹堿提取方法稱取樣品１．００ ｇ，溶于２０ ｍＬ ５５％的乙醇溶液中，勻漿后浸提３０ ｍｉｎ，然后超聲波處理提取喜樹堿，設計３因素３水平正交試驗，以喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的收率為指標，考察勻漿時間、浸提溫度和超聲波時間對提取效果的影響（表1）。

１．２．３喜樹堿和１０－羥基喜樹堿含量的測定

１）高效液相色譜條件。色譜柱：ＸＴｅｒｒａ ＲＰ１８柱（５ μｍ，４．６ ｍｍ×２５０ ｍｍ）；流動相：體積比２０∶８０的乙腈水混合液；入射波長：５５０ ｎｍ；激發波長：３６３ ｎｍ；流速：１ ｍＬ／ｍｉｎ；進樣量：１０ μＬ；柱溫：３０ ℃。

２）標準曲線的制備。精確稱?。保保?ｍｇ １０－羥基喜樹堿和１０．３ ｍｇ喜樹堿標準樣品于５０ ｍＬ的容量瓶中，用無水乙醇溶解，定容至刻度線。將上述標準樣品按梯度稀釋，進樣量１０ μＬ，以標準品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得標準曲線方程：喜樹堿Ｙ１＝（１Ｅ＋０６）Ｘ＋２４１ ３８４，ｒ＝０．９９９ ９；１０－羥基喜樹堿Ｙ２＝（９Ｅ＋０６）Ｘ＋５５３ ４６６，ｒ＝１．０００ ０。喜樹堿和１０－羥基喜樹堿分別在０．１０３～５１．５00和０．１１１～１１．１00 μｇ／ｍＬ時，濃度與峰面積具有良好的線性關系。

按照上述喜樹堿和１０－羥基喜樹堿標準品的檢測條件，分別測定１．２．１和１．２．２所得提取液中喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的含量，并計算喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的提取率。

２結果與分析

２．１溫度對浸提法提取喜樹堿和１０－羥基喜樹堿效果的影響

浸提溫度對喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的提取率有一定影響（表2），７０ ℃過夜浸提，喜樹堿提取率最高，但此時１０－羥基喜樹堿的提取率低于５０和６０ ℃時的提取率。超聲處理能在短時間內提高浸提的效率，７０ ℃時浸提３０ ｍｉｎ結合超聲處理３０ ｍｉｎ，１０－羥基喜樹堿的提取率與５０和６０ ℃時過夜浸提的提取率相同，喜樹堿的提取率略低于過夜浸提時所得提取率，說明超聲處理能有效縮短浸提時間。

２．２超聲時間對喜樹堿和１０－羥基喜樹堿提取率的影響

超聲提取時間對喜樹堿和１０－羥基喜樹堿提取率的影響不同（表３）。隨著超聲時間的延長，１０－羥基喜樹堿的提取效率在４５ ｍｉｎ內基本沒變化，但當延長至６０ ｍｉｎ時，其提取率為超聲４５ ｍｉｎ時提取率的２倍多。喜樹堿提取率則隨超聲時間的延長呈先上升后下降的趨勢，超聲時間為３０ ｍｉｎ時提取率最大。

２．３勻漿時間對喜樹堿和１０－羥基喜樹堿提取率的影響

勻漿時間長短對１０－羥基喜樹堿提取率的影響不大，而喜樹堿的提取率隨著勻漿時間的延長而增加（表４）。

２．４微波提取法與其他提取工藝的比較

試驗首次將微波法用于喜樹堿的提取，并與其他方法的提取率進行了比較，結果顯示浸提法過夜提取，所得喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的提取率都最高，超聲波法次之，用微波提取法所得喜樹堿提取率為０．３１２％，接近超聲波法所得提取率（圖2）；而１０－羥基喜樹堿提取率為０．０００ ７８％，顯著低于浸提法和超聲波提取法，略優于勻漿提取法（圖3）?？梢娢⒉ㄌ崛》捎糜诙虝r間內快速提取喜樹堿。

２．５正交試驗結果

根據正交試驗結果，各因素對１０－羥基喜樹堿提取率的影響順序為：提取溫度、勻漿時間、超聲波時間，對喜樹堿提取率的影響順序為：提取溫度、超聲波時間、勻漿時間（表５）。提?。保埃u基喜樹堿的最優方案為Ａ３Ｂ２Ｃ２，即勻漿１２ ｍｉｎ，６０ ℃浸提３０ ｍｉｎ，超聲波處理３０ ｍｉｎ；提取喜樹堿的最優方案為Ａ３Ｂ２Ｃ１，即勻漿提?。保?ｍｉｎ，６０ ℃水浴３０ ｍｉｎ，超聲波處理１５ ｍｉｎ，喜樹堿的提取率可達０．338 45％，明顯高于單獨使用４種方法中任何１種所得的提取率。

３討論與總結

通過單因素試驗和正交試驗優化喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的提取方案，結果顯示，單一提取方法中，浸提法過夜提取，喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的提取率均達到最高，但該法耗時長，耗能大。正交試驗結果表明不同因素對喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的影響大小不同，提取溫度對2種代謝物的提取率都很重要。而勻漿時間對喜樹堿和１０－羥基喜樹堿提取影響略有差異，可能與2種化合物的化學結構差異有關。另外，多種提取方法同時使用能有效節省提取時間，提高提取效率。本試驗首次運用微波輔助法提取喜樹中喜樹堿和１０－羥基喜樹堿，該方法操作簡便，已被用于青脆枝（Ｎｏｔｈａｐｏｄｙｔｅｓ ｆｏｅｔｉｄａ）中喜樹堿的提取，并獲得了較好的效果［１６］。微波提取法可用于短時間內快速提取喜樹中的喜樹堿，但對１０－羥基喜樹堿的提取效果不佳。本研究建立了反相高效液相色譜（ＲＰ－ＨＰＬＣ）熒光法同時檢測喜樹堿和１０－羥基喜樹堿含量的方法，該方法穩定可靠，可用于喜樹堿和１０－羥基喜樹堿檢測。

參考文獻：

［１］ 關水，安麗佳． 喜樹堿生物合成途徑及其代謝調控的研究進展［Ｊ］． 高技術通訊，２００４（５）：１０６－１１０．

［２］ ＴＡＮ Ｃ，ＣＡＩ ＬＱ，ＷＵ Ｗ，ｅｔ ａｌ． ＮＳＣ６０６９８５， ａ ｎｏｖｅｌ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎａｌｏｇ， ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ａｒｒｅｓｔ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００９， ６３（2）：３０３－３１２

［３］ ＬＥＥ Ｄ Ｈ， ＫＩＭ Ｓ Ｗ， ＳＵＨ Ｃ， ｅｔ ａｌ． Ｂｅｌｏｔｅｃａｎ， ｎｅｗ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎａｌｏｇｕｅ， ｉｓ ａｃｔｉｖｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｓｍａｌｌ－ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ： Rｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ ｅａｒｌｙ ｐｈａｓｅ ＩＩ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００８，１９（１）：１２３－１２７．

［４］ ＷＡＮＧ Ｌ Ｍ， ＬＩ Ｑ Ｙ， ＺＵ Ｙ Ｇ， ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ａｎｄ ｐｒｏ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＣＰＴ１３， ａ ｎｏｖｅｌ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎａｌｏｇ， ｏｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ＨＣＴ８ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ［Ｊ］． Ｃｈｅｍｉｃｏ－Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，２００８，１７６（2-3）：１６５－１７２．

［５］ ＰＩＮＧ Ｙ Ｈ， ＬＥＥ Ｈ Ｃ，ＬＥＥ Ｊ Ｙ，ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｌｏｗ－ｄｏｓｅ １０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］． Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ，２００６，１５（5）：１２７３－１２７９．

［６］ ＺＨＡＮＧ Ｗ，ＳＯＮＧ Ｊ Ｊ，ＭＵ Ｌ Ｙ ｅｔ ａｌ． Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｒｅｌｅａｓａｂｌｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ Ｐ［Ｊ］． Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ＆ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０１１，２１（5）：１４５２－１４５５．

［７］ ＲＥＵＶＥＮＩ Ｄ， ＨＡＬＰＥＲＩＮ Ｄ， ＳＨＡＬＩＴ Ｉ， ｅｔ ａｌ． Ｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ ａｓ ｅｎｈａｎｃｅｒｓ ｏｆ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｎｄ ａｎｔｉ－ｔｏｐｏｉｓｏｍｅｒａｓｅ Ｉ ｅｆｆｅｃｔｓ［Ｊ］． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００８，７５：１２７２－１２８１．

［８］ ＬＵ Ｂ， ＺＨＡＮＧ Ｚ． Ｎｏｖｅｌ ｃｏｌｏｎ－ｓｐｅｃｉfiｃ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｌｙ ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｃｏｒｅｓ： Ｔｈｅｉｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ， ｒｅｌｅａｓｅ ｂｅｈａｖｉｏｒ， ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｇａｉｎｓｔ ｃｏｌｏｎｉｃ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］． Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２００６，９５（12）：２６１９－２６３０.

［９］ ＳＵＮ Ｌ Ｃ， ＬＵＯ Ｊ， ＭＡＣＫＥＹ ＬＶ，ｅｔ ａｌ． Ａ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｏｆ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ ａ ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ａｎａｌｏｇ ａｇａｉｎｓｔ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｖｉａ ａ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ， αＶβ３／αＶβ５ ａｎｄ ＭＭＰ－２／－９［Ｊ］． Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００７，２４６（1-2）：１５７－１６６.

［１０］ 趙榮國，真國輝，王賀雙． １０－羥基喜樹堿的提取方法及工藝優化研究［Ｊ］． 中國醫藥生物技術，２０１０，５（２）：１４７－１４８．

［１１］ 孫雁霞，鄔曉勇，王躍華，等． 喜樹堿提取方法研究［Ｊ］． 成都大學學報（自然科學版）， ２００８，２７（２）：８９－９１．

［１２］ 趙春建，李佳慧，楊磊，等． 優化喜樹果中喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的勻漿提取工藝［Ｊ］． 森林工程，２００９，２５（２）：２２－２７．

［１３］ 史偉國，祖元剛，趙春建，等． 勻漿法提取喜樹果和喜樹葉中喜樹堿的研究［Ｊ］． 林產化學與工業，２００９，２９（１）：７９－８２．

［１４］ 祖元剛，史偉國，趙春建，等． 喜樹果中喜樹堿和１０－羥基喜樹堿的勻漿提取工藝［Ｊ］．天然產物研究與開發，２００８（２０）：１０８８－１０９０，１１２４．

［１５］ ＬＩ Ｘ Ｌ， ＸＩＡＯ Ｋ Ｊ， ＨＵ Ｘ Ｙ， ｅｔ ａｌ． ＨＰＬＣ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ａｎｄ １０－ｈｙｄｒｏｘｙｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｉｎ Ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔｅ Ｄｅｃｎｅ． ｌｅａｖｅｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈａｎｘｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２７（５）：１－６．

［16］ ＦＵＬＺＥＬＥ Ｄ Ｐ， ＳＡＴＤＩＶＥ Ｒ Ｋ． Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇ ｃａｍｐｔｏｔｈｅｃｉｎ ｆｒｏｍ Ｎｏｔｈａｐｏｄｙｔｅｓ ｆｏｅｔｉｄａ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ， ２００５，１０６３（1-2）：９－１３．