轉(zhuǎn)基因水稻對昆明雌性小白鼠取食量及營養(yǎng)效應(yīng)的影響

摘要：在室內(nèi)用轉(zhuǎn)基因水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３及其親本雜交水稻汕優(yōu)６３稻米制備的小鼠人工飼料，分別在喂飼昆明雌性小白鼠１、２、３、４和５周后測定其營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)。結(jié)果表明，小鼠在取食轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料第１、２、３和５周后的相對生長率（ＲＧＲ）與取食常規(guī)稻米制備的飼料無顯著性差異（Ｐ＞０．０５），而在第４周時顯著低于常規(guī)稻米制備的飼料。同時，小鼠的平均相對生長率（ＭＲＧＲ）、毛轉(zhuǎn)化率（ＥＣＩ）和凈轉(zhuǎn)化率（ＥＣＤ）在分別累積喂飼兩種水稻稻米制備的飼料后不同時間無顯著差異（Ｐ＞０．０５）。上述結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料除在個別喂飼周數(shù)對昆明雌性小白鼠相對生長率、近似消化率和相對消耗率有影響外，對其他的營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)均無顯著影響，說明轉(zhuǎn)基因稻米飼料對昆明雌性小白鼠的取食利用效率無明顯副作用。

關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻；營養(yǎng)效應(yīng)；相對生長率；生態(tài)風(fēng)險；昆明雌性小白鼠

中圖分類號：Ｓ５１１；Ｓ８６５．１文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：１００７－２７３Ｘ（２０11）12-0004-04

自１９８３年世界上首例轉(zhuǎn)基因煙草試種成功以來，以基因工程為代表的現(xiàn)代生物技術(shù)發(fā)展迅猛，轉(zhuǎn)基因植物的研究在世界范圍內(nèi)取得令人矚目的進(jìn)展。轉(zhuǎn)基因技術(shù)在緩解資源短缺、環(huán)境惡化、保障糧食安全及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展等方面顯現(xiàn)出巨大的潛力。

水稻是人類的主要糧食作物，目前的研究主要集中在轉(zhuǎn)基因水稻對靶標(biāo)害蟲的抗性評價［１］、非靶標(biāo)害蟲個體和種群動態(tài)［２］、天敵的適合度［３，４］以及安全性評價等方面［５］。Ｃａｒｍｅｎｃｉｔａ等［６］研究表明，Ｂｔ毒素并沒有影響褐飛虱及其天敵黑肩綠盲蝽的適合度。劉志誠等［７］研究認(rèn)為，轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻對稻田節(jié)肢動物群落的影響明顯弱于化學(xué)殺蟲劑，利用轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻防治水稻螟蟲和稻縱卷葉螟等鱗翅目害蟲比使用化學(xué)殺蟲劑更利于保持稻田節(jié)肢動物群落的穩(wěn)定性和保護(hù)稻田中的害蟲天敵。轉(zhuǎn)Ｂｔ基因作物的抗蟲性源于Ｂｔ殺蟲蛋白基因編碼的伴孢晶體蛋白（ＩＣＰｓ），ＩＣＰ為堿溶性蛋白，被敏感昆蟲取食后，在昆蟲消化道內(nèi)消化酶的作用下，蛋白被水解，釋放出的抗蛋白酶核心肽段作用于昆蟲中腸上皮細(xì)胞，與中腸道上皮細(xì)胞紋緣膜上的特異性受體結(jié)合，使細(xì)胞膜穿孔，消化道細(xì)胞的離子、滲透壓平衡遭到破壞，最終導(dǎo)致昆蟲死亡。ＩＣＰ的殺蟲特異性受ＩＣＰ的溶解性和昆蟲消化酶體系的影響［８］。由于Ｂｔ殺蟲蛋白只能特異地與靶標(biāo)昆蟲中腸上皮細(xì)胞的受體結(jié)合，在哺乳動物組織中無此類特異性受體，且哺乳動物的胃液呈酸性，因而不產(chǎn)生毒性［９］。正因為如此，轉(zhuǎn)Ｂｔ基因作物的支持者認(rèn)為轉(zhuǎn)Ｂｔ基因作物作為食品是完全可行的，人們可以放心食用。但是水稻作為人們的首選主糧，倘若在安全性上存在問題的話勢必給人類造成巨大的災(zāi)難。因此，對于轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻的可食用性及其商業(yè)化推廣尤需謹(jǐn)慎，必須在前期開展小型哺乳動物喂養(yǎng)試驗來論證其安全性。

昆明小鼠作為試驗動物用于生物醫(yī)學(xué)研究已有半個多世紀(jì)之久，被廣泛應(yīng)用生物學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)等領(lǐng)域的研究［１０－１２］。而轉(zhuǎn)基因水稻對小／大鼠是否安全目前開展的研究較少。劉雨芳等［１３］用轉(zhuǎn)ｃｒｙｌＡｃ／ｓｃｋ雙價基因抗蟲稻ＭｓＡ４大米不同劑量喂養(yǎng)大鼠，結(jié)果表明大鼠取食轉(zhuǎn)基因水稻后，其行為、呼吸、毛色均正常，轉(zhuǎn)ｃｒｙｌＡｃ／ｓｃｋ雙價基因抗蟲稻ＭＳＡ４大米對大鼠表觀體征、臟器系數(shù)、血常規(guī)與血生化無明顯不良影響。王忠華等［１４］以“克螟稻”米粉為材料進(jìn)行經(jīng)口急性毒理試驗和大鼠９０ｄ喂養(yǎng)試驗，結(jié)果未見試驗動物出現(xiàn)明顯中毒癥狀，大鼠解剖也未見異常病理改變。上述結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因水稻對鼠的行為及免疫系統(tǒng)沒有明顯影響，其主要原因由于Ｂｔ殺蟲蛋白只能特異地與靶標(biāo)昆蟲中腸上皮細(xì)胞的受體結(jié)合，在哺乳動物組織中無此類特異性受體，一般不產(chǎn)生毒性。

本試驗主要使用農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻Ｂｔ汕優(yōu)６3為試驗飼料材料，以中國昆明雌性小白鼠為試驗對象，進(jìn)行室內(nèi)小鼠對Ｂｔ汕優(yōu)６３飼料的喂飼試驗，以評價用轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻制成的人工飼料對試驗雌性小鼠取食及營養(yǎng)效應(yīng)的影響。

１ 材料與方法

１．1 試驗小鼠

本試驗中所使用的小鼠為出生后兩周（１５日齡）昆明雌性小白鼠，由武漢生物制品研究所提供。

１．2 小鼠飼料的制備

本試驗將收獲季節(jié)的轉(zhuǎn)基因水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３及其親本雜交水稻汕優(yōu)６３稻米去殼并粉碎，并將兩種水稻稻米送往武漢工業(yè)學(xué)院加工制成小鼠人工飼料，常規(guī)水稻小鼠飼料具體配方為玉米２７.0％、麩皮１９.0％、魚粉１５．３％、豆餅１６.0％、磷酸氫鈣３.0％、鈣粉３.0％、食鹽０．５％、復(fù)合維生素０．１％、微量元素０．１％、常規(guī)稻米１６.0％；轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻小鼠飼料配方為轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻稻米１６.0％，其他成分和常規(guī)水稻小鼠飼料成分相同。

１．３ 試驗方法

試驗共分2個處理，即用轉(zhuǎn)基因水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３和親本雜交水稻汕優(yōu)６３配制的飼料在溫室內(nèi)分別喂飼昆明雌性小白鼠，小鼠飼養(yǎng)的溫室條件為溫度（２５±１）℃，濕度６０％±５％，每處理重復(fù)５次，每個重復(fù)５只小鼠。記錄每只小鼠的初始體重，每天更換飼料，并記錄每周飼料的投放量和小鼠體重。同時收集小鼠糞便和取食后的剩余飼料，用烘箱烘干（８０ ℃，７２ ｈ）至恒重，稱量烘干后的重量。共計飼養(yǎng)和記錄５周直至本試驗結(jié)束。

１．４ 小鼠營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)

本試驗采用６個營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)，即平均相對生長率（Ｍｅａｎ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ，ＭＲＧＲ），相對生長率（Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ，ＲＧＲ）、相對消耗率（Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ＲＣＲ）、毛轉(zhuǎn)化率（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｉｎｇｅｓｔｅｄ ｆｏｏｄ，ＥＣＩ）、凈轉(zhuǎn)化率（Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｏｆ ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ ｏｆ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｆｏｏｄ，ＥＣＤ）和近似消化率（Ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ ｄｉｇｅｓｔｉｂｉｌｉｔｙ，ＡＤ）。

其中，相對生長率ＲＧＲ＝（Ｗ２-Ｗ１）／Ｐ，平均相對生長率ＭＲＧＲ＝（ｌｏｇＷ２-ｌｏｇＷ１）／ｔ，相對消耗率ＲＣＲ＝Ｑ／Ｐ，毛轉(zhuǎn)化率ＥＣＩ＝［（Ｗ２-Ｗ１）／Ｑ）］×１００％，凈轉(zhuǎn)化率ＥＣＤ＝［（Ｗ２-Ｗ１）／（Ｑ-Ｆ）］×１００％，近似消化率ＡＤ＝［（Ｑ-Ｆ）／Ｑ］×１００％。式中，Ｗ１為小鼠初體重（ｇ）；Ｗ２為小鼠終體重（ｇ）；ｔ為小鼠取食飼料時間（ｄ）；Ｐ為小鼠不同喂飼時間平均重量（ｇ）；Ｑ為小鼠不同喂飼時間取食量（ｇ）；Ｆ為小鼠不同喂飼時間排糞量（ｇ）。

１．５ 統(tǒng)計分析

用ＳＡＳ６．１２統(tǒng)計分析軟件分析處理間試驗數(shù)據(jù)的差異顯著性。單因素方差分析比較不同飼料同一喂飼時間及同一飼料不同喂飼時間對小鼠取食量、排糞量和營養(yǎng)效應(yīng)的差異。雙因素方差分析不同飼料和喂飼時間對小鼠取食量、排糞量和營養(yǎng)效應(yīng)的影響。處理間的差異顯著性采用ＬＳＤ檢驗。

２ 結(jié)果

２．１ 不同飼料和喂飼時間對小鼠取食量、排糞量和營養(yǎng)效應(yīng)的影響

不同飼料和喂飼時間對小鼠取食量、排糞量和營養(yǎng)效應(yīng)的影響結(jié)果見表１。從表１可以看出，不同水稻稻米制成的飼料對小鼠取食量（Ｐ＜０．００１）、排糞量（Ｐ＜０．００１）、平均相對生長率（ＭＲＧＲ）（Ｐ＜０．０５）及相對消耗率（ＲＣＲ）（Ｐ＜０．０５）有顯著影響；不同喂飼周數(shù)對小鼠取食量、排糞量及所有的營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)均有顯著的影響（Ｐ＜０．００１）；二者的交互作用對小鼠取食量（Ｐ＜０．００１）、排糞量（Ｐ＜０．００１）、相對消耗率（ＲＣＲ）（Ｐ＜０．０１）和近似消化率（ＡＤ）（Ｐ＜０．００１）均有顯著的影響。

２．２ 小鼠取食兩種水稻飼料不同時間其取食量和排糞量的差異

小鼠取食兩種水稻飼料不同時間其取食量和排糞量的差異見圖１。從圖１可以看出，小鼠的取食量在累積取食轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料第１、２、３、４、５周均顯著低于累積取食常規(guī)稻米制備的飼料（Ｐ＜０．０５）。小鼠的排糞量在累積取食轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料第３、４、５周時顯著低于取食常規(guī)稻米制備的飼料（Ｐ＜０．０５），而在第１和第２周無顯著的差異。

２．３ 小鼠取食兩種水稻飼料不同時間其營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)的差異

２．３．１ ＭＲＧＲ和ＲＧＲ 從圖２可以看出，昆明雌性小白鼠累積喂飼轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料第1周時的相對生長率（ＲGＲ）顯著高于第２、３、４、５周（Ｐ＜０．０１）；而小鼠在取食兩種稻米制備的飼料同一時間的平均相對生長率（ＭＲＧＲ）無顯著差異。

昆明雌性小白鼠的相對生長率（ＲＧＲ）在累積喂飼兩種稻米制備的飼料第４周時存在顯著差異（Ｐ＜０．０５），小鼠在取食轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料第１、２、３和５周時的相對生長率（ＲＧＲ）與取食常規(guī)稻米制備的飼料無顯著差異。

２．３．２ ＲＣＲ和ＥＣＩ 從圖３可以看出，昆明雌性小白鼠累積喂飼兩種稻米制備的飼料第1周時的相對消耗率（ＲＣＲ）顯著高于第２、３、４、５周（Ｐ＜０．０１）；小鼠在累積取食轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料第３周時的相對消耗率顯著低于常規(guī)稻米制備的飼料（Ｐ＜０．０１），其他時間無顯著差異。

昆明雌性小白鼠累積喂飼兩種稻米制備的飼料第１周時的毛轉(zhuǎn)化率（ECI）顯著高于第２、３、４、５周（Ｐ＜０．０１）；而小鼠在取食兩種稻米制備的飼料同一時間的毛轉(zhuǎn)化率無顯著差異。

２．３．３ ＥＣＤ和ＡＤ 從圖４可以看出，昆明雌性小白鼠累積喂飼兩種稻米制備的飼料第１周時的凈轉(zhuǎn)化率（ECD）顯著高于第２、３、４、５周（Ｐ＜０．０１）；而小鼠在取食兩種稻米制備的飼料后同一時間其凈轉(zhuǎn)化率無顯著差異。

昆明雌性小白鼠在累積取食轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料第１周時的近似消化率（AD）顯著低于常規(guī)稻米制備的飼料（Ｐ＜０．０１），在第２周時的近似消化率與常規(guī)稻米制備的飼料無顯著差異，而在第３、４、５周時的近似消化率顯著高于常規(guī)稻米制備的飼料（Ｐ＜０．０５）。

３ 討論

國內(nèi)大量學(xué)者利用鼠在轉(zhuǎn)基因水稻方面開展了大量的生物學(xué)、藥理學(xué)和毒理學(xué)等研究。王忠華等［１４］利用大鼠急性中毒試驗和喂養(yǎng)試驗對Ｂｔ水稻稻米的動物毒理性進(jìn)行了研究，未發(fā)現(xiàn)試驗動物出現(xiàn)明顯中毒癥狀，大鼠解剖也未見異常病理改變，對大鼠體重、進(jìn)食量、食物利用率、血常規(guī)、血生化及臟器無損害性影響。另外，利用轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻［１５］、轉(zhuǎn)Ｘａ２１水稻［１６］和轉(zhuǎn)豇豆胰蛋白酶抑制劑（ＣｐＴＩ）稻米［１７］對大鼠進(jìn)行的喂養(yǎng)試驗的結(jié)果表明，大鼠除發(fā)現(xiàn)少數(shù)雌性的血液學(xué)指標(biāo)存在差異外，大部分生理指標(biāo)沒有顯著性差異，且所有指標(biāo)均在正常范圍內(nèi)，因此得出轉(zhuǎn)基因水稻與親本水稻在營養(yǎng)學(xué)與毒理學(xué)方面基本相似。李英華等［１６］用轉(zhuǎn)Ｘａ２１基因水稻在對７２只雌雄各半的大鼠進(jìn)行了為期２８ｄ的喂養(yǎng)后，對其進(jìn)食量、體重身長、蛋白質(zhì)功效比、血常規(guī)、血生化、臟體比和骨密度等指標(biāo)進(jìn)行了檢測和比較，認(rèn)為轉(zhuǎn)基因大米對大鼠沒有明顯的毒副作用［１８］。趙志輝等［１９］將轉(zhuǎn)ｃｏｄＡ基因水稻及其親本按照３０％的比例摻入大鼠飼料中，喂養(yǎng)３０ ｄ后，檢測大鼠體重增重以及血液中的各項激素指標(biāo)，結(jié)果表明沒有顯著差異。

上述研究主要從營養(yǎng)學(xué)、毒理學(xué)等方面研究了大鼠對不同轉(zhuǎn)基因水稻（如轉(zhuǎn)ｃｏｄＡ基因、轉(zhuǎn)Ｘａ２１基因、轉(zhuǎn)ＣｐＴＩ基因）的生物學(xué)和生理代謝響應(yīng)，但目前很少有試驗開展轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻稻米對小鼠生物學(xué)特性和生理代謝方面的研究，由于我國農(nóng)業(yè)部已經(jīng)批準(zhǔn)發(fā)放了轉(zhuǎn)Ｂｔ基因抗蟲水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３的生產(chǎn)應(yīng)用安全證書，這是我國首度為轉(zhuǎn)基因糧食作物頒發(fā)安全證書，后期面臨著轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻生物的安全性評價和商業(yè)化推廣等環(huán)節(jié)，因此，必須用整體動物小鼠進(jìn)行轉(zhuǎn)Ｂｔ基因抗蟲水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３的相關(guān)研究。中國昆明小鼠作為試驗動物用于生物醫(yī)學(xué)研究已有半個多世紀(jì)之久，一直是我國生產(chǎn)量、使用量最大的遠(yuǎn)交群（封閉群）小鼠，因此，利用昆明小鼠開展轉(zhuǎn)Ｂｔ基因抗蟲水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３的相關(guān)試驗可為轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻安全性評價和商品化推廣提供重要的理論基礎(chǔ)。

本研究中，不同飼料和喂飼周數(shù)對小鼠取食量、排糞量和大部分營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)均有顯著的影響，其原因主要是昆明雌性小白鼠對飼料取食量及排糞量主要是以累計喂飼周數(shù)來計算，因此，隨著取食周數(shù)的延長，小鼠的累積取食量和排糞量必然大幅增加，造成小鼠的取食量和排糞量對兩種水稻飼料的喂飼時間（不同喂飼周數(shù)）存在著極顯著的影響；昆明雌性小白鼠主要的營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)是建立在小鼠不同周數(shù)的累積取食量、排糞量，而小鼠的初始重量是恒定的，因此，數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明，同種飼料不同喂飼時間對小鼠所有的營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)均有顯著的影響。另外，昆明雌性小白鼠在取食轉(zhuǎn)基因稻米制備的飼料第１、２、３、４、５周的取食量和第３、４、５周排糞量較取食常規(guī)稻米制備的飼料顯著降低，但同時我們也發(fā)現(xiàn)，小鼠在累積喂飼兩種稻米制備的飼料同一時間其平均相對生長率、毛轉(zhuǎn)化率和凈轉(zhuǎn)化率無顯著差異，說明轉(zhuǎn)基因水稻稻米制備的飼料雖可影響昆明雌性小白鼠的取食和排泄，但對昆明雌性小白鼠的生長效率和最終飼料的轉(zhuǎn)化率無明顯影響，表明轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻制備的飼料對小型哺乳動物（如昆明雌性小白鼠）的食物利用效率無明顯副作用。當(dāng)然，轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻對哺乳動物的影響是一個綜合效應(yīng)，本研究主要考慮的是轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻制備的飼料對昆明雌性小白鼠營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)的影響，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻對昆明雌性小白鼠取食和食物利用效率是安全的。后期的試驗應(yīng)該從小型哺乳動物（如本試驗中的昆明小白鼠）對轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻的生理代謝響應(yīng)（如保護(hù)酶和解毒酶等酶活性）和繼代繁殖（如連續(xù)多代的飼養(yǎng)）方面開展研究。

本試驗通過室內(nèi)用轉(zhuǎn)基因水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３及其親本雜交水稻汕優(yōu)６３稻米制備的小鼠人工飼料，分別在喂飼不同時間后測定昆明種雌性小白鼠的取食量、排糞量和營養(yǎng)效應(yīng)指標(biāo)，數(shù)據(jù)表明轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻對昆明雌性小白鼠取食和食物利用效率是安全的，從營養(yǎng)效應(yīng)方面的響應(yīng)對轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３進(jìn)行了安全性評價，試驗結(jié)果可為農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)發(fā)放的轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻Ｂｔ汕優(yōu)６３商品化推廣提供重要的理論支持。

致謝：本研究得到了武漢理工大學(xué)碩士生覃銅城、本科生陳超、葉 侃、李 峰、宋雨林、王新葉、楊佳麗等的大力協(xié)助，在此一并致謝。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 王忠華，舒慶堯，崔海瑞，等． Ｂｔ轉(zhuǎn)基因水稻“克螟稻”雜交后代二化螟抗性研究初報［Ｊ］． 作物學(xué)報，２０００，２６（３）：３１０－３１４．

［２］ 王世貴，葉恭銀，胡 萃，等． 轉(zhuǎn)CｒｙｌＡｂ基因水稻對二化螟幼蟲的致死和亞致死效應(yīng)［Ｊ］． 浙江大學(xué)學(xué)報（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），２００３，２９（６）：６３９－６４３．

［３］ 崔旭紅，焦曉國，張國安，等． 轉(zhuǎn)Ｂｔ基因水稻對稻飛虱和蜘蛛種群數(shù)量的影響［Ｊ］． 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，２００２，２１（４）：３５６－３５８．

［４］ 劉志誠，葉恭銀，傅 強(qiáng)，等． CｒｙｌＡｂ基因水稻對擬水狼蛛捕食作用間接影響的評價［Ｊ］．中國水稻科學(xué)，２００３，１７（２）：１７５－１７８．

［５］ ＴＵ Ｊ Ｍ，ＺＨＡＮＧ Ｇ Ａ，ＤＡＴＴＡ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｆｉｅｌｄ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｅｌｉｔｅ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｈｙｂｒｉｄ ｒｉｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｔｔｓｉｓ ８－ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０００，１８：１１０１－１１０４．

［６］ ＣＡＲＭＥＮＣＩＴＡ Ｃ Ｂ， ＲＥＭＥＤＩＯＳ Ｍ Ａ， ＭＩＣＨＡＥＬ Ｂ Ｃ． Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｉｃｅ ｌｉｎｅｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ ｔｏｘｉｎ ｇｅｎｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｂｒｏｗｎ ｐｌａｎｔ ｈｏｐｐｅｒ ａｎｄ ｉｔｓ ｐｒｅｄａｔｏｒ Ｃｙｒｔｏｒｈｉｎｕｓ ｌｉｖｉｄｉ ｐｅｎｎｉｅｓ［Ｊ］． Ｅｎｔｏｍｏｌｏｇｉａ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｉｓ ｅｔ Ａpｐｌｉｃａｔａ， ２００２，１０２：２１－２８．

［７］ 劉志誠，葉恭銀，胡 萃．抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻和化學(xué)殺蟲劑對稻田節(jié)肢動物群落的影響［Ｊ］．應(yīng)用生態(tài)學(xué)報，２００４，１５（１２）：２３０９－２３１４．

［８］ 趙玉艷， 蔡磊明，王 捷． 轉(zhuǎn)蘇云金芽孢桿菌基因作物安全性研究［Ｊ］． 衛(wèi)生毒理學(xué)雜志，２００４，１８（１）：５４－５７．

［９］ 王麗冰，劉立軍，顏亨梅． 轉(zhuǎn)Ｂｔ抗蟲基因水稻的研究進(jìn)展和生物安全性及對策［Ｊ］． 生命科學(xué)研究，２００９，１３（２）：５６－５７．

［１０］ 袁 柱， 站 雅，周玲仙，等． Ｌ－鹽酸賴氨酸對大白鼠生長發(fā)育及肝、腎毒性作用的初步觀察［Ｊ］． 昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報，１９９０，１１（３）：１９－２３.

［１１］ 馬小明，朱風(fēng)華，呂 翠，等． ＺＥＮ染毒飼料中添加酯化葡甘露聚糖對小鼠生長性能及免疫指標(biāo)的影響［Ｊ］． 畜牧與獸醫(yī)，２０１０，４２（１）：６７－７２．

［１２］ 孫全文，杜建華，常 寶． 不同蛋白質(zhì)水平的日糧對實驗大鼠生長發(fā)育、繁殖性能的影響［Ｊ］． 張家口醫(yī)學(xué)院學(xué)報，２００３， ２０（５）：１４－１６．

［１３］ 劉雨芳，劉文海，李 雙，等． 轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻ＭＳＡ４大米對大鼠臟器系數(shù)、血常規(guī)與血生化的影響［Ｊ］． 湘潭師范學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），２００７，２９（４）：１１２－１１６．

［１４］ 王忠華，王 茵，崔海瑞，等． Ｂｔ 水稻克螟稻稻米毒理性評價研究初報［Ｊ］． 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，２００２，３５（１２）：１４８７-１４９２．

［１５］ ＷＡＮＧ Ｚ， ＷＡＮＧ Ｙ， ＣＵＩ Ｈ， ｅｔ ａｌ． Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｒｉｃｅ ｆｌｏｕｒ ｗｉｔｈ ａ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｃｒｙｌＡｂ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｔｅｎｓｉｓ［Ｊ］． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，２００２，８２：７３８－７４４．

［１６］ 李英華，樸建華，陳小萍，等． 轉(zhuǎn)基因大米的免疫毒理學(xué)評價［Ｊ］． 中國公共衛(wèi)生，２００４，２０（４）：４０４－４０６．

［１７］ 卓 勤，陳小萍，樸建華，等． 轉(zhuǎn)豇豆胰蛋白酶抑制劑大米９０天喂養(yǎng)實驗研究［Ｊ］． 衛(wèi)生研究，２００４，３３（２）：１７６－１７９．

［１８］ 李英華，樸建華，陳小萍，等． Ｘａ２１轉(zhuǎn)基因大米的營養(yǎng)學(xué)評價［Ｊ］． 衛(wèi)生研究，２００４，３３（３）：３０３－３０６．

［１９］ 趙志輝，楊立桃，艾曉杰，等． 轉(zhuǎn)ｃｏｄＡ基因的耐鹽堿水稻對大鼠生理代謝的影響及外源基因的水平轉(zhuǎn)移［Ｊ］． 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，２００５，１３（３）：３４１－３４６．