復合刺激對亞健康大鼠模型耐疲勞能力及血清SOD、MDA的影響

　　 摘 要：目的：觀察復合刺激對亞健康大鼠模型耐疲勞能力及其血清SOD、MDA的影響。方法：采用游泳運動、睡眠剝奪和夾尾刺激等復合因素制造亞健康大鼠模型，檢測動物體重、進食量、耐疲勞能力及血清SOD、MDA等指標的變化。結果：模型組動物體重低于正常組，飲水量、進食量均明顯少于正常組，5 min內不動時間明顯多于正常組，血清SOD活性明顯低于正常組，MDA明顯高于正常組。結論：復合因素造模法兼顧了亞健康的成因和表現，模型動物的宏觀表現和微觀指標均具備亞健康的基本特征，該造模方式具有一定的科學性和合理性。
　　關鍵詞：復合刺激；亞健康；耐疲耐；SOD；MDA
　　中圖分類號：R965.1 文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）08-0054-02
　　
　　亞健康的防治是目前中西醫共同關注的問題。缺乏公認的動物模型是制約亞健康研究深入開展的關鍵問題之一。過勞、睡眠障礙、精神壓力過大既是亞健康的誘發因素，又是亞健康的主要表現。因此，課題組采用游泳運動、睡眠剝奪和夾尾刺激等復合因素作用于Wistar大鼠，以模仿亞健康的成因和癥狀。為了明確其微觀機制，正確評價該造模方式的科學性與合理性，課題組又開展了進一步研究。
　　1 材料與方法
　　1.1 實驗動物 清潔級健康雄性Wistar大鼠，3月齡，雌雄各半，體重（200±20）g，由華中科技大學同濟醫學院實驗動物學部提供，合格證號：1016152。適應性飼養1周后，進行游泳運動初篩，剔除不擅游泳者，完全隨機法分為正常組（10只）、模型組（10只）。
　　1.2 主要儀器及試劑 SOD試劑盒，批號20101113，南京建成生物試劑公司；MDA試劑盒，批號20071017，南京建成生物試劑公司；80-2型離心機，上海手術器械廠；752型紫外光柵分光光度計，山東高密分析儀器廠；YC-300L型醫用冷藏箱，中科美菱；FM50型制冰機，北京長流科學儀器公司。
　　1.3 動物模型的建立 采用應激和運動致疲勞相結合制造動物模型。①運動造模 參考文獻［1］稍加改變。制作160 cm×80 cm×60 cm的注水鼠箱，水深30 cm，水溫25 ℃左右。第1周每天8點將大鼠放入水中，強迫游泳20 min。第2、3、4周分別增加游泳時間為30、40、50 min。游泳過程中動物如體力不支沉入水中，及時撈出，防止溺亡；②睡眠剝奪造模 參考文獻［2］稍作改變。每天游泳運動結束后，在造模箱中放置10個直徑為6.3 cm、高31 cm的平臺（平臺面距水面約1.0 cm）。動物可以上臺休息，箱頂蓋金屬網，動物可自由攝食飲水，但不能睡眠。若其睡眠，則由于肌肉張力松弛而落人水中。造模一直持續到20：00點；③應激造模 參考文獻［3］稍加改進。20：00點將動物從平臺上取下，放入飼養籠。用尖端纏有紗布的止血鉗夾其中一只大鼠尾部，令其與其他大鼠撕打，模仿人類生存環境不佳，競爭激烈，精神壓力大的情況。夾尾以不破皮、不流血為度。每次刺激2 h。定期更換夾尾大鼠，使造模結束時每只大鼠夾尾次數基本相同。22∶00點去除止血鉗，全天造模結束。連續造模4周，共28 d。
　　1.4 指標檢測 記錄造模最后1周，每籠大鼠每天的進食和飲水量，造模結束后測量各組動物體重變化，采用鼠尾懸掛試驗測試動物抗疲勞能力，測試結束后禁食12 h，斷頭取血，測血清超氧化物質化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量。
　　1.5 統計學處理 各組數據均以（Ax-G±s ）表示，運用SPSS10.0數據包進行統計學處理。以α=0.05為標準，采用單因素方差分析，用LSD法兩兩比較組間數據的差異。
　　2 結果
　　2.1 一般情況 模型組動物表現為皮毛干枯、脫落，精神萎靡、活動量減少，易激惹等情況。正常組則皮毛光亮潤澤，活潑多動，發育正常，體重增長正常。
　　2.2 2組動物體重變化比較 造模結束后測量各組動物體重變化，結果見表1。
　　2.3 2組動物飲水量、進食量變化比較 記錄造模第4周每籠大鼠每天的進食和飲水量，7 d數據平均結果見表2。
　　2.4 2組動物鼠尾懸掛試驗測試結果 造模結束后，將各組大鼠尾端1 cm的部位穿過中央鉆有直徑1cm的孔的水平有機玻璃板，板離地面1m左右，使動物呈倒掛狀。動物為克服不正常的體位而掙扎活動，但活動一定時間后，出現間斷性“不動”顯示“失望”狀態。計算5min內的不動時間，并同時觀察大鼠掙扎幅度及疲勞狀態［4］。結果模型組動物的掙扎幅度明顯小于正常組動物，呈現間斷性掙扎，掙扎時間明顯少于正常組，間歇次數明顯多于正常組。正常組則掙扎幅度較大，掙扎時間長，掙扎過程中雖也有間歇，但間歇次數少，間歇時間短。2組動物5 min內不動時間的測試結果見表3。
　　2.5 2組血清SOD活性、MDA含量檢測結果 造模結束后禁食12 h，斷頭取血，3000 r/min離心10 min，取血清，按試劑盒說明書中方法，測定SOD活力和MDA含量。檢測結果見表4。
　　3 討論
　　動物模型的評價：①應激造模：亞健康疲勞動物模型的制造目前尚無公認的辦法，本課題采用復合因素造模，即：將心理應激與過度運動致疲勞相結合。其理論依據是亞健康狀態的產生與環境、心理等因素有關，本研究采用的心理應激造模法目前多用于制造抑郁癥模型，但課題組認為該方法也符合亞健康的致病原因，似可作為亞健康狀態的造模法；②過度運動造模：過度疲勞既是亞健康的成因，又是亞健康的重要癥狀之一，因此，以游泳運動導致動物疲勞，兼顧了亞健康的成因和癥狀；③睡眠剝奪造模：亞健康的形成與睡眠不足互為因果，采用睡眠剝奪法造模，也符合亞健康的成因和表現。實驗結果證實，該模型較好地反映了亞健康狀態的疲勞、失眠、抑郁、食少，體重減輕和體能下降等現象。表1結果顯示，模型組動物體重低于正常組，顯示復合因素造模，可以影響動物的生長發育和新陳代謝，與亞健康者體重減少表現相似，說明本模型符合亞健康的特點。從表2可以看出，模型組動物飲水量、進食量均明顯少于正常組，說明該造模方法能夠較好的復制亞健康食欲差，食量少的特點。表3結果顯示，模型組動物5 min內不動時間明顯多于正常組，說明模型組動物疲勞程度較為嚴重，本模型能夠模仿亞健康的過度疲勞感。自由基在疲勞過程中起著重要的作用，機體代謝過程中，自由基不斷生成，但又迅速清除，兩者處于平衡狀態。若此動態平衡受到破壞，自由基在體內生成過多或清除過慢，則過剩的自由基可對機體的生物大分子進行破壞，導致組織器官功能紊亂。體內自由基清除有賴于滅活自由基有關的酶類，SOD是超氧化物自由基強有力的清除劑，為體內唯一能直接淬滅自由基的酶，在抗自由基損傷中起著重要作用。從表4可以看出，模型組動物SOD活性明顯低于正常組，說明亞健康動物體內存在著清除自由基能力降低的現象。自由基的毒性可表現為脂質過氧化，即發生在不飽和脂肪酸共價鍵上的一系列自由基反應，MDA是不飽和脂肪酸過氧化作用終產物，它在血清中的含量，間接反映了自由基反應對組織的破壞程度。表4結果顯示，模型組MDA明顯高于正常組，說明模型組動物體內組織、器官遭受自由基損害非常突出。
　　綜上所述，該造模辦法將亞健康的成因和癥狀放在一起綜合考慮，具有一定的科學性和合理性。既充分考慮了亞健康的3個主要成因：過度疲勞、精神壓力大和睡眠障礙；又考慮了亞健康的3大主癥：疲勞、睡眠障礙和情緒異常。這種運用復合因素制造的亞健康模型國內未見報道，擬在今后開展更為深入的研究。
　　參考文獻：
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　　［2］王秀云，李積勝，劉公望，等.睡眠剝奪對亞健康形成的影響及相關機制［J］.天津中醫藥，2006，23（2）：108~111.
　　［3］聶丹麗，陳嘉嶼，崔大匯，等.胃動靈對肝郁、脾虛大鼠模型胃腸運動影響的實驗研究［J］.陜西中醫，2000，21（6）：283.
　　［4］武淑娟，張青川，何采輝，等.電針對復合應激致慢性疲勞大鼠下丘腦組織中單胺類神經遞質含量的影響［J］.針刺研究，2006，31（2）：96~99.
　　（收稿日期：2011-05-03）