HPLC-ELSD法測定玉屏風(fēng)顆粒中甘露醇的含量

　　摘要：目的：建立用液相色譜法聯(lián)用蒸發(fā)光散射檢測器（HPLC-ELSD）測定玉屏風(fēng)顆粒中輔料甘露醇的含量。方法：采用Prevail Carbohydrate ES 柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈—水（75∶25），流速1.0 mL?min-1，蒸發(fā)光檢測器。結(jié)果：線性范圍1.509 76～11.323 2 μg，r＝0.999 9；平均回收率為99.3％，RSD＝1.44％（n＝6）。結(jié)論：該法快速、準(zhǔn)確、可靠；可作為玉屏風(fēng)顆粒輔料甘露醇的檢查。
　　關(guān)鍵詞：液相色譜法聯(lián)用蒸發(fā)光散射檢測器；玉屏風(fēng)顆粒；輔料；甘露醇；含量
　　中圖分類號：R284文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）12-0059-02
　　
　　玉屏風(fēng)顆粒收載于《中國藥典》2010年版一部［1］，由黃芪、防風(fēng)及炒白術(shù)3味藥組成，具有益氣，固表，止汗之功效。主要用于表虛不固，自汗惡風(fēng)，面色晄白，或體虛易感風(fēng)邪者。玉屏風(fēng)顆粒為國家中藥保護(hù)品種，全國獨(dú)家生產(chǎn)，生產(chǎn)廠家為廣東環(huán)球制藥股份有限公司。甘露醇是玉屏風(fēng)顆粒中的稀釋劑，較傳統(tǒng)稀釋劑有易溶解等優(yōu)點(diǎn)，但具有對人體腸道的清理和輕微的脫水作用。為考察其輔料的投料情況，此次試驗(yàn)建立了HPLC-ELSD法測定玉屏風(fēng)顆粒中輔料甘露醇的含量，為輔料的添加及控制提供了科學(xué)依據(jù)。
　　1儀器和試藥
　　Agilent1200高效液相色譜儀，帶四元泵；瓦里安300蒸發(fā)光散射檢測器；自動進(jìn)樣器；在線真空脫氣機(jī)；智能化柱溫箱及HP化學(xué)工作站；乙腈為HPLC級，水為超純水。甘露醇對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量測定用，批號：111522-200607）。26批玉屏風(fēng)顆粒樣品均由廣東環(huán)球制藥股份有限公司提供。
　　2色譜條件
　　色譜柱：Prevail Carbohydrate ES 柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈—水（75∶25）；流速：1.0 mL?min-1；柱溫：30 ℃；蒸發(fā)光檢測器，霧化器溫度：90 ℃；漂移管溫度：60 ℃；氣體流速：2.0 L?min-1。
　　3溶液的配制
　　3.1對照品溶液的配制精密稱取甘露醇對照品適量，加甲醇制成每1 mL含甘露醇 0.75 mg 的溶液，即得。
　　3.2供試品溶液的配制取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水50 mL，稱定重量，微熱使溶解，放冷，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液2 mL，于10 mL量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過，濾液過0.45um微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。
　　3.3陰性樣品溶液的配制取不含輔料的樣品制劑，按上述供試品溶液制備方法制備，即得陰性樣品溶液。
　　4方法與結(jié)果
　　4.1系統(tǒng)適用性分別精密吸取對照品溶液5、10 μL，供試品溶液10 μL，陰性樣品溶液10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。在此色譜條件下，甘露醇色譜峰理論塔板數(shù)應(yīng)不低于10000，且陰性樣品溶液無干擾。結(jié)果見圖1。圖1玉屏風(fēng)顆粒液相色譜圖
　　A.對照品;B.樣品;C.陰性樣品
　　4.2線性關(guān)系精密稱取甘露醇對照品適量，置量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，再以水稀釋至一系列濃度的對照品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，以峰面積的對數(shù)（Y）對進(jìn)樣濃度的對數(shù)（X）作回歸統(tǒng)計(jì)，得回歸方程為Y=1.382 0 X+6.041 3，r=0.999 9（n=6），線性范圍為1.509 76 μg～11.3232 μg。
　　4.3精密度試驗(yàn)取“3.1”項(xiàng)下的對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，測得RSD為0.05％。表明儀器精密度良好。
　　4.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、4、9、14、19、24 h進(jìn)樣測定并計(jì)算峰面積的對數(shù)值。測得RSD為0.24％。表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
　　4.5重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品，平行制備5份供試品溶液，按上述色譜條件測定并計(jì)算。測得RSD為0.42％。表明方法的重現(xiàn)性良好。
　　4.6加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的同一樣品0.5 g，共6份，加入一定量的甘露醇對照品溶液，揮干溶液，按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備成加樣回收率供試液，并依法測定，結(jié)果見表1。
　　1.44137.01158.72293.3398.49137.53158.72293.4698.24138.41158.72295.2398.804.7含量測定取不同批次的玉屏風(fēng)顆粒樣品，按供試品溶液的配制項(xiàng)下制備供試品溶液，每個(gè)批次的樣品平行制備2份，測定玉屏風(fēng)顆粒中輔料甘露醇的含量，結(jié)果見表2。
　　5討論
　　5.1色譜柱的選擇甘露醇為極性化合物，在常規(guī)的C18柱上幾乎無保留，無法測定。氨基柱為中等極性柱，其鍵合相的氨基能與甘露醇選擇性作用，達(dá)到分離檢測的結(jié)果。故選擇氨基柱為固定相，乙腈—水（75∶25）為流動相時(shí)，甘露醇得到較好的分離及較高的理論塔板數(shù)。
　　5.2提取方法的選擇根據(jù)甘露醇極易溶于水，略溶于乙醇，不溶于乙醚等物理特性，采用水提醇沉法去除雜質(zhì)，通過對乙腈濃度，溶劑用量和時(shí)間的考察，最終確定正文所述的最佳提取工藝。
　　5.3檢測器的選擇甘露醇本身沒有紫外吸收，故不能選擇紫外檢測器，大多數(shù)文獻(xiàn)采用碘量法、薄層色譜掃描法［2］以及高效液相示差折光檢測器［3］，其中碘量法操作復(fù)雜，專屬性不高，示差折光檢測器靈敏度低，且對溫度和壓力的變化較敏感；而蒸發(fā)光散射檢測器對無紫外吸收或紫外末端吸收的樣品具有較強(qiáng)的優(yōu)勢，專屬性好，靈敏度高，故此次試驗(yàn)采用蒸發(fā)光散射檢測器進(jìn)行玉屏風(fēng)顆粒中輔料甘露醇的含量測定。
　　5.4對26批玉屏風(fēng)顆粒輔料甘露醇的測定結(jié)果，含量在26.3%～27.8%之間，可以看出輔料甘露醇的投料較穩(wěn)定，可靠。
　　
　　參考文獻(xiàn)：
　　［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典［M］.一部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：616.
　　［2］汪寶琪，龐志功