清肺抑火口腔噴霧劑提取工藝的研究

　　摘要：目的：優化清肺抑火口腔噴霧劑的提取工藝。方法：以梔子苷、黃芩苷含量為指標，采用高效液相色譜法測定梔子苷、黃芩苷含量；用正交實驗設計優選最佳提取工藝。結果：最佳提取工藝為：將藥材中的梔子和黃芩藥材粉碎成細粉，加入8倍量80%乙醇浸泡60min，回流提取3次，每次60min。結論：該提取工藝簡便、合理可行。
　　關鍵詞：清肺抑火口腔噴霧劑；正交設計；提取工藝；梔子苷；黃芩苷；高效液相色譜法
　　中圖分類號：R284.2文獻標識碼：A
　　文章編號：1007-2349（2011）12-0057-03
　　
　　清肺抑火口腔噴霧劑處方源于衛生部藥品標準第二十冊清肺抑火膏，由黃芩、大黃、天花粉、梔子、桔梗、前胡、苦參、知母、黃柏組成。具有清肺止咳、降火生津作用，臨床常用于肺熱咳嗽、痰涎壅盛、咽喉腫痛、口鼻生瘡、牙齒疼痛、牙齦出血、大便干燥、小便赤黃等癥。噴霧劑是由藥材提取物或藥材細粉與適宜的附加劑混合借助手動泵的壓力或其他方法將內容物以霧狀等形態噴出的制劑［1］。中藥噴霧劑主要通過呼吸道、皮膚或黏膜等途徑給藥，與傳統中藥劑型相比，中藥噴霧劑具有藥物分散均勻，生物利用度高，療效快，使用方便的特點。同時中藥噴霧劑能使藥物直接作用于病變部位，減少藥物用量，減輕或避免藥物不良反應，如可用于治療上呼吸道疾病、各種腔道疾病、外傷內傷以及全身性疾病，有較好的臨床療效［2］。本實驗以梔子苷、黃芩苷含量為考察指標，采用高效液相色譜法測定梔子苷、黃芩苷含量；用正交實驗設計對清肺抑火口腔噴霧劑的藥材提取最佳工藝進行優化研究。
　　1儀器與材料
　　1.1儀器與設備Agilent 1100高效液相色譜儀、DAD檢測器、四元泵、Agilent 1100工作站，Bp211D電子分析天平（德國，sartorius），FA1004 型電子天平（上海精科天平有限公司），RE-2000旋轉蒸發器（上海亞榮生化儀器廠），KQ-500B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），DZ-2BC型真空干燥箱（天津市康司特儀器有限公司）。
　　1.2試劑與材料梔子苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110749-200714），黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：120649-200726），甲醇、乙腈（色譜純，天津市天昊化工有限公司），甲醇（分析純，天津市化學試劑批發公司），磷酸（分析純，天津市科密歐化學試劑開發中心），95%食用乙醇（天津市津酒集團），黃芩、梔子、天花粉、桔梗、知母、大黃、前胡、黃柏、苦參（天津市敬一堂藥店）。
　　2方法與結果
　　2.1正交試驗設計
　　2.1.1因素水平［3~4］以梔子苷、黃芩苷含量為考察指標，以對梔子、黃芩藥材的粉碎度、提取溶劑、提取次數和提取時間為考察因素，選用L9（34）正交表進行試驗。因素水平見表1。
　　表1因素水平
　　水平因素粉碎度/mm
　　A提取溶劑
　　B提取次數/次
　　C提取時間/min
　　D12濾，回收乙醇，濃縮至一定體積；3、6、9號80%乙醇提取液靜置，過濾，回收乙醇，濃縮至一定體積。即得1～9號提取液。
　　2.2提取液中梔子苷、黃芩苷含量測定
　　2.2.1色譜條件［1］色譜柱、流速和柱溫均為依利特C18（Φ4.6 mm×200 mm，5 μm）、1.0 mL?min-1和30 ℃；流動相：梔子苷為乙腈-水（11∶89），黃芩苷為甲醇-水-磷酸（45∶55∶0.2）；檢測波長：梔子苷為238 nm，黃芩苷為280 nm。
　　2.2.2標準曲線的制備精密稱取梔子苷和黃芩苷對照品適量，分別用甲醇溶解制成梔子苷對照品溶液（0.198 μg?μL-1）和黃芩苷對照品溶液（0.402 μg?μL-1）。精密吸取梔子苷對照品溶液6、8、10、12、14、16、18、20 μL和黃芩苷對照品溶液4、6、8、10、12、14 μL依法進樣，測定梔子苷和黃芩苷峰面積積分值y（見圖1、2），建立梔子苷和黃芩苷對照品峰面積積分值y關于其進樣量x（μg）的回歸方程分別為y=1 232.2x+154.99（r＝0.999 8）和y=1 461.5x-160.43（r＝0.999 8），其線性范圍分別為1.19～3.95 μg和1.61～5.63 μg。
　　圖1梔子苷對照品高效液相色譜圖（A.梔子苷）圖2黃芩苷對照品高效液相色譜圖（B.黃芩苷）
　　2.2.3提取液供試品溶液的制備分別精密吸取1～9號提取液適量置蒸發皿中，真空干燥（60 ℃），得到干粉，并精密稱重。精密稱取1～9號干粉各0.5 g，置具塞錐形瓶中，加甲醇20 mL超聲30 min，移置25 mL容量瓶中定容，混勻后用0.45 μm微孔濾膜過濾，得1～9號供試液。
　　2.2.4精密度試驗分別精密吸取梔子苷和黃芩苷對照品溶液各10 μL依色譜條件進樣，并分別重復6次，測得梔子苷和黃芩苷峰面積積分值，計算的RSD分別為1.19%和1.26%。表明儀器精密度良好。
　　2.2.5穩定性試驗 取某號提取供試液，按0、2、4、8、12 h不同時間間隔精密吸取10 μL進樣，測得梔子苷峰面積積分值，計算RSD為1.09%。表明樣品溶液中梔子苷在12 h內穩定。再取另一號提取供試液并稀釋5倍，按0、2、4、8、24 h不同時間間隔精密吸取10 μL進樣，測得黃芩苷峰面積積分值，計算RSD為1.77%。表明樣品溶液中黃芩苷在24 h內穩定。
　　2.2.6陰性對照試驗分別取梔子陰性提取液（處方中缺梔子藥材）和黃芩陰性提取液（處方中缺黃芩藥材），按提取液供試品溶液的制備方法制備供試液，其中黃芩陰性供試液稀釋5倍，分別依法進樣測定，其色譜在梔子苷和黃芩苷相應保留時間無峰，說明處方中其他成分對二者的測定結果無干擾。
　　2.2.7提取液中梔子苷和黃芩苷含量測定精密吸取1～9號提取供試液10 μL分別依法進樣，測定梔子苷的峰面積積分值（見圖3），計算梔子苷含量（見表2）；將1～9號提取供試液稀釋5倍后，各精密吸取10 μL依法進樣，測定黃芩苷的峰面積積分值（見圖4），計算黃芩苷含量（見表2）。圖3提取液中梔子苷高效液相色譜圖（A.梔子苷）圖4提取液中黃芩苷高效液相色譜圖（B.黃芩苷）表2L9（34）正交試驗設計與結果
　　試驗號ABCD梔子苷含量
　　SSdfMSFPA0.456320.22814.210.1919B50.1668225.0834463.090.0022C5.323022.661549.140.0199誤差0.108320.0542--總56.05448---注