丙肝抗體假陽(yáng)性檢測(cè)中ELISA法應(yīng)用分析

葛魯偉

（吉林市紅十字中心血站，吉林省 吉林市132001）

酶聯(lián)免疫吸附法，即ELISA法，是臨床常用的酶免疫測(cè)定方法，現(xiàn)被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體的檢測(cè)中，經(jīng)過(guò)臨床證實(shí)，此方法能確定絕大部分的抗原抗體陽(yáng)性或陰性結(jié)果，但是，也會(huì)出現(xiàn)不少的假陽(yáng)性或者假陰性。這樣的情況，對(duì)臨床的確診或血液傳播疾病的篩查有很大的影響［1］。丙肝抗體假陽(yáng)性，就是其中常見(jiàn)的結(jié)果不準(zhǔn)確情況。為了更好地避免此種情況的發(fā)生，使酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)丙肝抗體的檢驗(yàn)更準(zhǔn)確，我站對(duì)153例中31例經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)為陽(yáng)性，但經(jīng)過(guò)核酸擴(kuò)增熒光分析法檢測(cè)為陰性的情況，進(jìn)行綜合分析，報(bào)道如下。

1 資料與方法

153例病例為2009年1月—2010年2月進(jìn)行丙肝抗體檢驗(yàn)的患者血液標(biāo)本。經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)結(jié)果為弱陽(yáng)性，為確診是否為陽(yáng)性，再次經(jīng)過(guò)核酸擴(kuò)增熒光分析法進(jìn)行檢測(cè)。

酶聯(lián)免疫吸附法采用全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)，核酸擴(kuò)增熒光分析法采用DA－7600核酸擴(kuò)增實(shí)時(shí)熒光基因分析儀。標(biāo)本檢驗(yàn)嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果

153例丙肝抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果為弱陽(yáng)性的標(biāo)本，經(jīng)核酸擴(kuò)增熒光分析法檢測(cè)后，有132例結(jié)果仍為陽(yáng)性，陽(yáng)性率為86.27%；有21例標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果為陰性，證明，ELISA的假陽(yáng)性率為13.73%。

3 假陽(yáng)性結(jié)果分析

經(jīng)過(guò)對(duì)該21例假陽(yáng)性結(jié)果的分析，我院總結(jié)其產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果主要因?yàn)橐韵聨c(diǎn)：

3.1 標(biāo)本內(nèi)物質(zhì)干擾

標(biāo)本中含有的物質(zhì)，對(duì)酶聯(lián)免疫法的檢測(cè)結(jié)果可能起到相應(yīng)的影響。標(biāo)本中含有類(lèi)風(fēng)濕性因子，尤其是在患有類(lèi)風(fēng)濕性疾病和患有自身免疫性疾病的患者中，其類(lèi)風(fēng)濕因子多為IGG，在進(jìn)行丙肝抗體檢測(cè)時(shí)，IGG也可能與酶聯(lián)免疫吸附時(shí)的固相IGG、酶標(biāo)IGG發(fā)生結(jié)合［2］，進(jìn)而增加了丙肝檢測(cè)的陽(yáng)性情況，產(chǎn)生弱陽(yáng)性。

高免疫球蛋白血癥的患者，由于血清中存在濃度相對(duì)較高的非特異性IGG［3］，可能會(huì)導(dǎo)致其與檢測(cè)時(shí)的固相表面相吸附，隨后再加入酶標(biāo)抗人IGG時(shí)，再與之結(jié)合，產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果。

標(biāo)本中如果存在過(guò)多的SOD，也可能會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果，使結(jié)果呈現(xiàn)陽(yáng)性。有研究表明，ELISA法在檢測(cè)丙肝抗體陽(yáng)性的標(biāo)本時(shí)，標(biāo)本S／CO值在1.03～3.30之間，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性［4］。

標(biāo)本在分離時(shí)，不能充分分離，或者在采集運(yùn)送儲(chǔ)存過(guò)程中，被細(xì)菌污染，產(chǎn)生標(biāo)本溶血或者標(biāo)本凝固不全，都可能產(chǎn)生陽(yáng)性結(jié)果。

3.2 檢驗(yàn)過(guò)程操作因素

標(biāo)本在進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，如果加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，就可能使加樣后在恒溫箱的等待時(shí)間相對(duì)過(guò)長(zhǎng)，使得檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。

洗板是酶聯(lián)免疫吸附法中的重要部分，在自動(dòng)洗板儀進(jìn)行洗板時(shí)，如果洗板針被堵塞，抽吸不充分［5］，或者洗板機(jī)內(nèi)洗液量不足，也會(huì)引起假陽(yáng)性。如果使用手工的洗板，洗板次數(shù)若太少，就可能造成殘留，使得出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。

快速檢驗(yàn)雖然能避免結(jié)果的假陽(yáng)性，但是，如果檢驗(yàn)速度過(guò)快，也可能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果，這主要是因?yàn)椋涸谖赐耆虝r(shí)，如進(jìn)行強(qiáng)行的離心，可能導(dǎo)致血清中仍有纖維蛋白原的存在，使得在檢測(cè)時(shí)形成纖維蛋白塊，造成陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)。

3.3 其他

標(biāo)本的檢測(cè)試劑，也會(huì)對(duì)標(biāo)本的結(jié)果產(chǎn)生影響，使結(jié)果顯示為陽(yáng)性或者陰性。因此，實(shí)驗(yàn)室在選擇試劑時(shí)，需選擇高質(zhì)量的試劑，且不同試劑不可混用。

4 討論

丙型肝炎，是我國(guó)較為常見(jiàn)的一種肝炎疾病，其發(fā)病率僅次于乙型肝炎。很多患者在被丙型肝炎病毒感染后，都可能轉(zhuǎn)為慢性丙型肝炎。此病的臨床治療較為困難，且易轉(zhuǎn)為肝硬化或者肝癌。

通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)丙型肝炎的抗HCV進(jìn)行檢測(cè)，是臨床常用的檢測(cè)方法，尤其用于急性或者慢性的丙型肝炎患者進(jìn)行檢測(cè)，可取得很好的效果。這種方法，是利用酶的高催化作用和放大作用，與標(biāo)本內(nèi)的特異性抗原－抗體反應(yīng)結(jié)合，以顯色的結(jié)果做判斷，進(jìn)而檢測(cè)免疫結(jié)果的技術(shù)。此方法有很高的敏感性，而且操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，且有較高的特異性。

如何避免這種假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，使ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確率更高，需要涉及此環(huán)節(jié)的人員都必須進(jìn)行注意。從采集標(biāo)本，到標(biāo)本的運(yùn)輸，再到標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，都需要醫(yī)護(hù)人員的高度重視。在檢測(cè)前，充分了解患者的情況，在患者患有會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的疾病時(shí)，在檢驗(yàn)申請(qǐng)單上進(jìn)行標(biāo)注，以幫助實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員對(duì)結(jié)果進(jìn)行準(zhǔn)確的判定。標(biāo)本運(yùn)輸儲(chǔ)存時(shí)，不要?jiǎng)×艺鹗帲⑹惯\(yùn)送時(shí)間要盡量縮短，確保血液能在最短時(shí)間內(nèi)被檢測(cè)，以免出現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間的常溫儲(chǔ)存干擾檢驗(yàn)結(jié)果。在檢測(cè)時(shí)，嚴(yán)格按照檢測(cè)程序進(jìn)行檢測(cè)，不可操之過(guò)急，更不能馬虎大意，操作要做到快中有穩(wěn)。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)室需每日進(jìn)行質(zhì)控，檢驗(yàn)前確保檢驗(yàn)儀器的正常有效。如果檢驗(yàn)結(jié)果在發(fā)生弱陽(yáng)性等情況時(shí)，及時(shí)進(jìn)行復(fù)檢。

［1］張志梅.ELISA法檢測(cè)丙肝抗體出現(xiàn)假陽(yáng)性的分析［J］.中國(guó)社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)半月刊，2009，11（24）：187.

［2］陳景芬.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體影響因素分析［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，5（13）：821.

［3］楊志棟，和殿峰.ELISA法測(cè)丙肝抗體假陽(yáng)性分析［J］.中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2010，08（17）：263.

［4］劉艷輝.MEIA法與ELISA法檢測(cè)丙型肝炎病毒抗體結(jié)果比較［J］.傳染病信息，2009，22（4）：233－234.

［5］周東升，孫宏勛，盧亞敏，等.ELISA法檢測(cè)丙型肝炎抗體［J］.臨床合理用藥雜志，2009，2（19）：125.