響應面法優化蒲菜總黃酮提取工藝

李西騰

（江蘇食品職業技術學院食品工程系，江蘇 淮安 223003）

響應面法優化蒲菜總黃酮提取工藝

李西騰

（江蘇食品職業技術學院食品工程系，江蘇 淮安 223003）

在液料比、乙醇濃度、超聲時間單因素試驗的基礎上，利用響應面分析法對超聲輔助提取蒲菜總黃酮條件進行研究。結果表明，超聲輔助提取蒲菜總黃酮適宜條件為液料比43.43∶1，乙醇濃度45.08%，超聲提取時間41 min。

蒲菜；總黃酮；響應面法；超聲波；提取

蒲菜歸屬于香蒲科的香蒲屬，蒲菜在我國作為蔬菜食用有很強的地域性，其他國家或地區主要作為水生觀賞植物、凈化水質用或取其花粉作為藥用(中藥蒲黃)。蒲菜在中國分布廣泛，品種繁多，多呈野生狀態。主要取其葉鞘相互抱合的假莖內層白嫩部分作為食用，產品潔白柔嫩，清香爽口，富含多種人體必需氨基酸和維生素，具有降血糖、潤心肺、益脾胃等功效[1-5]。

蒲黃在我國有著悠久的應用歷史，其具有止血、祛瘀和緩解心腹疼痛等功效，其有效成分是以香蒲新苷以及異鼠李素-3-0-新橙皮糖苷為主的黃酮類成分[6]，而黃酮類化合物廣泛分布于植物的花、葉、果等中。本文通過超聲波輔助提取，采用響應面法進行試驗，對蒲菜葉黃酮提取工藝進行優化研究，為蒲菜葉的綜合利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

蒲菜葉：江蘇省淮安市市售新鮮蒲菜，洗凈晾干后粉碎至40目，備用。

試劑：蘆丁標準品（中國藥品生物制品檢定所）；其他所有試劑均購于國藥集團（上海）試劑公司。

1.1.2 儀器

KQ5200DB型數控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；TU-1901型紫外可見分光光度計：北京普析通用儀器有限公司；DZKW-4型電子恒溫水浴鍋：上海金橋科析儀器廠；SHB一Ⅲ型循環水式多用真空泵：鄭州長城科工貿有限公司；FZ1O型植物粉碎機：齊家務科學儀器廠；RE-52A型旋轉蒸發器：上海亞榮生化儀器廠。

1.2 蒲菜葉總黃酮提取方法

1.2.1 蒲菜葉的前期處理

提取前，蒲菜葉洗凈晾干后，60℃烘箱烘干，用粉碎機粉碎至40目，天平稱重。

1.2.2 蒲菜葉超聲提取工藝

取粉碎好過40目篩的蒲菜葉10 g，按一定的液料比加入不同濃度乙醇水溶液，超聲提取一定時間后用離心機分離（3000 r/min，10 min），抽濾除渣；將濾液置于100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，搖勻。

1.3 總黃酮含量的測定

1.3.1 蘆丁標準溶液的配制

精密稱取經120℃干燥至恒重的蘆丁對照品10.0mg，置于10 mL容量瓶，加70%乙醇適量，使充分溶解，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，所得溶液含蘆丁對照品1mg/mL。

1.3.2 蘆丁標準工作曲線的建立

精確移取蘆丁對照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置于25 mL容量瓶，加5%亞硝酸鈉溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1.0 mL，搖勻，放置6 min，加4%氫氧化鈉溶液5.0 mL，再加乙醇定容至刻度，搖勻，放置15 min。以相應試劑作空白對照，在510 nm波長處測定吸光度，以濃度（C）與吸光度（A）進行直線回歸，繪制標準曲線，得到標準曲線方程為：A=10.406C－0.0066（R2=0.99994）。

1.3.3 總黃酮含量的測定

吸取待測提取液5 mL置于25 mL容量瓶，參照1.3.2方法測吸光度，根據蘆丁標準溶液濃度（C）與吸光度（A）關系曲線的回歸方程，求出相當于樣品吸光度的蘆丁含量，按下式求出總黃酮的提取率。

1.3.4 超聲波提取法工藝優化試驗

設置不同的乙醇濃度、液料比、提取時間，用超聲波提取法提取總黃酮，觀察不同單因素對提取率的影響。在單因素試驗的基礎上，根據Box-Behnken中心組合試驗設計原理，以X1（乙醇濃度）、X2（提取時間）和X3（液料比）為自變量，以總黃酮得率（%）為響應值，設計三因素三水平的響應面分析試驗。試驗數據使用Design-Expert 7.0軟件進行分析，并得到響應面分析圖和方差分析表。

2 結果與分析

2.1 提取條件對蒲菜總黃酮提取的影響

2.1.1 乙醇濃度對提取率的影響

分別以20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇作為提取劑，浸泡30 min后超聲提取30 min，在最佳波長處測吸光度并計算含量，考察乙醇濃度對蒲菜總黃酮提取率的影響，結果見圖1。

由圖1可以看出，乙醇濃度過高或過低都影響蒲菜葉總黃酮的提取，乙醇濃度在50%左右時提取率最大，乙醇濃度繼續增加時提取率轉而下降。這可能是乙醇濃度過大對極性高的黃酮的提取率下降，而對葉綠素等雜質的提取率提高。

2.1.2 提取時間對提取率的影響

以50%乙醇作為提取溶劑，分別提取10、20、30、40、50、60、70 min，在最佳波長處測吸光度并計算含量，考察提取時間對蒲菜總黃酮提取率的影響，結果見圖2。

由圖2可以看出，蒲菜葉總黃酮提取率隨超聲提取時間的延長而上升，在40 min時達到最大，而在40 min～70 min之間沒有明顯變化。因為在提取初期，總黃酮不斷浸出，隨著提取時間的延長，總黃酮的浸出量達到最大，再延長時間也不能提高總黃酮提取率。

2.1.3 液料比對提取率的影響

液料比分別為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1、60∶1，以50%乙醇作提取劑，浸泡30 min后超聲提取30 min，在最佳波長處測吸光度并計算含量，考察液料比對蒲菜總黃酮提取率的影響，結果見圖3。

由圖3可知，蒲菜葉總黃酮提取率隨液料比的增加而上升，當液料比大于40∶1時，提取率上升趨勢平穩，因此液料比需控制在40∶1以內。

2.2 蒲菜總黃酮提取條件的優化

根據試驗設計，采用不同的X1（乙醇濃度）、X2（提取時間）和X3（液料比）進行15次試驗，試驗因素與水平設計見表1。

試驗以隨機次序進行，重復3次，試驗獲得的水解度的平均值用Design-Expert進行分析，試驗結果和方差分析表分別見表2和表3。根據表2中試驗結果，利用Design-Expert 7.0軟件進行二次回歸分析，得到方程：

表 1 中心組合試驗因素水平Table 1 The level table of central combination test factor

表 2 試驗方案與結果Table 2 Test scheme and test result

表 3 回歸模型的方差分析Table 3 Variance analysis of regression model

從表3方差分析結果可以看出：模型的F=7.45和Prob>F＜0.05，表明該模型是顯著的。模型失擬項Prob>F>0.05，即模型失擬項不顯著，無需再考慮高次數項。復相關系數R為0.9306，說明該模型擬合程度良好，試驗誤差小。采用超聲波提取總黃酮可以用該模型來對試驗結果進行預測。由回歸模型系數顯著性檢驗結果可知，該模型一次項X1、X3（P＜0.05）顯著；二次項X22和X32顯著（P＜0.05），即乙醇濃度、液料比的一次項和超聲提取時間和液料比的二次項對總黃酮的影響效應顯著。結合尋優模型結果，各因素對響應值的影響順序，并綜合考慮效益問題，選擇較優的總黃酮提取條件為：乙醇濃度45.08%，提取時間41 min，液料比43.43∶1，預測可獲得最大的總黃酮含量為1.208%。圖4、圖5和圖6為超聲波提取蒲菜總黃酮的響應曲面，乙醇濃度、提取時間和液料比兩兩因素的交互作用立體圖表示了水平選擇適當，方程的模型符合實際。

3 結論

通過單因素與響應面優化，得到超聲波提取蒲菜總黃酮的回歸方程為 ：Y=1.17 －0.084X1＋0.029X2＋0.090X3＋0.012X1X2＋0.050X1X3－0.010X2X3－0.066X12－0.096X22－0.094X32。通過對該模型的方差分析，得到試驗所選用的二次多項式模型具有高度的顯著性，通過對該方程中回歸系數顯著性檢驗表明，乙醇濃度、液料比的一次項和超聲提取時間和液料比的二次項對總黃酮的影響效應顯著。通過響應面分析，得到了各因素的優化條件為：乙醇濃度45.08%，提取時間41 min，液料比43.43∶1。超聲輔助提取蒲菜總黃酮具有省時、節能、高效等優點，為開發利用蒲菜資源起到積極的促進作用。

[1]柯衛東，孔慶東.蒲菜資源及分類研究[J].長江蔬菜，1998(5)：36-37

[2]王學勤.淮安蒲菜[J].烹調知識，1997(4)：20

[3]張更秋.蒲菜小檔案[J].飲食科學，2004(8)：29

[4]何偉，李當建，王戰嶺.潤肺清毒蒲菜宴[J].中國食品，2004(22)：30-31

[5]邢湘臣.蒲菜[J].美食，2004(1)：26

[6]王海波，王章元.蒲黃藥理作用的研究進展[J].醫藥導報，2005，24(4)：318-319

Optimization of the Extraction Technology of Total Flavone from Typha latifolia Using Response Surface Methodology

LI Xi-teng
（Department of Food Engineering，Jiangsu Food Science College，Huai'an 223003，Jiangsu，China）

The effects of the ratio of solid－fluid，the concentration of ethanol and on the yield of total flavone were studied by response surface analysis and the parameters for optimum yield were obtained.The results showed that the optimum parameters was the ratio of liquid－material43.43∶1，the concentration of ethanol45.08%，and supersonic extraction time 41 min.

Typha latifolia；total flavone；response surface methodology；supersonic wave；extraction

李西騰（1969—），男（漢），講師，碩士，研究方向：食品科學與生物技術。

2011-05-22