黏蛋白MUC1和Cyclin D1在胰腺癌組織中的表達意義

陳干濤 陳干紅 白少華 高志強 彭漢斌

胰腺癌為常見的惡性腫瘤，惡性程度高，預后差，療效至今仍沒有突破性的進展，因此，需要探索新的有效的早期發現和治療手段［1］。近些年來的研究表明，細胞周期調節失控是腫瘤發生的重要機制，有許多癌基因和抑癌基因直接和間接參與了細胞周期的調控［2］。MUC1在腫瘤組織中的異常表達，使其成為1種潛在的腫瘤生物學標志物，MUC1表達可作為多種腫瘤發生、發展及預后的監測指標［3］。通常認為它的高水平表達與腫瘤的浸潤、轉移有關。在細胞周期的調控中，cyclinD1的過表達可導致細胞的增殖與分化失控，增加細胞向癌轉化的可能性［4］。我們采用免疫組化方法檢測MUC1和cyclinD1在胰腺癌組織中的表達水平，探討兩者與胰腺癌的發生發展及與其預后的關系，為臨床提高胰腺癌治療療效提供理想的靶位點。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2001年3月至2006年12月在我院因胰腺癌行術后病理檢查確診為胰腺癌組織47例，年齡為39～73歲(平均年齡59歲)，其中男性31例，女性16例。高分化腺癌12例，胰腺中低分化腺癌35例;按TNM分期(UICC，1997)Ⅰ期9例、Ⅱ期13例、Ⅲ期15例、Ⅳ期10例;有淋巴結轉移28例，無淋巴結轉移19例;腫瘤位于胰頭部38例，胰體尾部7例，胰頭體尾部2例，選胰腺組織均無癌細胞侵及。正常對照組標本取自法醫學系非胰腺疾病死亡人員尸檢標本15例，其中男性9例，女性6例，年齡16～67歲，平均48歲。胰腺標本均無炎癥、化生及增生性病變，手術切除后標本經10%的福爾馬林液固定、脫水，常規石蠟包埋。

1.2 試劑及儀器

鼠抗CyclinDl單克隆抗體、鼠抗MUC1單克隆抗體、DAB顯色劑、Immuno-Bridge十試劑盒(北京中山生物技術有限公司)，工作液濃度分別為1∶50和1∶100，微波修復抗原，免疫組化SP法染色，DAB顯色，蘇木精復染。陰性對照以0.5%小牛血清代替一抗作為陰性對照，Cyclin D1和MUC1陽性對照以公司所給陽性染色切片作為陽性對照，并參照文獻［4］報道。

1.3 結果判斷

Cyclin D1細胞核棕黃色染色為主，少部分位于胞質，MUC1陽性著色主要定位于細胞質，棕黃染色作為陽性判斷標準。每張切片由2名病理醫師雙盲觀察，染色結果以陽性百分率表示，并根據染色深淺和陽性細胞百分數，將陽性強度判為(+)弱陽性(0% ～25%)，(++)中等度陽性(26% ～ 50%)，(+++)強陽性( ＞50%)。

1.4 統計學分析

應用SPSSl2.0統計軟件χ2檢驗和spearman相關分析，(檢驗水準:α =0.05)。

2 結果

2.1 MUC1在胰腺組織中的表達

正常胰腺組織中僅少許組織有MUC1的陽性表達，且MUC1主要表達于上皮細胞近管或腺腔面，呈頂端表達極性分布;而在胰腺癌組織中、MUC1過度表達，頂端定位不清，呈胞質胞膜均表達。胰腺癌組織47例中有39例(82.98%)MUC1呈陽性表達，可見棕黃色或深棕色顆粒，陽性信號主要位于細胞質中;在正常對照組15例中只有3例(2.00%)呈弱陽性表達。MUC1在胰腺癌中的陽性表達率和在正常胰腺組織中的陽性表達率差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 Cyclin D1在胰腺組織中的表達

正常組織中Cyclin D1全部陰性表達，而在胰腺癌組織中有32例陽性表達(68.09%)，主要為細胞核內出現棕黃色顆粒，兩者比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.3 胰腺癌組織中MUC1和Cyclin D1表達的相關性分析

在39例MUC1陽性表達的胰腺癌組織中，Cyclin D1陽性表達有29例，而8例MUC1陰性表達組織中Cyclin D1的陽性表達有3例，spearman相關分析表明兩者間呈顯著相關，(γ =0.297，P=0.043 ＜0.05)。

2.4 MUC1和Cyclin D1陽性表達與胰腺癌臨床病理參數的關系

MUC1在胰腺癌中的表達與腫瘤淋巴結轉移及腫瘤TNM分期相關，存在顯著統計學意義(P＜0.05)，但與腫瘤部位及分化程度無明顯相關;Cyclin D1與腫瘤的淋巴結轉移和分化相關，有顯著的統計學意義(P＜0.05)，但與腫瘤的臨床分期及腫瘤部位無明顯相關性，見表1。

表1 MUC1和Cyclin D1表達與胰腺癌臨床病理參數的關系

3 討論

MUC1是1種跨膜糖蛋白，在許多正常黏膜上皮細胞中低表達，但在多種惡性腫瘤(如乳腺癌、卵巢癌、結腸癌等)組織中高表達。正常情況下，MUC1主要表達于多種組織、器官中上皮細胞近管或腺腔面，呈頂端表達，極性分布，胞質未見表達，但我們發現在胰腺癌組織中，MUC1過度表達，糖基化不全，頂端定位不清，胰腺癌組織中整個胞膜和胞質均表達，且表達強度與細胞的惡性化程度成正相關。同時，MUC1在胰腺癌中的表達與胰腺癌的臨床分期和淋巴結轉移相關，表明MUC1參與了胰腺癌發生發展的惡性生物學行為，其機制可能是因為MUC1作為一類細胞因子受體，參與信號傳導引起MUC1/Y胞內段的酪氨酸磷酸化，同時細胞形態學發生改變，如細胞變長、分散生長、不易成簇;MUC1還可作為Wnt信號通道輔助激活因子調節器調控下游基因轉錄，促進腫瘤生長;MUC1還可以通過調節FOXO3a信號傳導途徑保護細胞免受氧壓引起的凋亡。MUC1是1型跨膜糖蛋白，可使E2鈣黏蛋白下調表達，E2鈣黏蛋白的下調表達促進了腫瘤細胞的侵襲與轉移;MUC1通過在細胞表面的過度表達減小細胞與細胞、細胞與細胞外基質間的黏附使腫瘤細胞易于從原發位脫離口［5～7］。

Cyclin D1與Cdks家族成員結合成Cyclin D1/Cdks復合物通過磷酸化視網膜母細胞瘤家族(Rb家族)蛋白而釋放E2F因子，游離的E2F與特殊基因啟動子區結合，這些基因開始轉錄和表達，促進細胞完成G期到S期的轉變。Cyclin D1的過表達使細胞G期明顯縮短，細胞增殖加速，最終導致癌變的發生。我們的研究發現:Cyclin D1在胰腺癌組織中有過表達、表達在核內，且雖隨癌組織由高分化到低分化、淋巴結轉移表達的百分率在增高，差異有統計學意義。Cyclin D1的異常表達還與MUC1的表達相關，其原因可能是MUC1作為膜連接黏蛋白，其分子的胞質末端高度保守，能夠與β-連環蛋白及其家庭成員結合，而β-連環蛋白是Wnt信號通道的效應分子。MUC1分子末端與β-連環蛋白相結合后定位于細胞核內，參與Cyclin D1在內的下游基因啟動子活化，上調Cyclin D1等的表達，促進腫瘤細胞增殖［8］。有文獻證明當腫瘤細胞轉染MUC1基因后，腫瘤細胞獲得了更高的移動性和侵襲性［9］。有關以MUC1為靶點抑制惡性腫瘤發生發展在體外細胞水平和動物實驗上都取得了理想的成績，我們的研究明確了MUC1與胰腺癌關系密切，那么MUC1可以作為胰腺癌診斷和治療的理想靶標。

［1］Machado JC，Nogueira AMF，Cameiro F，et al.Gastic carcinoma exhibits distinct types of cell differentiation:an immunohistochemical study of trefoil peptides(TFF1 and TFF2)and MUC1ns(MUC1，MUC2，MUC5AC，and MUC6)〔J〕.J Pathol，2000，190(4):437.

［2］Sandhu C，Slingerland J.Deregulation of the cell cycle in cancer〔J〕.Cancer Detect Prev，2000，249():107.

［3］Obermair A，Schmid BC，Packer LM，et al.Expression of MUC1 splice variants in benign and malignant ovarian tumors〔J〕.Int J Cancer，2002，100(2):166.

［4］李飛虹，高 嵋.研究生應用免疫組化技術的質控與標準化〔J〕.廣東醫學院學報，2008，26(2):218.

［5］Hamanaka Y，Suehiro Y，Fukui M，et al.Circulating anti-MUC1 IgG antibodies as a favorable prognostic factor for pancreatic cancer〔J〕.Int J Cancer，2003，103(1):97.

［6］Brayman M，Thathiah A，Carson DD.MUC1:a multifunctional cell surface component of reproductive tissue epithelia〔J〕.Reprod Biol Endocrinol，2004，1(7):2.

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［9］Stepensky D，Tzehoval E，Vadai E，Eisenbach L.O glycosylated versus nonglycosylated MUC1-derived peptides as potential targets for cytotoxic immunotherapy of carcinoma〔J〕.Clin Exp Immunol，2006，143(1):139.