氫化物發生原子熒光法測定灰樹花中硒含量

賈 婷，吳向陽，仰榴青，肖 輝，鄒 燁，魏 紅

（1.江蘇大學化學化工學院，江蘇鎮江212013；2.江蘇大學食品與生物工程學院，江蘇鎮江212013；3.江蘇大學藥學院，江蘇鎮江212013）

氫化物發生原子熒光法測定灰樹花中硒含量

賈 婷1，吳向陽2，*，仰榴青3，肖 輝2，鄒 燁1，魏 紅2

（1.江蘇大學化學化工學院，江蘇鎮江212013；2.江蘇大學食品與生物工程學院，江蘇鎮江212013；3.江蘇大學藥學院，江蘇鎮江212013）

采用氫化物發生-原子熒光光譜法測定灰樹花中硒含量。用硒標準溶液考察了載流鹽酸濃度、硼氫化鈉濃度、酸介質濃度對熒光強度的影響。比較了樣品的兩種前處理方式，得出了最佳測定條件。結果表明采用微波消解消化較為完全，優于濕法消解；該方法線性范圍為1～10ng/mL，檢出限為0.002ng/mL，精密度為1.3%～4.1%（n=10），回收率為94.96%～97.94%（n=5），測得灰樹花中硒的含量為0.2242μg/g。本方法準確、靈敏、簡便、快速，可用于灰樹花中硒含量的測定。

原子熒光，灰樹花，硒

灰樹花是一種珍稀的藥食兼用真菌，有“實用菌王子”之美稱。它不僅味道鮮美，而且富含維生素，鋅、鈣、磷、鐵、硒等多種對人體有益的礦物質，具有抗腫瘤，抗HIV病毒，改善免疫系統功能，調節血脂、血糖水平，降血壓等多種藥理活性［1］，目前已開發出多種灰樹花藥物和保健品。硒是人體和動物必需的微量元素，研究發現，適量補充硒可提高人體免疫力，預防腫瘤和心血管等疾病的發生，它被稱為微量元素中“抗癌之王”［2］。然而，當食物中缺硒或是含有過量硒時，都會對人體產生危害。因此，建立一種快速、準確測定食用菌中硒的方法十分重要。目前國內外對灰樹花多糖研究較多，但對灰樹花中微量元素硒含量測定的方法學研究未見報道。本文采用氫化物發生-原子熒光光譜法測定灰樹花中硒含量，比較樣品的兩種前處理方法，研究最佳實驗條件，為灰樹花藥物和富硒保健產品的研究和開發提供依據［3］。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

硒標準儲備液（1000ppm） 國家標準物質研究中心購買；灰樹花 浙江方格藥業提供，60℃真空干燥12h，粉碎，過200目篩備用；NaBH4、HNO3、HClO4、HCl、NaOH等實驗所用試劑 均為優級純；實驗用水為娃哈哈純凈水。

AFS-930順序注射雙道原子熒光光度計 北京吉天儀器有限公司；硒高性能空心陰極燈 北京有色金屬研究總院；不銹鋼電熱板 江蘇省金壇市醫療儀器廠；MDS-2003F型微波消解儀 上海新儀微波化學科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 樣品消化 微波消解：準確稱取5份0.2000g灰樹花子實體粉末于聚四氟乙烯溶樣杯內，加入HNO3∶HClO4=4∶1（V/V）混合酸5mL，搖勻加蓋，置于微波消解儀中，依次按照下列程序進行消解：壓力0.5kPa，功率400W，消解時間6min；壓力0.7kPa，功率600W，消解時間6min；壓力1.0kPa，功率800W，消解時間8min，連續消解樣品，同時做試劑空白。室溫冷卻，在電熱板上趕酸至剩余體積2mL左右，冷卻，加入6mol/L鹽酸10mL，放置20min后，轉移至25mL容量瓶中，純水定容，備用。

濕法消解：準確稱取5份0.2000g灰樹花子實體粉末于50mL錐形瓶中，加入 HNO3∶HClO4=4∶1（V/V）混合酸5mL，冷消化12h，同時做試劑空白。然后于電熱板上加熱，及時補加混酸溶液，當溶液變為清亮無色并伴有白煙時，繼續加熱至剩余體積為2mL左右，冷卻，加入6mol/L鹽酸10mL，放置20min后，轉移至25mL容量瓶，純水定容，備用。

1.2.2 儀器最佳條件 原子化器溫度200℃，原子化器高度8mm，負高壓270V，燈電流80mA，載氣與屏蔽氣流量分別為400、800mL/min，注入量1mL，讀數方式為峰面積，讀數時間7s，延遲時間1.5s。

1.2.3 標準曲線 準確量取1mL硒標準貯備液，用2.4mol/L的鹽酸溶液逐級稀釋得濃度為10.0ng/mL的硒標準溶液。儀器自動稀釋成濃度為1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ng/mL的標準系列濃度，測得其熒光強度，以硒濃度為橫坐標，熒光強度為縱坐標繪制標準曲線。在最佳工作條件下測得回歸方程為 IF= 28.551C-5.6438，R2=0.9999。

1.2.4 實驗條件的選擇 以6ng/mL硒標準溶液依次考察了載流鹽酸濃度、硼氫化鈉濃度、酸介質濃度對熒光強度的影響，平行測定3次，優選出最佳的實驗條件。

1.2.5 精密度實驗 在最佳的實驗條件下，分別測定2、4、6ng/mL硒標準液的熒光強度并計算其RSD（n=10）。

1.2.6 回收率實驗 準確稱取5份0.2000g樣品粉末，加入25ng/mL硒標準品1mL，按照1.2.1的方法進行樣品預處理，測定其熒光強度并計算加標回收率。

1.2.7 樣品測定 在最佳實驗條件下，依次測定樣品空白溶液和樣品溶液的熒光強度，根據標準曲線計算硒含量。

2 結果與討論

2.1 載流鹽酸濃度的選擇

相關文獻報道對于硒而言，載流溶液以鹽酸最佳［4］。合適的酸度可以提高待測元素氫化物的生成和釋放效率，且硼氫化鈉還原反應的電位強烈依賴于pH，酸度低時，可被還原的元素多，引起干擾也較嚴重，但酸度過大時，熒光強度進入平臺期，對儀器的管道有很強的腐蝕作用。硼氫化鈉濃度0.7%時，不同濃度的載流鹽酸對6ng/mL硒標準溶液熒光強度的影響見圖1。可知，隨著載流鹽酸濃度的增加，熒光強度不斷增強，當鹽酸濃度為10%時熒光強度最大，而當鹽酸濃度高于10%后，熒光強度隨著濃度的增加而減小。因此，本文選擇10%的鹽酸作為介質。

圖1 載流鹽酸濃度對熒光強度的影響（n=3）

2.2 硼氫化鈉濃度的選擇

本方法選擇硼氫化鈉作為還原劑［5］，其濃度大小影響氫化物生成速率和氬氫焰的質量。載流鹽酸濃度10%時，不同濃度的硼氫化鈉對6ng/mL硒標準溶液熒光強度的影響見圖2。可知，隨著NaBH4濃度的增加，熒光強度不斷增強，當NaBH4濃度為0.9%時熒光強度達到最大；而當NaBH4濃度高于0.9%后，熒光強度隨著濃度的增加而減小。因此，本文選擇NaBH4濃度為0.9%。

圖2 硼氫化鈉濃度對熒光強度的影響（n=3）

2.3 酸介質濃度的選擇

根據文獻報道［6］，本文選擇鹽酸作為酸介質。鹽酸對硒元素的測定具有干擾少，靈敏度高［7］的特點。載流鹽酸濃度10%，硼氫化鈉濃度0.9%時，不同濃度的鹽酸對6ng/mL硒標準溶液熒光強度的影響見圖3。由圖可知，鹽酸濃度在1～7mol/L之間，對熒光強度的影響較小，而適當的酸介質濃度可以提高靈敏度、減少過渡金屬離子對氫化反應產生的干擾，因此本文選擇酸介質濃度為2.4mol/L。

圖3 酸介質濃度對熒光強度的影響（n=3）

2.4 檢出限和線性范圍

在最佳實驗條件下，測定空白溶液20次，利用空白溶液的3倍標準偏差與標準曲線斜率的比值得到該方法的檢出限為0.002ng/mL。選擇線性范圍為1.0～10.0ng/mL，此范圍硒標準工作曲線相關系數為0.9999。

2.5 精密度

載流鹽酸濃度為10%，硼氫化鈉濃度為0.9%，酸介質濃度為2.4mol/L條件下，測定2、4、6ng/mL的硒標準液熒光強度（n=10），其RSD分別為4.11%、3.51%和1.32%，可知該方法的精密度較好。

2.6 加標回收率

由表1可知，濕法消解的回收率為90.72%～99.38%，平均回收率為94.93%，RSD為4.19%；微波消解的回收率為94.96%～97.94%，平均回收率為96.23%，RSD為1.16%。實驗結果表明微波消解的準確度較高。

表1 加標回收率測定

2.7 樣品測定

由表2可知，微波消解前處理的硒含量測定值明顯高于濕法消解，并且相對標準偏差較小，說明微波消解消化較為完全，優于濕法消解。因此，微波消解適用于灰樹花樣品的前處理。

表2 樣品測定（平均值±標準偏差，n=5）

3 結論

微波消解消化較為完全，優于濕法消解。實驗最佳條件為載流鹽酸濃度10%、硼氫化鈉濃度0.9%、酸介質濃度2.4mol/L。微波消解前處理、氫化物發生-原子熒光光譜法適用于灰樹花中微量元素硒含量的測定，該法靈敏度高、準確度好、精密度高、操作簡便、成本低。

［1］Lee BC，Bae JT，Pyo HB，et al.Biological activities of the polysaccharides produced from submerged culture of the edible Basidiomycete Grifola frondosa［J］.Enzyme and Microbial Technology，2003，32：574-581.

［2］Kiremidjian-Schumacher L，Roy M，Wishe HI，et al. Supplementation with selenium augments the functions of nature killer and lymphokine-activated killer cells［J］.Biology Trace Element Research，1996，52（3）：227-239.

［3］李麗輝，林親錄.我國富硒食品的研究進展［J］.中國食物與營養，2007（2）：23-25.

［4］NCCLS.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing［S］.Twelfth Informational Supplement，2002，22（1）：48-49.

［5］李連平，范威，黃志勇，等.蔬菜中硒總量及形態的氫化物發生-原子熒光光譜測定方法［J］.光譜學與光譜分析，2008，28（12）：2975-2978.

［6］黃國清，肖仔君.HG-AFS測定辣木中的Se［J］.光譜學與光譜分析，2007，27（2）：383-385.

［7］Smrkolj P，Stibilj V.Determination of selenium in vegetables by hydride generation atomic fluorescence spectrometry［J］. Analytica Chimica Acta，2004，512：11-17.

Determination of total selenium in grifola frondosa by hydride generation atomic fluorescence spectrometry

JIA Ting1，WU Xiang-yang2，*，YANG Liu-qing3，XIAO Hui2，ZOU Ye1，WEI Hong2
（1.College of Chemistry and Chemistry Engineering，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China；2.College of Environment，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China；3.College of Pharmacy，Jiangsu University，Zhenjiang 212013，China）

To establish the method of hydride generation-atomic fluorescence spectrometry for the determination of selenium in Grifola frondosa.The best determination conditions including the concentration of carrier hydrochloride，sodium borohydride，medium acid were selected by standard solution.The two kinds of sample pre-treatment methods were compared，the best determination condition was selected.The results revealed that microwave digestion was more complete in sample pre-treatment，which was better than the wet digestion.The linear range was 1～10ng/mL，the detection limit was 0.002ng/mL，the precision was 1.3%～4.1%（n=10），the recovery rate was 94.96%～97.94%（n=5），the contents of selenium in Grifola frondosa was 0.2242μg/g.This method could be used to determine selenium in Grifola frondosa.lt was accurate，sensitive，simple and rapid.

atomic fluorescence；grifola frondosa；selenium

TS207.3

A

1002-0306（2011）02-0338-03

2009-09-22 *通訊聯系人

賈婷（1984-），女，碩士研究生，從事應用化學研究。