念慈庵川貝枇杷膏免疫功能的研究

周華俊

念慈庵川貝枇杷膏由川貝、枇杷葉、沙參、茯神、橘紅等十幾味中藥材提取制成的中成藥，主要用于止咳化痰，降氣平喘。有文獻報道其部分藥理學研究［1］。由于其藥材的組成可能有免疫的功效，目前未見該方面的研究報道。筆者對此進行了研究，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，SPF級，購自中山大學實驗動物中心，動物合格證號:粵檢證字SCXK(粵)-2009-0070。

1.1.2 實驗藥物與試劑 念慈庵川貝枇杷膏為深圳東方力藥業有限公司生產，批號:20091128;金水寶膠囊為金水寶膠囊由江西金水寶制藥有限公司生產，批號:091107。環磷酰胺:上海華聯制藥有限公司生產，批號:20090821。實驗前用0.9%氯化鈉注射液配成濃度為5 mg/ml的溶液。印度墨汁:北京四中化工廠，批號900501，用時用0.9%氯化鈉注射液稀釋10倍。雞紅細胞懸液:無菌條件下雞翼下靜脈采血，放入相當于雞血體積5倍的Alsever’s液，4℃保存。臨用時用0.9%氯化鈉注射液反復洗滌，離心3次，以恒定的血細胞比容數用0.9%氯化鈉注射液配成5%雞紅細胞混懸液(Alsever’s液的制備:葡萄糖 2.05 g，檸檬酸鈉 0.80 g，檸檬酸0.05 g，氯化鈉0.42 g，重蒸餾水加至1.0 L，高壓滅菌，4℃保存)。豚鼠血清:用心臟采血的方法取豚鼠全血，然后離心得到血清。其余試劑為分析純試劑。

1.1.3 實驗儀器 雙光束紫外可見分光光度計:北京普析通用儀器有限責任公司，型號:TU-1901。

1.2 方法

1.2.1 炭粒廓清法［2］取昆明種小鼠，隨機分為正常對照組、環磷酰胺造模組、受試藥物低、中、高劑量組和陽性對照組，每組10只，然后各組小鼠按0.1 ml/10 g體重灌胃給藥，1次/d，共7 d，其中正常對照組和環磷酰胺造模組給等體積蒸餾水。除正常對照組外，其余5組均于給藥的第3～5天腹腔注射環磷酰胺50 mg/kg，造成免疫功能低下模型。實驗前小鼠禁食不禁水10 h，末次給藥后1 h，各小鼠尾靜脈注射印度墨汁0.1 ml/10 g體重，注射后第2 min(T1)、12 min(T2)分別從眼眶靜脈取血20 μl，溶于2 ml的0.1%碳酸鈉溶液中，搖勻，用雙光束紫外可見分光光度計于680 nm波長處測OD值，最后將小鼠放血處死，取肝脾稱其質量，計算廓清指數、校正廓清指數。

1.2.2 血清溶血素法 小鼠分組，給藥同實驗2.1在試驗第1 d每鼠腹腔注射5%雞紅細胞懸液0.2 ml。末次給藥后1 h，摘取動物眼球取血，3000r/min離心10 min，分離血清，用0.9%氯化鈉注射液將血清稀釋100倍。取稀釋血清1 ml，與5%雞紅細胞懸液0.5 ml、10%豚鼠血清(補體)0.5 ml混勻，在37℃水浴溫育30 min，然后置0℃冰箱中中止反應，將上述液體3000r/min離心10 min，取上清液，用雙光束紫外可見分光光度計于540 nm處測定OD值，另設不加小鼠血清的空白對照管調零。以樣品的OD值代表血清溶血素水平。

廓清指數K=(logA1-logA2)/(T2-T1)，式中A1、A2分別為第2 min、12 min的OD值。

1.3 2，4-二硝基氟苯誘導的小鼠遲發型變態反應(DTH)試驗 小鼠分組，給藥同實驗2.1隨機分為免疫正常+DTH陽性組、Cy+DTH陰性組、Cy+DTH陽性組、Cy+DTH陽性+受試藥物低劑量組、Cy+DTH陽性+受試藥物中劑量組、Cy+DTH陽性+受試藥物低劑量組、Cy+DTH陽性+金水寶組。實驗前小鼠禁食不禁水10 h，然后各組小鼠按0.1 ml/10 g體重灌胃給藥，1次/d，共7 d，其中免疫正常+DTH陽性組、Cy+DTH陰性組和Cy+DTH陽性組給予等體積蒸餾水。除免疫正常+DTH陽性組外，其余6組均于給藥的第3～5天腹腔注射環磷酰胺50 mg/kg，造成免疫功能低下模型。同時在第3天，除Cy+DTH陰性組以外，其他各組每鼠腹部去毛，將1%的2，4-二硝基氟苯丙酮液50 μl涂于脫毛處致敏，次日再強化一次。第7天各組小鼠用1%的2，4-二硝基氟苯液10 μl均勻涂于小鼠右耳進行攻擊，攻擊24 h后，處死小鼠，剪下左右耳，用直徑9 mm打孔器打下相應的圓耳片，稱重，并計算左右耳的耳腫差。

2 結果

2.1 炭粒廓清法 由表1可見:受試藥物低、中、高劑量組校正廓清指數與環磷酰胺造模組比較，差異有統計學意義(P＜0.05，P ＜0.01)。

表1 受試藥物對免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影響(±s)

表1 受試藥物對免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影響(±s)

注:*與陰性對照組的比較P＜0.05;＊＊與陰性對照組比較P＜0.01

組別 動物數(只)給藥劑量 廓清指數 校正廓清指數正常對照組 10 - 0.063±0.187＊＊ 8.357±2.143＊＊環磷酰胺造模組 10 - 0.042±0.011 5.826±1.143受試藥物低劑量組 10 3.0 ml/kg 0.050±0.021 6.552±1.265*受試藥物中劑量組 10 6.0 ml/kg 0.057±0.023＊＊ 7.150±1.163＊＊受試藥物高劑量組 10 12.0 ml/kg 0.059±0.017＊＊ 7.163±1.277＊＊陽性對照藥(金水寶膠囊)組 10 0.50 g/kg 0.061±0.012＊＊ 7.361±0.992＊＊

2.2 血清溶血素法由表2可見:受試藥物中、高劑量組校正廓清指數與環磷酰胺造模組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.3 DTH試驗 由表3可見:受試藥物高劑量組校正廓清指數與DTH陽性造模組比較，差異有統計學意義(P＜0.05)。

表2 受試藥物對免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響(±s)

表2 受試藥物對免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響(±s)

注:*與陰性對照組的比較P＜0.05;＊＊與陰性對照組比較P＜0.01

組別 動物數(只) 給藥劑量 血清溶血素水平(OD值)正常對照組 10 - 0.288±0.057＊＊環磷酰胺造模組 10 - 0.159±0.047受試藥物低劑量組 10 3.0 ml/kg 0.196±0.054受試藥物中劑量組 10 6.0 ml/kg 0.212±0.051*受試藥物高劑量組 10 12.0 ml/kg 0.241±0.051*陽性對照藥物(金水寶膠囊)組 10 0.50 g/kg 0.312±0.108＊＊

表3 受試藥物對2.4-二硝基氟苯誘導的小鼠遲發型變態反應(DTH)的影響

3 討論

通過實驗可提示念慈庵川貝枇杷膏對碳粒廓清法，低劑量就表現出了良好的免疫效果，而在血清溶血素試驗是中劑量，表現出了良好的免疫功能，DTH試驗只有在較高劑量時，表現出一定的提高免疫功能。綜上所述，念慈庵川貝枇杷膏對免疫低下小鼠具有一定的細胞免疫和體液免疫功能。

［1］ 曉龍，蔣偉哲，林自中.龍眼參提取物對環磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的影響.中國藥房，2004，15(6):334.

［2］ 吳克明，曾婧，曾南，等.清宮止血顆粒對免疫低下小鼠免疫功能的影響.中西醫結合學報，2004，2(3):203-204.