高效液相色譜法在生藥分析中的應用

鄒傳宗，陳 華

（平涼醫學高等專科學校，甘肅 平涼 744000）

高效液相色譜法在生藥分析中的應用

鄒傳宗，陳 華

（平涼醫學高等專科學校，甘肅 平涼 744000）

隨著植物藥越來越受到人們的重視，其需求也不斷增長，開展植物藥的藥代動力學、毒理學研究和質量控制，開發快速、靈敏、具有選擇性的分析方法也越來越迫切。高效液相色譜法（HPLC）作為分析化學成分的有效手段，近年在藥學領域的應用日趨廣泛。現綜述高效液相色譜法在生藥分析中的應用。

高效液相色譜法；生藥分析；應用

植物藥越來越受到人們的重視。據報道，全世界大約有70%的醫療依靠各種類型的植物藥。對植物藥的興趣主要基于以下2個原因：一是人們普遍認為植物藥具有較小的毒性；二是用合成方法尋求新藥物的可能性變得越來越小，同時已有的西藥對一些疑難病癥無能為力。隨著對植物藥需求的不斷增長，開展植物藥的藥代動力學、毒理學研究和質量控制，開發快速、靈敏、具有選擇性的分析方法也越來越迫切。高效液相色譜法（HPLC）作為一項分析速度快、分離效率高和操作自動化的技術，是一種非常有效和普遍適用的植物藥分析方法。它較之于以往常用的薄層色譜等方法，無論是在精密度、準確度上，還是在靈敏度、重現性上都有無與倫比的優勢。目前高效液相色譜法已經廣泛應用于植物藥中生物堿、皂苷、黃酮、蒽醌、香豆素等各種中藥有效成分的測定，還用于中藥及其制劑的質量監控。高效液相色譜法（HPLC）在生藥中的具體應用主要體現在如下幾個方面。

1 建立單味中藥的高效液相指紋圖譜

2000年，我國中藥指紋圖譜技術全面啟動。指紋圖譜能根據中醫用藥理論，從宏觀的角度完成對中藥的綜合分析和整體分析，表達產品質量的穩定性、均一性；有效地鑒別樣品的真偽或產地；指導中藥種植符合GAP的要求。它是中藥質量標準的一個飛躍，也是中藥實現國際化的關鍵技術之一。

余靜等通過對同一產地（龍江伊春南岔）10批刺五加樣品，采用HPLC-UV、HPLC-MS進行分析，得到分離度和重現性均較好的刺五加藥材HPLC-UV及HPLC-MS指紋圖譜，并分別對水溶性成分指紋圖譜中5個色譜峰和脂溶性成分指紋圖譜中8個色譜峰進行了初步定性。2個指紋圖譜相互補充為刺五加的相關研究提供了較全面的數據。同時表明質譜檢測器對UV檢測器是較好的補充。劉艷娥等通過對10批金銀花藥材樣品進行HPLC指紋圖譜研究確定了它們有11個共有峰。王榮等在對甘肅地產大黃藥材樣品的5批樣品及其不同用藥部位的HPLC研究中確定了7個特征峰，并且發現其中的α值（α=Tri/Trs，Tri為各組分的出峰時間，Trs為內參照峰的出峰時間）為0.12、0.13、0.28、0.67，它們在標準對照藥材中未標出。由此認為共有7個色譜峰是大黃藥材鑒定的有力依據。

對單味中藥的高效液相指紋圖譜進行研究，不僅在基礎理論上為藥材質量的評價做了大量而有效的工作，而且也為指紋圖譜理論在應用領域中的開展提供了簡便易行的方法。李磊等在對丹參水溶性成分以HPLC法進行研究的過程中，發現正品丹參共有18個共有峰，與其他鼠尾草屬植物的指紋圖譜存在較大差異，并且采用歸一化數藥法處理HPLC指紋圖譜得到不同類別丹參的典型指紋條形碼圖。該條形碼圖簡單明了，能直觀、快捷地對不同等級和質量的丹參做出評價，對不同來源及真偽丹參做出準確鑒別。

2 不同地域、批次藥材中主要化學成分比較的指紋圖譜研究

對于部分應用時間長、療效肯定、成分明確的藥材，通過研究其主要化學成分的HPLC指紋圖譜，從方法學的角度講，能夠使研究的方向更加明確，結果比較確定，能對藥材質量做出更好的評價。陳志霞等通過對化橘紅黃酮成分的HPLC法研究，從不同品種和產地的10批樣品中得到三十余個峰，其中共有峰20多個，并發現大部分光橘紅樣品在51.40 min有一個含量超過10%的峰，而毛橘紅則檢測到此峰的含量極低。此外，毛橘紅中的柚皮苷的含量均在70%以下，表明化州柚和柚主要有效部位黃酮類成分的HPLC指紋圖譜有明顯差別。馬翠英等對10批不同地區的黃芩樣品采用溶劑系統梯度洗脫后，確定了14個共有峰的HPLC指紋圖譜。此外，張雯潔等進行了三七不同部位皂苷類成分的HPLC指紋圖譜研究，認為三七不同部位中皂苷成分大體相同，并確定了17個特征峰。

3 應用于相似藥材的鑒別及質量評價

許多同科或同屬的藥材，由于其具有相似的功效，在臨床上有時混用，或在藥材流通中摻偽。與此同時，某些資源匱乏、稀有的名貴藥材，也存在急需尋找替代品的問題。而上述問題的解決都需要通過有力的質量控制和評價方法來解決，HPLC就是其中的方法之一。李曉蒙等通過對5批水牛角和羚羊角樣品的HPLC法測定，發現羚羊角與水牛角的氨基酸含量有明顯差異，前者含較高的天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸，而后者則是丙氨酸、頡氨酸的含量相對較高，2者可以用HPLC法區分。張聰等對中國紅參和高麗紅參進行了HPLC指紋圖譜比較研究，表明國產紅參和高麗紅參的品質十分接近。

4 中藥制劑的HPLC指紋圖譜研究

中藥制劑是中藥產業發展的一個重要部分，質量控制是影響其全面發展和國際化的一個瓶頸。2002年，國家食品藥品監督管理局要求對中藥注射劑進行指紋圖譜研究，而其他劑型的指紋圖譜也相繼有人開展了研究。苗愛軍通過對2個不同廠家生產的刺五加注射液的分析，建立其24個特征峰的HPLC指紋圖譜，并發現不同廠家的產品共有峰面積的比值有一定差異，認為HPLC指紋特征圖譜可以快速區分不同的產品。而沈嘉等對不同工藝、不同原料制備的黃連解毒湯制品以及日本漢方黃連解毒湯劑用HPLC法分析，發現共有15～16個特征峰為共有峰，而不同生產工藝及原料制品的特征峰與內標峰的峰高比有顯著區別，他們認為HPLC指紋圖譜可以量化區分不同原料和生產工藝生產的同處方復方中藥的質量特征。

5 中藥方劑（見表1）

表1 HPLC在中成藥分析中的應用

中藥方劑一般由幾種甚至幾十種中藥材組成，化學成分非常復雜。目前我們對中藥方劑中的有效成分的認識還相當有限，有待開發準確地評價中藥方劑質量的分析方法。人們由分析中藥復方制劑中的一種活性組分到分析幾種活性組分，逐漸提高評價中藥制劑的水平。日本和臺灣的健康福利部門都已明確規定，凡申請檢察和注冊的中藥制劑必須包括至少2個作為質量指標的化學成分的含量分析。

Wen等對3種含黃芩、葛根的中藥復方制劑中的黃芩甙、葛根素進行了測定。Lee以0.03%磷酸/乙腈（V/V）為流動相在Cosmosil 5C18-AR柱上用梯度洗脫，同時測定了由多味藥材構成的中藥復方制劑中的甘草甙、甘草甜素、橙皮甙、桂皮酸、桂皮醛和厚樸酚等6種活性組分。在同樣的柱和流動相條件下，Lin等以對羥基苯甲酸丙酯為內標，測定了中藥制劑中的龍膽苦甙、芒果甙、小檗堿、黃芩甙、次黃芩素和甘草酸。表1中列出了近年來為分析中藥制劑中的活性組分開發的HPLC法。

高效液相色譜法吸取了經典液相色譜和氣相色譜2種方法的優點，它必將在中藥鑒定以及中藥材的種植、中藥炮制研究、中藥活性成分的分析、生產工藝規范與優化、中藥及其制劑生產的質量監控等方面起到重要的作用，但由于中藥及其復方物質基礎的復雜性，在中藥藥代動力學研究中高效液相色譜技術還有待進一步完善。

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1671-1246（2011）08-0156-02