缺血后適應對樹鼩海馬CA1區神經元Akt信號轉導調控的機制研究*

湯 諹, 李樹清, 李 凡, 李 飛, 張 穎

(1昆明醫學院第一附屬醫院皮膚/醫學美容科，云南 昆明 650032；2昆明醫學院基礎醫學院病理生理教研室，云南 昆明 650031)

缺血后適應對樹鼩海馬CA1區神經元Akt信號轉導調控的機制研究*

湯 諹1, 李樹清2△, 李 凡2, 李 飛2, 張 穎2

(1昆明醫學院第一附屬醫院皮膚/醫學美容科，云南 昆明 650032；2昆明醫學院基礎醫學院病理生理教研室，云南 昆明 650031)

目的了解缺血后適應(PC)對樹鼩腦缺血時海馬CA1區神經元磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(PI-3K/Akt)下游底物絲/蘇氨酸蛋白激酶(Akt Ser-473/Thr-308)磷酸化(Akt[pS473]/Akt[pT308])的調控，探討Akt信號轉導通路在缺血PC腦保護中的作用機制。方法以樹鼩為實驗動物，用光化學誘導法復制局部腦缺血，并于腦缺血后3 h 30 min反復夾閉缺血側頸總動脈3個循環(5 min 1個循環)以制備后適應模型。在光鏡、電鏡下觀察海馬CA1區神經元損傷及其超微結構變化的同時，采用免疫組化法了解腦缺血樹鼩海馬CA1區神經元Akt[pS473]/Akt[pT308]的分布及定位，并以灰度值檢測磷酸化強度。結果腦缺血可導致樹鼩海馬損傷及細胞超微結構的明顯異常；而缺血PC可使海馬CA1區神經元超微結構的異常明顯改善。免疫組化結果顯示，對照組海馬CA1區Akt[pS473]及 Akt [pT308]的磷酸化為陰性。缺血PC組與缺血組在不同時點的胞漿、胞膜均出現Akt[pS473]，但缺血72h Akt[pS473]減弱(灰度值146.6±2.9)。缺血組Akt [pT308]僅在4 h明顯增強(灰度值135.5±2.2)，隨后則未檢測到(灰度值分別為165.3±3.7，163.3±2.5)。而缺血PC組4 h時點Akt [pT308]呈陰性，隨后24 h、72 h則持續顯著的陽性。結論缺血PC能明顯減輕海馬CA1區神經元的缺血性損傷，其保護機制可能與 Akt Ser-473和Thr-308 2個位點磷酸化導致PI-3K/Akt信號轉導途徑的激活有關。

腦缺血； 缺血后適應； 磷脂酰肌醇-3激酶/Akt； 信號轉導； 樹鼩

缺血后適應(ischemic postconditioning, ischemic PC)是一種在方法上與缺血預適應(ischemic preconditioning, IP)完全不同，但效果相似的細胞保護措施，缺血PC的發現提示：機體缺血狀態下，內部天然的內源性保護機制的激活對機體的抗損傷反應具有特殊的生物學意義[1]。2003年Zhao等[2]在首次描述缺血PC時，發現在心肌缺血再灌注的早期使用短暫、重復的缺血能減小再灌注的損傷。Burda等[3]隨后證實，在正確的時間應用最佳強度的PC能防止遲發性神經元死亡的過程，但有關PC保護神經元的機制尚不清楚。本研究通過比較樹鼩血栓性腦缺血及后適應對磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(phosphatidylinositol 3-kinase-Akt, PI-3K/Akt)信號轉導通路下游底物-絲/蘇氨酸蛋白激酶Akt[Ser-473]和Akt[Thr-308]磷酸化的影響，以探討PI-3K/Akt信號轉導在缺血PC腦保護中的病理生理機制。

材 料 和 方 法

1材料

1.1動物 采用健康成年樹鼩42只，雌雄不拘，體重(100±10)g。避光、安靜、清潔環境飼養，隨機分為對照組(假手術組，sham)、血栓性腦缺血4h組(ischemia 4 h)、缺血24 h組(ischemia 24 h)、缺血72 h組(ischemia 72 h)、缺血后適應4 h組(PC 4 h)、缺血后適應24 h組(PC 24 h)和缺血后適應72 h組(PC 72 h)，共7組(每組n=6)。

1.2主要儀器 本室研制的SQ-Ⅲ型光化學誘導腦血栓形成裝置，由電源(含濾波電路及觸發器)，光源、散熱裝置組成。光學系統主要由干涉濾鏡及聚光鏡組成。光源中心波長(λ=560 nm)，帶寬(Δλ=60 nm)，光強度(10 W/cm2)，用時間繼電器控制照射時間。Leica RM 2135石蠟切片機。奧林巴斯光學顯微鏡BX50 。HMIAS-2000高清晰度彩色醫學圖文分析系統(武漢千屏影像技術有限公司)。Nikon-MiVnt顯微圖像分析系統(Nikon)。

1.3主要試劑 注射用硫噴妥鈉(thiopental sodium for injection)為上海新亞藥業有限公司產品；孟加拉紅(rose Bengal)為Fluka產品；甲醛溶液(formaldehyd solution)為汕頭市達濠精細化學品有限公司產品；0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液pH7.4(phosphate buffer saline, PBS)為福州邁新生物技術開發有限公司產品；多聚賴氨酸(poly-L-lysine)為福州邁新生物技術開發有限公司產品； Tween-20和EDTA Na2北京索來寶科技有限公司產品；10%山羊血清(goat serum)為晶美生物工程有限公司；Ⅰ抗 phospho-Akt(Ser473)mouse mAb及Ⅰ抗 phospho-Akt(Thr308)rabbit mAb購自Cell Signaling Technology； Ⅱ抗 MaxVisionTM即用型試劑、快速型酶標羊抗鼠/兔IgG聚合物及DAB顯色液為福州邁新生物技術開發有限公司產品。

2方法

2.1光化學誘導法復制血栓性腦缺血動物模型[2]將動物腹腔注射1%硫噴妥鈉溶液(5 mL/kg BW)麻醉固定，自舌下靜脈注入1.5 g/L 孟加拉紅溶液(1.33 mL/kg BW)，常規消毒后，自右耳屏前至右眼外眥作切口，切開皮膚、顳肌、顯露樹鼩顱骨，透過樹鼩顱骨可見清晰的顱內血管影像，將動物置于SQ-Ⅲ型腦血栓形成實驗裝置下，經特殊波長的光束(強度為1.0 W/cm2)透過樹鼩半透明顱骨照射腦血管15 min，復制血栓性腦缺血模型，照射結束后，縫合動物頭顱部創口，保暖入籠。

2.2樹鼩海馬缺血PC模型的建立 在光化學法制備血栓性腦缺血模型基礎上，在既定時點(4 h)前40 min，用1%硫噴妥鈉(2.5 mL/kg BW)重新麻醉動物，動物仰臥固定，頸部正中作縱形切口，切開皮膚、皮下組織、頸闊肌，在右側胸鎖乳突肌前緣分離進入頸鞘，保護迷走神經與頸內靜脈，分離頸總動脈，過線，在既定時點(4 h)前30 min以無創動脈夾在甲狀軟骨上緣平面夾閉頸總動脈5 min后去除動脈夾再灌5 min，重復3次以復制缺血PC模型，術后縫合動物頸部創口，保暖入籠。

2.3腦恒壓灌流與內固定 在腦缺血后不同時點(4 h、24 h和72 h)以及缺血后適應后不同時點(4 h、24 h和72 h)麻醉動物，用手術剪剪開腹腔，結扎降主動脈，開胸并剪開心包，左心室插入聚乙烯管，使其進入升主動脈，扎閉主動脈根部以防回流，剪開右心耳，灌注預冷的生理鹽水300 mL，待肝臟呈現蠟黃色時在120 mmHg 壓力下緩慢滴注(25 gtt/min)固定液10%甲醛100 mL行內固定，滴注持續1 h，隨后將腦組織取出，浸泡于10%甲醛溶液中行后固定30 min，將腦組織移至新鮮配制的10%甲醛溶液中繼續固定至24 h，于視交叉后1.7-4.0 mm(海馬齒狀回互包平面)行冠狀切片，取中間切塊遞級脫水、透明、浸蠟，常規石蠟包埋制成蠟塊標本，儲存于4 ℃冰箱備用。

2.4Akt [pS473]和Akt [pT308]免疫組織化學檢測 蠟塊標本連續切片，切片厚度5μm，貼片于多聚賴氨酸原液預處理的載玻片上，切片移至55 ℃恒溫箱內烤片4-6 h，將組織切片脫蠟，置入100%二甲苯中室溫孵育3次，每次5 min；將切片置入100%乙醇溶液內洗片2次，95%乙醇溶液內洗片2次后，將切片移入去離子水內5 min再水化，1 mmol/L EDTA(pH 8.0)1 000 mL內煮沸15 min，進行抗原修復，自然冷卻至40 ℃后用去離子水洗切片3次，3% H2O2室溫孵育10 min；去離子水洗切片2次，1×PBST工作液洗切片5 min；每樣本加入200μl，置濕盒內室溫封閉1 h，甩干封閉液，加入以封閉液(5%山羊血清)配制的Ⅰ抗100 μL，置濕盒內4 ℃孵育過夜，1×PBST工作液洗切片3次，每次5 min，加入Ⅱ抗置濕盒內室溫孵育25 min，1×PBST洗切片3次，每次5 min，新鮮配制DAB顯色8 min，去離子水沖洗終止顯色，蘇木素核復染4 min，遞級乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片。奧林巴斯BX50光學顯微鏡下觀察，陽性反應部位呈現棕黃色(DAB顯色)，利用Nikon-MiVnt顯微圖像分析系統檢測灰度值，進行Akt [pS473]和Akt [pT308]表達強度分析。實驗對照組用PBS代替I抗，其余步驟相同。制作完成的切片儲存于避光干燥之處，各組動物同時切片，并同時進行免疫組化染色。以保證實驗條件的一致性。

2.5電鏡取材及組織固定 在血栓性腦缺血后不同時點及缺血后適應不同時點麻醉動物，快速斷頭取腦，取缺血側及對側海馬CA1區組織，置于3.5%

戊二醛內固定，固定瓶置4 ℃冰箱內保存，用磷酸緩沖液沖洗后，丙酮酸逐級脫水，1%四氧鋨酸固定24 h，LKB5型超薄切片機半薄切片定位，隨后作檸檬酸鉛醋酸鈾雙染色，在JEM-100CX型電子顯微鏡下觀察。

3統計學處理

結 果

1缺血PC對樹鼩血栓性腦缺血海馬神經元超微結構的影響

1.1正常對照及腦缺血組海馬CA1區神經元的形態學 對照組海馬CA1區神經元形態正常，排列正常；線粒體形態正常，偶爾可見線粒體輕度腫脹，內質網排列規則，粗面內質網核糖體清晰完整，高爾基體結構正常，分布均勻，見圖1 A、B。實驗結果可見，血栓性腦缺血后海馬超微結構的改變以腦缺血后24 h最為明顯，可見海馬CA1區神經元出現固縮，在海馬周圍固縮細胞增多，線粒體腫脹，線粒體嵴消失或呈空泡狀，內質網擴張、池形成,見圖1 C、D；腦缺血后72 h超微結構的改變減輕，線粒體輕度腫脹、嵴部分消失，內質網輕度擴張(圖略)。

Figure 1. The neuronal ultrastructure in hippocampus CA1 area under the electronic microscope. A:the normal neuron in hippocampus with regular arrangement(×8 000);B:the normal mitochondria in intracytoplasm and the clear cell spaces(×25 000);C:obviously mitochondria swelling and partly disruption and vanishing of mitochondrial cristae 24 h after thrombotic cerebral ischemia(×30 000); D:the intensive Golgi’s body and the vague limit between subcellular structure 24 h after thrombotic cerebral ischemia(×20 000);E:the extenuation of mitochondria swelling and some normal mitochondria 24 h after ischemic PC(×25 000);F:lightly expanding of endoplasmic reticulum 24 h after ischemic PC(×25 000).

圖1電鏡下神經元超微結構

1.2缺血PC對樹鼩血栓性腦缺血海馬神經元超微結構的影響 在缺血后適應24 h可見海馬CA1區少量神經元出現固縮改變，部分細胞可見異染色質增多，殘體出現；線粒體腫脹、嵴部分消失，但多數線粒體形態正常；內質網排列基本正常，部分內質網擴張，見圖1 E、F；缺血后適應72 h線粒體及內質網的結構接近正常(圖略)。

2缺血PC對樹鼩血栓性腦缺血海馬CA1區神經元Akt[pS473]及Akt[pT308]表達的影響

2.1海馬CAI區神經元Akt[pS473]及[pS473]及Akt[pT308]的免疫組化檢測 對照組海馬CA1區Akt[pS473]及 Akt [pT308]的表達均為陰性，見圖2、3。在缺血PC組與缺血組在不同時點均出現Akt[pS473]的胞漿、胞膜表達，見圖2、3。但缺血組72 h Akt[pS473]的表達減弱。缺血組Akt [pT308]僅4 h呈陽性表達，隨后則為陰性表達。而缺血PC組Akt [pT308]4 h呈陰性表達，隨后24 h和72 h則持續陽性表達。

2.2海馬CA1區神經元Akt[pS473]及Akt[pT308]灰度值測定 腦缺血4 h、24 h和72 h海馬 Akt[pS473]的灰度值分別為133.5±3.3、133.5±3.1和146.6±2.9，均顯著低于對照組(P<0.01)，但各時點之間的灰度值無顯著差異(P>0.05)；缺血PC組4 h的灰度值高于缺血組(P<0.01)，但低于對照組，見表1。腦缺血4 h、24 h和72 h海馬 Akt[pT308]灰度值分別為135.5±2.2、165.3±3.7和163.3±2.5，除缺血組4 h顯著低于對照組外(P<0.01)，缺血組24 h及72 h的灰度值與對照組比較無顯著差異。缺血PC組4 h的灰度值明顯高于缺血組(P<0.01)，但缺血PC 24 h和72 h則明顯低于缺血組(P<0.01)，見表2。

Figure 2. Distribution of Akt[pS473] in pyramid cells of hippocampus in CA1 area (immunohistochemical staining, ×400). The Akt[pS473] in sham group was negative. The Akt[pS473] was positive in cytoplasm and membrane of pyramid cells after cerebral ischemia and cerebral ischemic PC，but the intensity of Akt[pS473] decreased 72 h after ischemia.

圖2海馬CA1區錐體細胞Akt[pS473]的分布

Figure 3. Distribution of Akt[pT308] in pyramid cells of hippocampus in CA1 area (immunohistochemical staining, ×400). The Akt[pT308] in sham group was negative. The Akt[pT308] was positive 4 h after cerebral ischemia, but negative at 24 h and 72 h. The Akt[pT308] in ischemic PC group was negative at 4 h, but obviously positive at 24 h and 72 h.

圖3海馬CA1區Akt[pT308]的分布

表1缺血PC對腦缺血樹鼩海馬CA1區神經元Akt[pS473]灰度值的影響

Groups4h24h72hSham162．8±3．8NDNDIschemia133．5±3．3??133．5±3．1??146．6±2．9??IschemicPC154．5±2．9△△132．5±2．7134．7±3．0

ND: not detected.**P<0.01vssham;△△P<0.01vsischemia.

表2缺血PC對腦缺血樹鼩海馬CA1區神經元Akt[pT308]灰度值的影響

Group4h24h72hSham165．5±2．7NDNDIschemia135．5±2．2??165．3±3．7163．3±2．5IschemicPC163．5±2．3△△137．7±3．1△△132．0±3．2△△

ND: not detected.**P<0.01vssham;△△P<0.01vsischemia.

討 論

腦缺血PC是近年新興的探索領域，有關PI-3K /Akt在缺血狀態下的細胞生存分子機制的研究且備受關注。業已證明，磷脂酰肌醇3激酶/Akt (phosphatidylinositol 3-kinase /Akt，PI-3K /Akt)信號轉導途徑是細胞生存的重要途徑之一，在促進細胞生存，抑制細胞凋亡過程中具有重要作用。Akt是PI-3K信號轉導途徑中重要的靶激酶，在PI-3K介導的信號轉導途徑中，Akt信號轉導通路通過對凋亡的調節作用促進細胞的生存。

本研究應用免疫組化檢測了缺血組與缺血后適應組海馬神經元Akt[pS473]及Akt[pT308]表達的定位及半定量改變，并對照電鏡超微結構相應的結果分析Akt[pS473]及Akt[pT308]表達是否與細胞結構損傷有關。

免疫組化結果顯示，對照組海馬CA1區Akt[pS473]的表達為陰性，而大腦皮質可觀察到Akt[pS473]在胞漿的弱陽性表達(另文)。比較缺血后適應組與缺血組，雖然二者在不同時點都出現Akt[pS473]的胞漿、胞膜表達，但在缺血組72 h Akt[pS473]的表達已經減弱(灰度值146.6±2.9)。正如Pignataro等[4]報道缺血后適應的神經保護效應部分源于Akt的磷酸化。Wang等[5]和Scartabelli等[6]通過使用Akt激酶的抑制劑，間接證實了PI-3K/Akt信號轉導途徑在缺血后適應對神經元的保護機制中可能起著關鍵作用。

Akt 的完全激活受到雙重調控[10-12]：(1)Akt轉位到質膜上；(2)Akt的Thr-308和Ser-473磷酸化。Akt信號通路的完全激活，應包括Akt Ser-473和Thr-308兩個位點同時磷酸化，而既往研究主要集中在Akt[pS473]，而對Akt [pT308]的狀況報道不多，本文的數據顯示，缺血組Akt [pT308]僅在4 h有陽性表達(灰度值135.5±2.2)，隨后24 h、72 h則表達為陰性(灰度值分別為165.3±3.7、163.3±2.5)。而后適應組則不同，4 h時點Akt[pS473]開始表達，但強度有限(灰度值154.5±2.9低于對照組，與缺血72 h無顯著差異)。隨后的24 h及72 h則表達增強并持續(灰度值分別為132.5±2.7和134.7±3.0)。相應的電鏡下細胞結構顯示，在缺血組24 h時點，海馬CA1區神經元出現固縮，海馬周圍固縮細胞增多，線粒體腫脹，嵴消失或呈空泡狀，內質網擴張，內質網池形成，胞漿水腫；海馬周圍組織水腫、變性、壞死和出血，見圖1 C、D。而在缺血后適應組24 h時點，電鏡下僅見海馬CA1區少量神經元出現固縮改變，部分細胞可見異染色質增多，殘體出現；線粒體腫脹、嵴部分消失，但多數線粒體形態正常；內質網排列基本正常，見圖1 E、F。根據以上現象分析，短暫性腦缺血活化了細胞死亡和細胞生存激酶途徑，Akt[Ser-473和Thr-308個位點的磷酸化，使得Akt信號通路完全激活，多種神經營養因子通過激活PI-3K/Akt信號途徑而抑制細胞凋亡，發揮腦保護作用，這一機制在其他學者的研究中也得到相應共識[7-9]。

業已證明，通過反復3次夾閉頸總動脈可使海馬局部腦血流量(regional cerebral blood flow,rCBF)在不輸液、不用藥的前提下逐步得以回升達正常時海馬rCBF的56%以上水平。其PC機制可能包括“機械信號轉導”和體內血液重新分布兩方面。前者可能與夾閉血管及開夾時血流沖擊所產生的機械信號轉導有關；后者則由于腹腔內臟與腦血管α-受體分布不同，以及夾閉頸動脈引起減壓反射的加壓效應的結果[1]。細胞結構變化結果提示，腦缺血可直接導致海馬神經元亞細胞結構損傷，其損傷的程度與Akt活化水平呈負相關關系，Akt活化水平高，則亞細胞結構的損傷程度減輕。缺血PC通過活化Akt，在緩解海馬CA1區神經元的損傷而促進細胞生存中起著重要作用。

由于PI-3K/Akt途徑涉及的下游靶激酶較為復雜，許多問題仍有待探討。在下一步研究中，擬通過更精確的定量研究方法對照Akt[pS473]和Akt[pT308]在缺血和缺血后適應時的動力學變化，分析這種動力學變化是否與海馬CA1區神經細胞凋亡存在因果關系。

[1] 李樹清，羅海蕓.缺血后適應對樹鼬海馬CA1區腦血流及星形膠質細胞活化的影響及可能機制[J].中國病理生理雜志，2008,24(6):1090-1095.

[2] Zhao ZQ, Corvera JS, Halkos ME, et al. Inhibition of myocardialinjury by ischemic postconditioning during reperfusion: comparison with ischemic preconditioning[J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol,2003,285(2):H579-H588.

[3] Burda J, Danielisova V, Nemethova M, et al. Delayed postconditionig initiates additive mechanism necessary for survival of selectively vulnerable neurons after transient ischemia in rat brain[J]. Cell Mol Neurobiol,2006, 26(7-8):1141-1151.

[4] Pignataro G, Meller R, Inoue K,et al.Invivoandinvitrocharacterization of a novel neuroprotective strategy for stroke: ischemic postconditioning[J]. J Cereb Blood Flow Metab, 2008, 28(2): 232-241.

[5] Wang HY, Wang GL, Yu YH, et al. The role of phosphoinositide-3-kinase/Akt pathway in propofol-induced postconditioning against focal cerebral ischemia-reperfusion injury in rats[J].Brain Res,2009,1297:177-184.

[6] Scartabelli T, Gerace E, Landucci E, et al.Neuroprotection by group I mGlu receptors in a rat hippocampal slice model of cerebral ischemia is associated with the PI3K-Akt signaling pathway: a novel postconditioning strategy? [J]. Neuropharmacology,2008，55(4):509-516.

[7] Brunet A, Datta SR, Greenberg ME. Transcription-dependent and -independent control of neuronal survival by the PI3K-Akt signaling pathway[J]. Curr Opin Neurobiol, 2001, 11(3):297-305.

[8] Hanada M, Feng J, Hemmings BA. Structure, regulation and function of PKB/AKT-a major therapeutic target[J]. Biochim Biophys Acta, 2004, 1697(1-2):3-16.

[9] Nusse R. Wnts and Hedgehogs: lipid-modified proteins and similarities in signaling mechanisms at the cell surface[J]. Development,2003, 130(22):5297-5305.

[10]Iliodromitis EK, Georgiadis M, Cohen MV, et al. Protection from postconditioning depends on the number of short ischemic insults in anesthetized pigs[J]. Basic Res Cardiol,2006, 101(6):502-507.

[11]Hausenloy DJ, Yellon DM. Survival kinases in ischemic preconditioning and postconditioning[J]. Cardiovasc Res, 2006, 70(2): 240-253.

[12]Danielisova V, Nemethova M, Gottlieb M, et al. The changes in endogenous antioxidant enzyme activity after postconditioning[J]. Cell Mol Neurobiol,2006, 26(7-8):1181-1191.

EffectsofischemicpostconditioningonneuronalAktsignalingpathwaysinhippocampusCA1areaaftercerebralischemiaintreeshrews

TANG Yang1, LI Shu-qing2, LI Fan2, LI Fei2, ZHANG Ying2

(1DepartmentofDermatology&MedicalCosmetology,TheFirstAffiliatedHospital,KunmingMedicalCollege,Kunming650032,China;2DepartmentofPathophysiology,KunmingMedicalCollege,Kunming650031,China.E-mail:shuqing591@hotmail.com)

AIM: To investigate the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt (PI-3K/Akt) Ser-473/Thr-308/ phosphorylation (Akt[pS473]/Akt[pT308]) and the intensity of the neurons in happocampus CA1 area under the conditions of thrombotic cerebral ischemia and postconditioning in tree shrews.METHODSThe thrombotic focal cerebral ischemia was induced by photochemical reaction in tree shrews. Two hundred and ten minutes after cerebral ischemia, ischemic postconditioning was established by repeated cliping of ipsilateral carotid. The distribution of Akt[pS473] and Akt[pT308], and neuronal ultrastructure in hippocampus CA1 area were observed by the methods of electronic microscopy and immunohistochemistry. The phosphorylation intensity was measured by determining the optical gray value.RESULTSThe photochemical reaction induced cerebral ischemia and resulted in obvious lesions in hippocampus CA1 neurons. The damages of ultrastructure in the hippocampus were diminished by postconditioning. Correspondingly, in ischemia group, although the Akt[pS473] showed positive during 72 h, the positive Akt[pT308] was only observed at the time point of 4 h, and went negative at the time points of 24 h and 72 h. In postconditioning group, Akt[pS473] at the time points of 4 h, 24 h and 72 h were positive,and Akt[pT308] at the time points of 24 h and 72 h was also positive.CONCLUSIONCerebral ischemia leads to neuron lesions in tree shrew hippocampus and the postconditioning decreases the damage. The Akt[pS473] and Akt[pT308] may play important roles in the protective mechanism.

Brain ischcemia; Ischmic postconditioning; Phosphatidylinositol 3-kinase/Akt; Signal transduction; Tree shrew

R363

A

1000-4718(2011)03-0560-06

2010-08-23

2010-12-06

國家自然科學基金資助項目(No.30660056;No.30971171)；昆明醫學院第一附屬醫院院內基金資助項目(No.2009BS09)

△通訊作者Tel：0871-5338591;E-mail: shuqing591 @hotmail.com

10.3969/j.issn.1000-4718.2011.03.027