喉疾靈口含片抗炎抑菌作用實驗研究△

趙永良，王超，韓亞朋，劉景彬，劉紅玲，謝印芝，程鵬，李建慧

(天津美倫醫藥集團有限公司藥物研究院，天津 300400)

喉疾靈口含片抗炎抑菌作用實驗研究△

趙永良，王超*，韓亞朋，劉景彬，劉紅玲，謝印芝，程鵬，李建慧

(天津美倫醫藥集團有限公司藥物研究院，天津 300400)

目的：對喉疾靈口含片進行抗炎、抑菌作用實驗研究。方法：采用二甲苯致小鼠耳殼腫脹、角叉菜致大鼠足趾腫脹、大鼠棉球肉芽腫等炎癥模型，以及含藥血清體外抑菌實驗模型，評價喉疾靈口含片的抗炎、抑菌作用。結果：與空白對照比較，喉疾靈口含片明顯抑制了小鼠耳殼腫脹(P<0.05或P<0.01)、大鼠足趾腫脹以及大鼠棉球肉芽腫的形成(P<0.05)；其含藥血清對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌及白色念珠菌具有明顯的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。結論：上述結果表明，喉疾靈口含片對化學刺激所致炎癥有明顯的抑制作用，其含藥血清具有顯著的體外抑菌作用。

喉疾靈口含片；膠囊；抗炎；抑菌

20世紀90年代天津美倫醫藥集團推出了喉疾靈膠囊產品，用于咽喉疾病，主要由冰片、牛黃、山豆根、訶子等組成。目前，該品種屬于國家中藥保護品種、天津市醫保品種。因其服用劑量大，質控指標不夠精確，我們按照現代制藥技術理論與手段對其進行了二次開發，研制出喉疾靈口含片。該品種服用方便，質控指標更加完善與精準。本文主要對其抗炎、抑菌方面的藥效進行了實驗研究。

1 動物、試藥與儀器

1.1 動物

KM品系雄性小鼠及SD品系大鼠(雌、雄)均為SPF級，由天津市山川紅實驗動物科技有限公司提供，許可證號分別為：SCXK(津)2009-0001，SCXK(津)2009-0001。動物試驗室：溫度20～25 ℃，濕度40 %～70 %，飼料購自中國醫學科學院試驗動物研究所繁育場。飼養期間大、小鼠均自由飲水與取食。

1.2 試藥

1.2.1 喉疾靈口含片 1 g藥粉相當于7.2 g生藥(天津美倫醫藥集團有限公司,批號：090101)。臨床擬定用法用量為每次1片，每天3次，每片含藥粉0.386 6 g，實驗前以純水配制成不同濃度的混懸液備用。

1.2.2 喉疾靈膠囊 市售品，內容物1 g藥粉相當于5.4 g生藥(天津美倫醫藥集團有限公司，批號：081205)。臨床用法用量為每次3粒，每天3次，每粒含藥粉0.25 g，實驗前以純水配制成不同濃度的混懸液備用。

1.2.3 吲哚美辛膠囊 25 mg/粒(河北永豐藥業有限公司，批號：20090304)。

1.2.4 角叉菜膠 (東京化成工業株式會社，批號：FGN01)。

1.2.5 青霉素粉針 100萬單位/支(GREENFIELD PHARMACEUTICAL，CO.LTD，批號：080101)。

1.2.6 二甲苯 分析純(天津市贏達稀貴化學試劑廠，批號：20090531)。

1.2.7 注射用頭孢曲松鈉 1.0 g/瓶(臺灣泛生制藥廠股份有限公司，批號：20090627)。

1.2.8 甲潑尼龍片 4 mg/片(天津藥業集團有限公司，批號：200905003)。

1.2.9 實驗菌株 金黃色葡萄球菌[菌號：CMCC(B)26003]、銅綠假單胞菌[菌號CMCC(B)10104]、白色念珠菌[菌號：CMCC(F)98001](中國藥品生物制品檢定所)。

1.2.10 培養基 營養肉湯培養基(批號：080513)、營養瓊脂培養基(批號：081210)、改良馬丁培養基(批號：080909)，均由北京制藥科技開發公司購入。

實驗中我們依據《藥理學實驗方法》一書中的相關換算方法[1]，同時結合預實驗結果制定出了不同實驗部分的給藥劑量。

1.3 儀器

比濁標準管(中國細菌濁度標準，中國藥品生物制品檢定所)。濾紙片(PAPER DISC for Antibiotic examination，SIZE 8M/MDIA，TOYO SEISAKUSHO CO.，LTD)。

儀器設備：YLS-7B足趾容積測量儀(山東省醫學科學院濟南科技發展有限公司)。

2 方法與結果

2.1 抗炎作用

2.1.1 喉疾靈口含片對二甲苯所致小鼠耳殼炎癥的影響[1]取健康雄性小鼠，體重20～22 g，隨機分成6組，每組10只，設空白對照組(Control)，陽性對照組，喉疾靈口含片8，4，2 g生藥·kg-13個劑量組(HJLBTH、HJLBTM、HJLBTL)和喉疾靈膠囊組(HJLC)4 g生藥·kg-1；各組小鼠連續灌胃給藥3 d，陽性組在試驗當日一次給予吲哚美辛膠囊(YDMX)10 mg·kg-1，空白對照組給予等量的純化水，給藥體積均為20 mL·kg-1。各組于末次給藥后1 h，每只小鼠右耳兩側涂二甲苯0.05 mL致炎，45 min后斷頸處死動物摘取左、右兩耳，用直徑7 mm角膜環鉆切下兩耳片稱重，求其兩耳重量差值作為炎癥腫脹程度指標，計算腫脹抑制率，腫脹抑制率=(對照組耳片差值—給藥組耳片差值)/對照組耳片差值×100 %,結果見表1。

表1 喉疾靈口含片對二甲苯所致小鼠耳殼炎癥的影響

注：(1)n=10，(2)與Control組比較，*P<0.05，**P<0.01

據表1可知，與Control組比較，喉疾靈口含片中、高劑量組明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳殼腫脹(P<0.05或P<0.01)；喉疾靈膠囊(4 g生藥·kg-1)同樣顯著抑制了小鼠耳殼腫脹(P<0.05)，腫脹抑制率較同劑量口含片偏低。上述結果表明喉疾靈口含片對免疫炎癥反應有一定的抑制作用。

2.1.2 喉疾靈口含片對角叉菜所致大鼠足跖炎癥的影響[2]取健康雄性SD大鼠，體重200～220 g，隨機分成6組，每組10只，設空白對照組(Control)，陽性對照組，喉疾靈口含片3,1.5,0.75 g生藥·kg-13個劑量組(HJLBTH、HJLBTM、HJLBTL)和喉疾靈膠囊組3 g生藥·kg-1(HJLC)；各組大鼠連續灌胃給藥5 d，陽性藥吲哚美辛(YDMX)10 mg·kg-1在試驗前日和試驗當日各給藥1次，空白對照組給予等量的純化水，給藥體積均為10 mg·kg-1。各組在末次給藥的同時，于大鼠右后足跖皮下注入1 %角叉菜膠溶液0.1 mL/只致炎，在致炎前和致炎后的1，2，3，4，5，6 h測量大鼠足跖容量，以致炎前后足跖容量差值作為炎癥腫脹度指標，并與對照組同期進行統計學比較，計算炎癥抑制率,炎癥抑制率=(對照組足跖腫脹度-給藥組足跖腫脹度)/對照組足跖腫脹度×100 %，結果見表2。

據表2可知，與空白對照組比較，喉疾靈口含片中劑量組在致炎后第2,3 h，高劑量組在致炎后2,3,4 h，大鼠足趾腫脹程度明顯低于對照組(P<0.05)；喉疾靈膠囊3 g生藥·kg-1劑量下，于致炎2,3 h顯著抑制了大鼠足趾腫脹(P<0.05)，但效力比同劑量口含片稍弱。說明喉疾靈兩種劑型能夠明顯抑制角叉菜所致的大鼠足趾腫脹，口含片作用強度略優于膠囊。

2.1.3 喉疾靈口含片對大鼠棉球肉芽腫炎癥的影響[3]選用SD大鼠，雌雄各半，體重200～220 g。每只大鼠于試驗前預先背部剃毛，面積4 cm×7 cm。腹腔注射戊巴比妥鈉40 mg·kg-1麻醉，俯臥位固定，在大鼠背部脫毛處以碘伏棉球局部消毒，切1 cm長小口，將20 mg高壓滅菌棉球滴入青霉素注射液(20萬單位·mL-1)0.2 mL后，用眼科鑷子分別從切口處植入左右腋部皮下，隨即縫合皮膚。手術后隨機分成6組，每組10只，設空白對照組(Control)，陽性對照組，喉疾靈口含片3，1.5，0.75 g生藥·kg-13個劑量組(HJLBTH,HJLBTM,HJLBTL)和喉疾靈膠囊組(HJLC，3 g生藥·kg-1)。手術當日起，連續給藥14 d，每天1次。陽性組給予甲潑尼龍(JPNL，5 mg·kg-1)，空白對照組給予等量純化水，給藥體積均為10 mL·kg-1。于末次給藥24 h后麻醉動物，打開原切口，取出棉球肉芽組織，置烘箱中70 ℃烘干，天平稱重。將稱得的重量減去棉球原重量即得肉芽腫重量作為炎癥反應指標，并計算炎癥抑制率,炎癥抑制率%=(對照組棉球增重-給藥組棉球增重)/對照組棉球增重×100 %，結果見表3。

據表3可知，與空白對照組比較，喉疾靈口含片中、高劑量組大鼠棉球肉芽腫重量明顯降低(P<0.05)；喉疾靈膠囊(3 g生藥·kg-1)顯著抑制了肉芽腫的形成(P<0.05)。上述結果表明喉疾靈口含片能夠明顯減少炎癥肉芽腫的形成，抑制慢性炎癥性增生反應。

表2 喉疾靈口含片對角叉菜所致大鼠足跖炎癥的影響

注：(1)n=10，(2)與Control比較，*P<0.05，**P<0.01.

表3 喉疾靈口含片對大鼠棉球肉芽腫炎癥的影響

注：(1)n=10，(2)與control比較，*P<0.05，**P<0.01.

2.2 喉疾靈口含片含藥血清的體外抑菌作用

2.2.1 含藥血清的制備 該項實驗及體外抑菌實驗參考了梅林等[4]報道中的方法，選用SD大鼠，雄性，體重200～220 g。隨機分成6組，每組8只，設空白對照組(Control)，喉疾靈口含片24,12,6 g生藥·kg-13個劑量組(HJLBTH、HJLBTM、HJLBTL)和喉疾靈膠囊組6 g生藥·kg-1(HJLC)；陽性藥組于試驗前日和試驗當日各腹腔注射頭孢曲松鈉(TBQSNa)200 mg·kg-1(5 mL·kg-1)1次，其他給藥組采用重復灌胃給藥方式，即每日早、晚各給藥1次，連續2 d，試驗當日再給藥1次。空白對照組給予等量的純化水。各組末次給藥后1 h，乙醚麻醉，腹主動脈取血制備含藥血清，備用。

2.2.2 體外抑菌實驗 將各細菌分別在營養肉湯培養基、改良馬丁培養基中培養18～24 h，通過比濁法，用無菌純化水將金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌菌液調整濃度為l×106CFU·mL-1、白色念珠菌菌液調整濃度為l×105CFU·mL-1，用無菌棉簽蘸取上述菌液分別均勻涂布于瓊脂平板表面。

將各組動物的含藥血清滴加于無菌濾紙片(直徑8 mm)上，每片50 μL，分別將充分浸潤含藥血清的濾紙片均勻放置在涂有不同菌的瓊脂平板上，置37 ℃培養24 h，測量抑菌圈直徑，結果見表4。

表4 喉疾靈口含片大鼠含藥血清對不同菌株的抑菌作用

注：(1)n=8，(2)與Control比較，*P<0.05，**P<0.01.

據表4可知，與Control組比較，喉疾靈口含片中、高劑量組大鼠含藥血清對金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌以及白色念珠菌均有顯著的抑制作用(P<0.05或P<0.01)，其低劑量組含藥血清顯著抑制了白色念珠菌(P<0.01)；喉疾靈膠囊組(6 g生藥·kg-1)含藥血清對3種菌群均未顯示抑制作用。上述結果表明喉疾靈口含片的大鼠含藥血清具有一定的體外抑菌作用。

3 討論

對于喉疾靈膠囊，前期報道中曾有人對其原料制備工藝進行過改進[5]。我們針對喉疾靈的藥用特點，采用現代制藥技術手段對其進行了較為系統的二次研發，在原有基礎上改進了原料制備工藝，改變了原有劑型，提高了部分指標成分的質控水平，使該品種質量及可控性有了一定的提升，同時新劑型更加符合現代藥劑學理論，服用方便，起效迅速。

通過文獻檢索我們發現，盡管喉疾靈膠囊對于多種咽喉疾病具有確切的療效，但與該品種相關的研究卻寥寥無幾，而關于其藥效機制方面的基礎研究更是少有問津。本文主要從抗炎、抑菌兩方面對喉疾靈口含片的藥效進行了初步探討。結果顯示，喉疾靈口含片對于3種動物模型炎癥反應具有較好的抑制作用。由于檢索文獻未發現喉疾靈膠囊相關藥效學方面的研究報道，對于該藥物作用強度的數據表征我們缺乏一定的基礎資料，導致相應口含片的相關情況亦不甚了解。基于此，我們在不同的實驗部分中引入了不同劑量的喉疾靈膠囊組(但未進行兩種劑型之間的統計學比較研究)，以期對其作用強度進行初步摸索，積累一定的原始資料，為后期進行口含片臨床研究，摸索適合的臨床用量提供適當的參考。

[1] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M].第三版.北京：人民衛生出版社，2002：1860-1861，911.

[2] 陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京：人民衛生出版社，1993：302.

[3] 吳在德，吳肇漢.外科學[M].北京：人民衛生出版社，2004：683-684.

[4] 梅林，賀錫中，熊云，等.中藥黃芩的血清抑菌活性試驗研究[J].醫學研究雜志，2009，38(1)：102-103，85.

[5] 蒙雙鵬，謝琳，郭鐘慧，等.喉疾靈膠囊處方工藝研究[J].中藥材，2007，30(10)：1317-1319.

ExperimentalStudyontheAnti-inflammatoryandAntibacterialEffectsofHoujilingBuccalTablet

ZHAO Yong-liang，WANG Chao，HAN Ya-peng，LIU Jing-bin，LIU Hong-ling，XIE Yin-zhi，CHENG Peng，LI Jian-hui

(InstituteofMateriaMedica,TianjinMeilunPharmaceuticalGroupInc,Tianjin300400,China)

Objective: To study the anti-inflammatory and antibacterial effects of Houjiling buccal tablet(HJLBT)by experiments.Methods： Three inflammatory models including the swelling of ear induced by xylene in mice， carrageenan-induced foot acute inflammatory edema in rat， and the cotton-pellet granuloma of the rat were employed to evaluate the anti-inflammatory effects of the drug.Additionally，the model of bacteriostasis in vitro by the serum with drug was used to examine the antibacterial activities of HJLBT.Results： Compared with control group，HJLBT strongly inhibits swelling of ear in mice(P<0.05 orP<0.01)，foot acute inflammatory edema in rat and the cotton-pellet granuloma in rat(P<0.05). The serum with HJLBT has significant inhibitedStaphylococcusaureus，PseudomonasaeruginosaandCandidaalbicans(P<0.05 orP<0.01).Conclusion： All results indicate that HJLBT exerts significantly inhibitory action against inflammation caused by chemical agents， and the serum with HJLBT also has strong antibacterial activity.

Houjiling buccal tablet；Capsule；Anti-inflammation；Bacteriostasis

天津市科技創新專項基金項目(08FDZDSH01407)

*王超，Email：duwu565984@126.com

2010-09-20)