黃連與甲氧芐啶聯合體外抗菌作用的實驗研究

牛美蘭(通訊作者) 張偉 何雄文

(1.河南黃河科技學院醫學院; 2.河南省中醫藥研究院附屬醫院外科 鄭州 450063)

黃連具有清熱燥濕,瀉火解毒之功效[1]。黃連還具有對抗細菌毒素,降低金黃色葡萄球菌凝固酶、溶血素效價,降低大腸桿菌的毒力的解毒作用。現代藥理研究表明：黃連具有廣譜抗菌作用,對多種細菌、結核桿菌及真菌等有抑制或殺滅作用,是目前臨床應用較為廣泛的抗菌中藥之一。甲氧芐啶(TMP)別名磺胺增效劑,本品為白色或類白色結晶性粉末,無臭,味苦。本品在氯仿中略溶,在乙醇或丙酮中微溶,在水中幾乎不溶;在冰醋酸中易溶。TMP是合成抗菌藥,抗菌譜與磺胺藥類似,有抑制二氫葉酸還原酶的作用,但細菌較易產生耐藥性,很少單獨使用。磺胺藥則抑制二氫葉酸合成酶。其抗菌作用較弱,一般不單獨使用。但甲氧芐啶是強大的細菌二氫葉酸還原酶抑制劑[2]。臨床上TMP常與SMZ合用治療呼吸系統、泌尿系統、消化等部位的感染[3]。本組實驗采用瓊脂稀釋法對比研究黃連、TMP及黃連與TMP聯用的體外抗菌作用。

表1 各供試液抗菌作用結果(試管號)

1 材料

1.1 藥品及配制

(1)取干燥黃連生藥(購于河南中醫學院第一附屬醫院中藥房)10g,常規煎煮成50mL藥液。取10mL加入無菌普通肉湯培養基10mL,搖勻即得200mg/mL的黃連供試藥液。

(2)TMP購自焦作市醫藥原料貿易有限公司,質量標準：CP2005/BP2002/USP26/EP4。稱取50mg TMP置于試管中,加入10mL肉湯微熱溶解、搖勻,得5mg/mL的TMP藥液供實驗備用。

(3)取上述黃連煎劑10mL,加入100mg TMP及10mL肉湯培養基,微熱溶解后搖勻得含黃連與TMP分別為200mg/mL、5mg/mL的復方供試藥液。

1.2 實驗中所用菌種,如綠膿桿菌、金葡萄菌、福氏痢疾桿菌、大腸桿菌、肺炎球菌均采用中央標準株(購于中國藥品生物制品檢定所)。分別取上述菌株的普通瓊脂平板24h培養物,用無菌生理鹽水將菌液濃度調整為1cfu/mL×108cfu/mL,備用。

2 方法

采用試管內藥液稀釋法試驗：無菌試管3排,每排15管,除每排的第14管外,其余各管中均加入5mL的無菌肉湯,在每排試管的第1管分別加入5mL上述3種供試藥液;混勻后吸取5mL加入到第2個試管中,照此類推第13個試管;混合搖勻后吸出5mL藥液加入到第14管中。取每排的第14管作無菌陰性對照;第15管作無藥陽性對照。然后在各管中加5mL熱無菌肉蛋白胨瓊脂,搖勻趁熱依次傾入到同一型號的無菌培養皿中,放置使瓊脂冷凝。將其余1～15號培養皿分別劃分為5分近等的區域并分別進行編號(14培養皿除外),然后在每個區域中分別加入5種經10h培養的各含菌培養液0.03mL,在37℃的環境下培養18～24h,觀察細菌培養結果,其判定指標是有無細菌的生長。接種區光滑無可見菌落表明具有抗菌作用;接種區可見大片細菌生長則表明吳抗菌作用。

3 結果

黃連、TMP及黃連和TMP復方液對5種細菌的抗菌作用,見表1。

4 討論

體外試驗證明,黃連對溶血性鏈球菌、腦膜炎球菌、肺炎雙球菌、霍亂弧菌、炭疽桿菌、痢疾桿菌、白喉桿菌、枯草桿菌等均有抑制作用。本組實驗表明：對于金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、福氏痢疾桿菌和肺炎雙球菌,聯合運用黃連與TMP后較單用黃連或但用TMP抗菌作用明顯增大,黃連聯合TMP后,對實驗的5種細菌抗菌活性均明顯增強,表明說明黃連與TMP聯合運用用具有明顯抗菌作用。

[1] 凌一揆.中藥學[M].上海：上海科技出版社,2008：553.

[2] 顏光美.藥理學[M].北京：高等教育出版社,2009：432.

[3] 王開貞.藥理學[M].北京：人民衛生出版社,2010：257.