低魚粉飼料中補(bǔ)充晶體、微囊氨基酸對異育銀鯽的作用效果

宋宏斌 蔣春琴 譚北平 申玉春 冷向軍

近年來，魚粉等動(dòng)物性蛋白源供應(yīng)緊張，價(jià)格高漲，使得餅粕類等植物性蛋白源在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用比例不斷增加。相對于魚粉，植物蛋白源通常表現(xiàn)為某些限制性氨基酸含量較低，尤其是賴氨酸和蛋氨酸[1]，因此，在飼料中補(bǔ)充這些限制性氨基酸成為提高其營養(yǎng)價(jià)值的重要途徑。但魚的種類不同，飼料中添加晶體氨基酸的效果也存在著差異，在草魚(Ctenopharyngodon ide lla)[2]、異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)[3]、鯉(Cyprinus carpio)[4]和凡納濱對蝦(Litopen-aeus vannamei)[5]等的飼料中添加晶體賴氨酸或(和)蛋氨酸，未能改善魚體生長性能。晶體氨基酸的利用效果不佳，其主要原因是其水中溶失高[6-7]和與飼料蛋白質(zhì)中的氨基酸吸收不同步問題[8-9]，一般可將晶體氨基酸包膜和微膠囊化處理，減緩氨基酸的釋放速率來提高氨基酸利用率[10]。

本試驗(yàn)以異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)為研究對象，在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上，降低魚粉用量，增加菜粕與棉粕用量，同時(shí)在飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸——賴氨酸和蛋氨酸的晶體或微囊形式來考察對魚體生長、肌肉成分、血清總游離氨基酸的影響，為氨基酸在水產(chǎn)飼料中的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼料

高魚粉對照組的魚粉含量10%，在此基礎(chǔ)上降低魚粉含量5%，相應(yīng)增加菜粕、棉粕含量，得低魚粉對照組；在低魚粉對照組的基礎(chǔ)上，補(bǔ)充微囊氨基酸，使賴氨酸和蛋氨酸水平與高魚粉組基本一致，同時(shí)設(shè)置晶體氨基酸組，晶體賴氨酸、蛋氨酸添加量為微囊氨基酸組2倍，各組蛋白水平保持一致。飼料原料過40目篩，逐級混勻后經(jīng)制粒機(jī)加工成直徑1 mm顆粒，晾干備用。試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)成分見表1。

氨基酸產(chǎn)品由佛山市海納川藥業(yè)有限公司提供，晶體賴氨酸為Lys-HCl，賴氨酸有效含量為78%，DL-蛋氨酸有效含量為98%；微囊賴氨酸中賴氨酸有效含量為39%，蛋氨酸有效含量為49%。

1.2 試驗(yàn)用魚

試驗(yàn)選取規(guī)格一致，平均體重為(31.68±0.01)g的異育銀鯽共360尾，隨機(jī)分配于12個(gè)長方形水泥池中（3.0 m×2.5 m×1.2 m，水深0.6 m），每池30尾，共設(shè) 4個(gè)處理組，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗(yàn)在上海海洋大學(xué)南匯特種養(yǎng)殖場進(jìn)行，試驗(yàn)前對異育銀鯽進(jìn)行為期1周馴化，待魚攝食正常后開始正式試驗(yàn)，按魚體體重的2%～4%確定投飼量，根據(jù)水溫、天氣、攝食情況調(diào)整，各組保持一致投喂量，每日投喂 3 次（8：30，12：30，16：30）。晝夜充氣，定期換水，飼養(yǎng)試驗(yàn)期間水溫 22～32 ℃、DO 6.5～8.3 mg/l、pH值6.9～7.8，飼養(yǎng)時(shí)間為8周。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)成分含量(%)

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長性能指標(biāo)

增重率(WGR，%)=(末均重-初均重)(g)/初均重(g)×100；

飼料系數(shù)(FCR)=攝食量(g)/(末均重-初均重)(g)；

特定生長率(SGR，%)=[ln末均重(g)-ln初均重(g)]/飼養(yǎng)天數(shù)(d)×100；

成活率(SR，%)=成活尾數(shù)/總尾數(shù)×100。

1.4.2 肌肉成分分析

粗水分采用105℃恒重法（GB/T6435—86）；粗灰分采用550℃灰化法（GB/T 6438—92）；粗蛋白采用凱氏定氮法（GB/T 6432—94）；粗脂肪采用氯仿-甲醇抽提法。

1.4.3 血清總游離氨基酸

采樣時(shí)分別對投喂 0、1、2、3、4、5 h 后每池每時(shí)間段取異育銀鯽4尾，進(jìn)行尾靜脈取血，血樣置于1.5 ml離心管中6 000 r/min離心5 min后，取上清液即血清，于-20℃冰箱保存待測。采用總氨基酸（T-AA）測試盒（購于南京建成生物工程研究所）測定血清總游離氨基酸的含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)結(jié)果表示為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，數(shù)據(jù)采用SPSS(Version 16.0)統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，差異顯著水平為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中補(bǔ)充晶體和微囊氨基酸對異育銀鯽生長性能的影響

經(jīng)過8周飼養(yǎng)，飼料中補(bǔ)充晶體和微囊氨基酸對異育銀鯽生長性能的影響見表2。由表2可見，高魚粉組異育銀鯽的增重率最高，飼料系數(shù)最低，而低魚粉組的異育銀鯽生長性能最差。相對于低魚粉組，晶體AA組的異育銀鯽生長性能在數(shù)值上有所提高，但未達(dá)顯著水平（P＞0.05）；微囊AA組的增重率提高12.1%，餌料系數(shù)下降11.2%（P＜0.05），生長性能與高魚粉組無顯著差異（P＞0.05）。

表2 添加晶體和微囊氨基酸對異育銀鯽生長性能的影響

2.2 飼料中補(bǔ)充晶體和微囊氨基酸對異育銀鯽肌肉成分的影響(見表3)

表3 添加晶體和微囊氨基酸對異育銀鯽肌肉成分的影響(%)

由表3可見，各組異育銀鯽肌肉的水分、粗灰分、粗蛋白和粗脂肪含量均無顯著差異（P＞0.05）。

2.3 異育銀鯽攝食各組飼料后不同時(shí)間段血清游離氨基酸含量的變化

異育銀鯽攝食各組飼料后不同時(shí)間段血清游離氨基酸含量的變化見表4。由表4可見，高魚粉組、低魚粉組和微囊氨基酸組的血清游離氨基酸含量變化的趨勢一致，即攝食后隨時(shí)間增加而增加，在3 h時(shí)達(dá)到吸收高峰，其后下降；添加晶體AA組的血清游離氨基酸水平的峰值高于其他組（P＜0.05），高峰出現(xiàn)時(shí)間提前到2 h。

3 討論

表4 攝食各組飼料后不同時(shí)間段血清總游離氨基酸含量的變化(μmol/ml)

魚類對晶體氨基酸的利用能力依種類不同而呈現(xiàn)很大差異。一般認(rèn)為鮭鱒魚類能有效利用晶體氨基酸[12-13]，而無胃鯉科魚類對晶體氨基酸的利用能力較差。Violas[14]在鯉魚及劉永堅(jiān)等[2]在草魚飼料中添加晶體賴氨酸，冷向軍等[15]在異育銀鯽飼料中添加晶體賴氨酸、蛋氨酸，均發(fā)現(xiàn)對魚類生長無明顯改進(jìn)效果。本次試驗(yàn)在魚粉用量5%的低魚粉組飼料基礎(chǔ)上，補(bǔ)充2倍晶體賴氨酸、蛋氨酸后，盡管飼料賴氨酸、蛋氨酸水平已經(jīng)超過了高魚粉組，但其增重率和特定生長率只是在數(shù)值上有提高，并未達(dá)到顯著水平。進(jìn)一步提高晶體氨基酸的添加水平，是否會(huì)產(chǎn)生作用效果，有待于今后進(jìn)一步研究。

氨基酸吸收不同步是影響晶體氨基酸利用的主要因素，晶體氨基酸吸收快，無法與飼料蛋白態(tài)氨基酸同步吸收，而氨基酸合成蛋白質(zhì)必須按一定比例進(jìn)行，且水生動(dòng)物貯存游離氨基酸的能力較低，導(dǎo)致先吸收的晶體氨基酸不能用于合成蛋白質(zhì)而直接排泄或代謝，因而血液游離氨基酸高峰值提前[16-17]。本試驗(yàn)中，攝食晶體氨基酸魚體血清的總游離氨基酸的吸收峰值較其他組提前1 h，這與草魚補(bǔ)充晶體氨基酸后總游離氨基酸的變化趨勢相似[18]。

為解決晶體氨基酸吸收過快而產(chǎn)生的與蛋白態(tài)氨基酸吸收不同步問題，可對氨基酸進(jìn)行包膜或微囊化處理。在魚粉含量5%的鯉魚飼料中以微囊形式補(bǔ)充賴氨酸、蛋氨酸0.14%、0.04%(均指有效含量)，提高了魚體增重率10.1%，降低了餌料系數(shù)10.7%[11]；在草魚飼料中添加0.3%、0.6%晶體賴氨酸，其生長性能改善不明顯，而添加0.15%、0.30%微囊賴氨酸，其增重率顯著提高[19]；在斑節(jié)對蝦飼料中添加包膜精氨酸，其增重率是添加晶體精氨酸組的2倍[20]。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)在低魚粉飼料中補(bǔ)充微囊AA后，魚體生長性能顯著提高，同時(shí)，其血清總游離氨基酸的變化趨勢與高魚粉組和低魚粉組一致，均在3 h時(shí)達(dá)到吸收高峰，較晶體AA組的血清總游離氨基酸峰值延遲了1 h，進(jìn)一步證實(shí)了氨基酸經(jīng)微囊處理后，延緩了其在腸道內(nèi)釋放速度，有利于解決外源性氨基酸與蛋白態(tài)氨基酸吸收不同步的矛盾，提高了利用率。

[1]Small B C,Soares J H.Quantitative dietary lysine requirement of juvenile striped bass Morone saxatilis[J].Aquacult Nutr.,2000,6:207-212.

[2]劉永堅(jiān),田麗霞,劉棟輝,等.實(shí)用飼料補(bǔ)充結(jié)晶或包膜賴氨酸對草魚生長、血清游離氨基酸和肌肉蛋白質(zhì)合成率的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2002,26(3):252-258.

[3]王愛民,李朝霞,呂林蘭,等.氨基酸平衡模式在異育銀鯽飼糧中的應(yīng)用研究[J].飼料工業(yè),2006,27(16):24-27.

[4]陳丙愛,冷向軍,李小勤,等.晶體或包膜氨基酸對鯉魚的作用效果研究[J].水生生物學(xué)報(bào),2008,32(5):774-778.

[5]Huai M Y,Liu Y J,Tian L X,et al.Effect of dietary protein reduction with synthetic amino acids supplementation on growth performance,digestibility,and body composition of juvenile pacific white shrimp,Litopenaeus vannamei[J].Aquaculture International,2009:1-15.

[6]Wilson R P,Poe W E,Robinsin E H.Leucine,isoleucine,valine and histidine requirements of fingerling channel catfish[J].J Nutr.,1980:110-627.

[7]劉永堅(jiān),劉棟輝,田麗霞,等.草魚飼料中結(jié)晶和包膜賴氨酸的生物效應(yīng)[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),1999,23(11):51-56.

[8]Mura I T,Ogata H,H Irasawa Y,et al.Portal absorption and hepatic uptake of amino acids in rainbow trout force-fed complete diets containi ng case in or crystalline amino acids[J].Nippon Suisan Gakkaishi,1987,53:1847-1859.

[9]Cowey C B,Walton M J.Studies on the uptake of(14C)amino acids derived from both dietary (14C)protein and dietary(14C)amino acids by rainbow trout,Salmo gairdneri Rich [J].J Fish Bio.,1988,33:293-305.

[10]Dela H M,Garz ON A,Hdalgo M C,et al.Influence of temperature and dietary-protein supplementation either with free of coated lysine on the fractional protein turnover rates in the white muscle of carp[J].Fish Physiology Biochemistry,1998,18:85-95.

[11]冷向軍,羅運(yùn)仙,李小勤,等.飼料中補(bǔ)充晶體或微囊氨基酸對鯉魚生長性能的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2010,22(6):1599-1606

[12]Cheng Z J,RonaildW H,James L U.Effect of lysine supplementation in plant protein-based diets on the performance of rainbow trout and apparent digestibility coefficients of nutrients[J].Aquaculture,2003,215:255-265.

[13]Williams K,Barlow C,Rodgers L.Efficacy of crystalline and protein-bound amino acids for amino acid enrichment of diets for barram undi/Asian seabass[J].Aquaculture Research,2001,1:415-429.

[14]Violas S,Mokad Y,Arieli Y S.Effect of soybean proceeding methods on growth of carp[J].Aquaculture,1983,32:27-38.

[15]冷向軍,王冠,李小勤,等.飼料中添加晶體或包膜氨基酸對異育銀鯽生長和血清游離氨基酸水平的影響 [J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2007,31(6):743-748.

[16]Yamada S,Simpson K L,Tanaka Y,et al.Plasma amino acid changes in rainbow trout Salmo gairdneri force-fed casein and acorresponding amino acid mixture[J].Bull Jap Soc Sci Fish,1981,47:1035-1040.

[17]Zarate D D,Lovell R T.Free lysine (L-lysine·HCl)is utilized for growth less efficiently than protein-bound lysine(soybean meal)in practical diets by young channel catfish(Ictalurus punctatus)[J].Aquaculture,1997,159(1-2):87-100.

[18]羅運(yùn)仙,謝駿,呂利群,等.飼料中補(bǔ)充晶體或微囊賴氨酸對草魚生長和血漿總游離氨基酸的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2010,34(3):466-473.

[19]鄭宗林,宋宏斌,李洪琴,等.不同緩釋處理氨基酸在草魚魚種飼料中的利用效率研究[J].糧食與飼料工業(yè),2009,6:42-45.

[20]Chen H Y,Leu Y T,Toelants I.Effective supplementation of arginine in the diets of juvenile marine shrimp,Penaeus monodon[J].Aquaculture,1992,108:87-95.