玫參膠囊對小鼠神經系統影響的實驗研究

王彩霞，程衛東 ，李 健 ，楊 萍

（1.甘肅省衛生學校，甘肅 蘭州 730000；2.蘭州大學中西醫結合研究所，甘肅 蘭州 730000；3.北京中醫藥大學，北京 100029）

婦女在絕經前后，由于卵巢功能衰退，雌激素水平明顯下降，導致下丘腦-垂體-性腺軸功能失調，引起心血管、神經、內分泌系統功能紊亂，導致功能性子宮出血、陣發性潮熱和出汗、外陰及陰道萎縮、骨質疏松及失眠、記憶力明顯下降、情緒反常等精神和神經系統癥狀，即為圍絕經期綜合征。目前該病發生率上升，發病年齡提前，嚴重影響了婦女生活質量。激素替代治療雖然有效，但因副作用而受到限制，中醫藥以安全有效備受青睞。本研究選用BALB/C小鼠作為動物模型，以觀察純中藥制劑玫參膠囊對BALB/C小鼠神經系統的影響，揭示其治療圍絕經期綜合征的機理，為臨床應用及新藥開發提供藥理學依據。

1 材料

1.1 藥物

玫參膠囊：由玫瑰花、西洋參、熟地、白芍、女貞子、枸杞子、生牡蠣、決明子、酸棗仁、蓮子心、遠志等中藥組成，并按一定工藝制成膠囊，由北京中醫藥大學基礎醫學院方藥系制備。用蒸餾水制成水劑，低、中、高劑量分別為2.15 g/kg、4.30 g/kg、8.60 g/kg。更年欣膠囊：通化方大藥業股份有限公司生產，批號：050401，用蒸餾水制成水劑，給藥劑量為0.73 g/kg。

1.2 動物

6周齡 BALB/C小鼠，雌性，體重（20 ±2）g；12月齡 BALB/C小鼠，雌性，體重（30 ±2）g。均由北京維通利華實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXB（京）：2004-0003。

1.3 主要試劑與儀器

戊巴比妥鈉：廣州南方化玻公司進口分裝，批號：961030。氫溴化東莨菪堿注射液：廣州明興制藥廠生產，批號：040701。膽堿酯酶（AchE）試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號：20051029。超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號：20051108。丙二醛（MDA）試劑盒：購自南京建成生物工程研究所，批號：20051103。T-D-L-5A型離心機：上海安亭科學儀器廠。

2 方法

2.1 對小鼠自主活動及睡眠時間影響的檢測

6周齡BALB/C小鼠90只，隨機分為6組：玫參膠囊低、中、高劑量組，更年欣膠囊組，正常對照組及模型對照組，每組15只。玫參膠囊低、中、高劑量組及更年欣膠囊組分別以相應劑量藥物灌胃，正常對照組和模型對照組以等量蒸餾水灌胃，各組小鼠每天灌胃1次，連續給藥30 d，末次給藥后1 h，將小鼠置于自主活動測定儀中，適應5 min 后，記錄小鼠10 min 內的活動次數;休息10 min 后，除正常對照組小鼠腹腔注射1 ml 蒸餾水外，其余各組小鼠腹腔注射閾劑量戊巴比妥鈉50 mg/kg，以翻正反射消失為入睡時間，從翻正反射消失至恢復時間為睡眠持續時間。

2.2 對小鼠記憶功能影響的檢測

6周齡BALB/C小鼠90只，隨機分為6組：玫參膠囊低、中、高劑量組，更年欣膠囊組，正常對照組及模型對照組，每組15只。給藥方法同前，末次給藥后1 h，進行Y型電迷宮測試，每鼠測試15次，記錄各組小鼠正確反應次數。次日進行造模[1]，記憶獲得障礙模型制造：腹腔注射東莨菪堿5 mg/kg；記憶鞏固障礙模型制造：皮下注射亞硝酸鈉120 mg/kg；記憶再現障礙模型制造：30%乙醇10 ml/kg 灌胃；正常對照組用等量生理鹽水代替造模藥。造模后1 h，再進行測試，方法同前。

2.3 對老齡小鼠腦組織生化指標的檢測[2]

12月齡BALB/C小鼠75只，隨機分為5組，玫參膠囊低、中、高劑量組，更年欣膠囊組及模型對照組，每組15只；6周齡BALB/C小鼠15只為正常對照組，各組給藥方法同前，末次給藥后1 h，將各組小鼠分別斷頭，冰盤上快速剖取全腦，棄去嗅球及小腦，其余大腦用冰生理鹽水沖洗血液，再用濾紙拭干，電子天平稱重后加入9倍冷生理鹽水，在玻璃勻漿器中研磨成10%勻漿，4℃、3600 r/min 離心 5 min，提取上清液，-20℃凍存。按試劑盒要求測定腦組織中SOD、MDA 及AchE 含量。

2.4 統計學方法

應用 SPSS 13.0 軟件包，各指標均以（x ±s）表示，組間比較采用方差分析。

3 結果

3.1 對小鼠自主活動及睡眠時間的影響（見表1）

表1 各組小鼠自主活動及睡眠時間變化（±s）

表1 各組小鼠自主活動及睡眠時間變化（±s）

注：與正常對照組比較，▲▲ P＜0.01；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 自主活動次數 睡眠時間（min）正常對照組模型對照組玫參膠囊低劑量組玫參膠囊中劑量組玫參膠囊高劑量組更年欣膠囊組487.9 ±75.7488.1 ±74.2352.2 ±61.6*346.1 ±69.3*211.8 ±54.5**349.6 ±70.8*72.6 ±19.248.9 ±14.2▲▲85.7 ±18.7*128.4 ±25.0**143.1 ±24.7**141.9 ±22.5**

由表1可見，與正常對照組比較，模型對照組小鼠的自主活動次數無顯著性差異；睡眠時間明顯延長，有顯著性差異（P＜0.01）。與模型對照組比較，玫參膠囊各劑量組及更年欣膠囊組小鼠自主活動次數均減少，睡眠時間延長，有顯著性差異（P＜0.05 或P＜0.01）。

3.2 對小鼠記憶功能的影響（見表2）

表2 各組小鼠正確反應次數變化（±s，n=15）

表2 各組小鼠正確反應次數變化（±s，n=15）

注：與正常對照組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與模型對照組比較，*P ＜0.05，**P ＜0.01

組別 造模前 東莨菪堿造模 亞硝酸鈉造模 乙醇造模正常對照組模型對照組玫參膠囊低劑量組玫參膠囊中劑量組玫參膠囊高劑量組更年欣膠囊組9.2 ±2.29.3 ±2.49.3 ±1.99.6 ±2.49.7 ±2.09.3 ±1.79.3 ±2.15.4 ±1.9▲9.1 ±1.6*10.4 ±1.5*11.6 ±2.0*9.2 ±2.5*9.2 ±2.15.9 ±1.2▲10.4 ±2.7*12.8 ±2.5*13.9 ±2.1*9.2 ±1.7*9.2 ±2.36.7 ±1.6▲▲9.8 ±1.9*11.3 ±2.5*12.4 ±2.1**9.8 ±1.7**

由表2可見，造模前的Y型迷宮測試，各組小鼠正確反應次數無顯著性差異。造模后，與正常對照組比較，模型對照組Y型迷宮測試小鼠正確反應次數明顯減少；與模型對照組比較，玫參膠囊各劑量組及更年欣膠囊組小鼠正確反應次數均有所增加，有顯著性差異（P＜0.05 或 P＜ 0.01）。

3.3 對小鼠腦組織生化指標影響（見表3）

表3 各組小鼠腦組織生化指標變化（±s，n=15）

表3 各組小鼠腦組織生化指標變化（±s，n=15）

注：與正常對照組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別SOD（U/m gprot）MDA（nmol/m gprot）AchE（U/m gprot）正常對照組模型對照組玫參膠囊低劑量組玫參膠囊中劑量組玫參膠囊高劑量組更年欣膠囊組13.80 ±2.535.60 ±0.53▲▲8.68 ±3.05*12.15 ±3.16**13.77 ±3.02**9.54 ±4.13*1.32 ±0.120.52 ±0.12▲▲1.06 ±0.19*1.18 ±0.24*1.31 ±0.28*1.29 ±0.31*0.51 ±0.070.21 ±0.12▲0.26 ±0.130.44 ±0.12**0.58 ±0.14**0.24 ±0.08

由表3可見，與正常對照組比較，模型對照組小鼠腦組織中SOD、MDA、AchE 含量均降低，有顯著性差異（P＜0.05 或P＜0.01）。與模型對照組比較，玫參膠囊各劑量組及更年欣膠囊組小鼠腦組織中SOD、MDA、AchE 含量均增加，有顯著性差異（P＜0.05 或 P ＜0.01）。

4 討論

中醫認為，腎藏精化血主生殖，既為生殖之本，又是臟腑生理活動的先天之本。婦女絕經期前后，腎氣漸衰，天葵將絕，沖任虧虛，精血不足，五臟失卻滋養與濡潤，陰精虧虛不能制約浮陽，致心腎不交，故治宜滋水清肝，交通心腎。更年欣膠囊治療心腎不交型絕經前后諸證臨床療效滿意[3]，另有報道補腎活血方可改善缺血再灌注腦損傷小鼠學習記憶功能[4]。而玫參膠囊中西洋參、熟地、枸杞子、女貞子滋陰補腎；玫瑰花、白芍、決明子清肝解郁；遠志、蓮子心、酸棗仁寧心安神、交通心腎，眾藥合用，達標本兼治之功效。本實驗結果表明，與模型對照組相比，玫參膠囊各劑量組小鼠自主活動次數減少，戊巴比妥鈉誘導的睡眠時間延長，提示玫參膠囊具有鎮靜作用，可以協同戊巴比妥鈉的作用；玫參膠囊能增加記憶功能障礙小鼠的正確反應次數，對3種類型的記憶功能障礙均有效，對記憶再現障礙及記憶鞏固障礙模型療效顯著，其高劑量組有顯著性差異（P＜0.01）；玫參膠囊能增加老齡小鼠腦組織MDA 含量、SOD 活性、AchE活性，顯示玫參膠囊對膽堿能神經系統及神經細胞有顯著保護作用。以上研究結果提示，玫參膠囊可治療圍絕經期綜合征，對神經系統功能紊亂有良好的調節作用，從而發揮其臨床藥理作用。

[1]中華人民共和國衛生部.保健食品檢測與評價技術規范[Z].2003.

[2]Dunbar G L，Rylett R J，Schnidt B M，et al.Hippcampal choline activity correlates with spatial learning in aged rats[J].Brain Res，2008（604）：267～272.

[3]周穎瑜，陳冠林，許仕杰.周福生教授辨治更年期綜合征經驗介紹[J].新中醫，2007，39（8）：12～13.

[4]田國慶，郭賽珊，盧賀起.補腎活血方對缺血再灌注腦損傷小鼠學習記憶功能及海馬神經細胞凋亡的影響[J].中國中西醫結合雜志，2003，23（2）:123～127.