應用原位雜交技術檢測宮頸上皮內瘤變的臨床研究

歐 勇 李雪蘭 韶 峰 丁 矢

（1 湖南省常德職業技術學院醫學系病理學教研室，湖南 常德 415000；2 湖南省常德職業技術學院病理診斷中心，湖南 常德 415000）

人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染引起宮頸上皮內瘤變和宮頸癌已成為公認的事實。在臨床實踐過程中，如何能夠有效準確的發現并檢測HPV感染是做好HPV感染的發現、預防、早期治療的關鍵。本文對本院病理診斷中心確診為CIN的171例患者作回顧性的研究，探討應用原位雜交技術在檢測HPV上的效果。

1 材料與方法

1.1 材料收集

收集本院病理診斷中心活檢標本。依診斷標準診斷為宮頸CIN的標本171例。患者均為女性，年齡為20～54歲。其中CINⅠ標本82例，CINⅡ標本46例、CINⅢ標本43例。

1.2 方法

診斷所采用的HPV DNA檢測探針（HPV6/11、HPV16/18型探針）和試劑盒均購自福建泰普生物科學有限公司，這兩種探針經實驗證實具有不被體內抗體識別且敏感性高的優點。檢測步驟：將診斷為宮頸CIN患者在異常轉換區或可疑病變區多點活檢取材，取出的病理組織固定于多聚甲醛溶液中。固定的組織用石蠟包埋后切片。用二甲苯脫蠟后，逐次以不同濃度的乙醇梯度脫水，并至于空氣中自然干燥，再用烤片機預熱。再于暗室將檢材加至HPV6/11（低危型）、16/18（高危型）探針濕盒中37℃過夜。加一、二抗、滴加HRP聚合物、DAB顯色、蘇木素復染核、封片。隨機選擇每張切片5個高倍視野，尋找腫瘤細胞核（陽性表達顯棕色），記錄切片中陽性細胞占視野內細胞總數的百分比及陽性細胞著色強度。

1.3 陽性表達診斷標準

①根據每張切片5個高倍視野下陽性細胞占視野內細胞總數百分比的平均值（A）進行評分（a）：A≤5%，a=0；A為6%～15%，a=1；A為16%～30%，a=2；A＞30%，a=3。②根據陽性細胞顯色程度進行評分（b）：無色0分；黃褐色1分；金色2分；棕色3分。③所得結果（c）c=a×b，c值為0時判定為陰性，c≥1時判定為陽性表達。

1.4 統計學處理

所有數據處理均以SPSS11.0統計軟件進行，以P＜0.05作為差異有顯著性。其中，計量資料采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1 CINⅠ中HPV檢測結果

CINⅠ中 HPV6/11陽性表達率（42.7%）高于HPV16/18陽性表達率（18.3%），差異具有統計學意義（P＜0.05）。具體見表1。

表1 CINⅠ中HPV檢測結果

2.2 CINⅡ中HPV檢測結果

CINⅡ中HPV16/18陽性表達率（39.1%）明顯高于HPV6/11陽性表達率（26.1%），其差異具有統計學意義（P＜0.05）。具體見表2。

表2 CINⅡ中HPV檢測結果

2.3 CINⅢ中HPV檢測結果

CINⅢ中HPV16/18陽性表達率（58.1%）高于HPV6/11陽性表達率（28.0%），其結果具有統計學意義（P＜0.05）。具體見表3。

表3 CINⅢ中HPV檢測結果

2.4 HPV感染及高峰年齡趨勢

三個年齡組中，HPV6/l1陽性率對比結果均無顯著差異（P＞0.05）。HPV16/18陽性率隨年齡增長而增加。31～40歲組HPV16/18陽性率（35.8%）高于20～30歲（9.4%），其中P＜0.05。41～54歲組HPV16/18陽性率（54.9%）高于31～40歲組（35.8%），其中P＜0.01。具體見表4。

表4 各年齡段HPV表達及高峰年齡比較

3 討 論

HPV病毒屬于乳頭多瘤空泡病毒科，是一種環狀雙鏈DNA病毒，長約8kb，它能特異感染人皮膚和黏膜。按照致病力強弱，可將HPV分為高危型和低危型兩種。其中，高危型HPV16型和18型易導致高度子宮頸上皮內瘤變和宮頸癌的發生。從表1～表3數據可知，CIN三型中HPV6/11及HPV16/18的陽性率并不相同。在CINⅠ中，HPV6/11陽性表達率（42.7%）高于HPV16/18陽性表達率（18.3%）（P＜0.05），顯示CINⅠ以HPV6/11感染多見；CINⅡ中HPV16/18陽性表達率（39.1%）明顯高于HPV6/11陽性表達率（26.1%）（P＜0.05），CINⅢ中HPV16/18陽性表達率（58.1%）高于HPV6/11陽性表達率（28.0%）（P＜0.05），說明在CINⅡ及CINⅢ中以HPV16/18感染多見。其中高危型 HPV感染強烈預示有CIN的存在。結果顯示HPV16/18感染與宮頸癌前病變（上皮內瘤變）有密切關系。本組CINⅠ～Ⅲ中同時出現HPV6/11和HPV16/18的比率在9.8%～21.7%，表明HPV高、低危病毒的混合性感染在CIN病變中還是較為常見的。

本組3個年齡組中，低危型（HPV6/11）的陽性率隨年齡增高而下降。但組間比較結果并不具有統計學意義（P＞0.05）。而高危型（HPV16/18）陽性率隨年齡增長而增加。31～40歲組HPV16/18陽性率（35.8%）高于20～30歲（9.4%）（P＜0.05）。41～54歲組HPV16/18陽性率（54.9%）高于31～40歲組（35.8%）（P＜0.01）。從以上資料比較顯示可知，高危型HPV16/18感染率隨年齡增加而增加。高齡婦女受HPV16/18感染概率較大。

本文采用原位雜交技術檢測HPV病毒，保持了固有形態，準確定位待測物，具有簡單，敏感性高，特異性強等優點，同時還可以降低假陰性涂片引起的風險。上皮內瘤變發展到癌癥大約需要10～15年。因此，廣泛應用原位雜交技術檢測HPV感染類疾病，可以使更多宮頸病得到確診，減少浸潤性腫瘤的發生，真正做到早期診斷、早期治療。

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