大皰性類天皰瘡中IL-5與IL-17的表達與意義

郝靜娜 郭書萍

大皰性類天皰瘡是一種獲得性自身免疫性大皰性皮膚病，其發病機制尚未清楚。本研究采用免疫組織化學技術法對大皰性類天皰瘡病例組中IL-5和IL-17細胞因子進行檢測，完善對大皰性類天皰瘡發病機制的認識，有利于大皰性類天皰瘡的治療。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2008年1月至2010年12月在我院皮膚科就診的患者，大皰性類天皰瘡病例組38例，其中男18例，女20例，年齡60～82歲，平均73.4歲;對照組20例均是來自我院整形科和普外科的正常人，其中男12例，女9例，年齡58～76歲，平均66.5歲，無任何皮膚病及系統性疾病。

1.2主要試劑 兔抗人白介素5(IL-5)多克隆抗體、兔抗人白介素17(IL-17)多克隆抗體、多聚體抗兔IGG-HRP二抗試劑盒均由武漢博士德公司提供。

1.3方法 ①切片脫蠟至水。②3%H2O2室溫10 min以滅活內源性酶。蒸餾水洗2 min 3次。③對抗原進行枸櫞酸鈉熱修復。④滴加封閉液，室溫放置10 min。甩去多余的液體，不洗。⑤滴加一抗，37℃孵育2 h。⑥滴加聚合HRP標記抗兔IgG，37℃孵育30 min，PBS沖洗5 min 3次。⑦DAB顯色，蘇木素復染，乙醇脫水，二甲苯透明，封片。

1.4結果判定 IL-5免疫組織化學結果以細胞漿有棕黃色顆粒為陽性，IL-17免疫組織化學結果以細胞漿和(或)細胞核有棕黃色顆粒為陽性，每張切片隨機選取5個視野，利用MIAS-2000圖像分析系統分析陽性區域積分光密度值(IOD值)，以IOD值的大小代表陽性產物表達的多少。

1.5統計學方法 兩組間比較采用t檢驗，兩指標間相關性采用Pearson相關分析。所有統計學資料采用 SPSS 13．0統計軟件分析，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

大皰性類天皰瘡皮損中IL-5的陽性表達主要分布于表皮全層尤其以基底層為主，IL-17陽性表達分布于表皮全層;而在正常皮膚組織中均稱陰性或弱陽性表達。兩者在大皰性類天皰瘡皮損和正常皮膚組織中的表達差異有統計學意義(IL-5：t=-14．617，P ＜ 0．05;IL-17：t=-23．756;P ＜ 0．05)，大皰性類天皰瘡皮損中IL-5和IL-17的表達水平呈正相關(r=0．842，P＜0．05)。大皰性類天皰瘡皮損組和正常皮膚組中IL-5、IL-17的IOD值比較見表1。

表1 白介素5、白介素17在大皰性類天皰瘡和正常皮膚組織中的表達水平(±s)

表1 白介素5、白介素17在大皰性類天皰瘡和正常皮膚組織中的表達水平(±s)

灰度值病例組組別 例數 IL-17灰度值 IL-5 20 178．16 ±2．74 174．66 ±4．50 38 138．88 ±9．47 126．84 ±19．19正常組

3 討論

有研究表明，大皰性類天皰瘡病例組的血清、皰夜及培養上清液中IL-5水平均高于正常對照組，大皰性類天皰瘡患者T細胞分泌IL-5的能力明顯增高。IL-5趨化嗜酸性粒細胞至皮損處釋放各種炎癥遞質及蛋白酶，產生水皰皮損，與嗜酸性粒細胞趨化因子協同作用促進嗜酸性粒細胞跨基底膜移動，同時誘導超氧陰離子，加強嗜酸性粒細胞漿顆粒釋放。Th17能通過大量分泌IL-17、TNF-α等，引起炎癥反應和組織損傷，能增強T細胞啟動效應，刺激上皮細胞、內皮細胞以及成纖維細胞產生多種促炎癥反應調節因子，包括IL-6、IL-10、IL-1。此外，它還可以通過協同信號來調節炎癥基因。因此，Th17細胞主要通過各種細胞因子來發揮致炎作用。

本實驗研究提示，IL-5與IL-17的表達呈正相關，其機制尚不清楚，可能與IL-17刺激上皮細胞、內皮細胞以及成纖維細胞產生多種促炎癥反應調節因子，包括IL-6、IL-10、IL-1等，這些細胞因子共同促進大皰性類天皰瘡的發病。通過所有的研究結果，本研究可以得出如下結論：細胞因子IL-5及IL-17的表達與大皰性類天皰瘡發病機制密切相關。通過對相關細胞因子的研究，有可能為大皰性類天皰瘡發病機制、預防及治療提供有益的幫助。

［1]趙辨．臨床皮膚性病學．江蘇科學技術出版社，2002，2：782-783．