六味地黃丸對大鼠脂肪細胞生長的影響

蔣俊和，劉蓉芳

（1.湖南中醫藥大學，湖南 長沙 410208；2.咸寧市中醫醫院，湖北 咸寧 437100）

隨著人們保健意識的提高，人們越來越注重養生保健。保健品中以補虛為主，而補虛又以補腎為主，導致時下補腎藥物被大量濫用。不可否認，六味地黃丸確實是一種好藥，但并非人人皆宜、多多益善。我們在臨床使用過程中發現即使無糖型六味地黃丸也可能具有引起各類人群肥胖的副作用[1]。因此，研究六味地黃丸對機體脂肪細胞生長的影響，對于科學、合理地使用六味地黃丸，具有很重要的指導意義。本文通過動物實驗進一步證明其作用，并對其機制進行了初步探討。現將實驗方法及結果報道如下。

1 材料與方法[2-3]

1.1 材料

1.1.1 動物 SD大鼠，雄性75只，體質量200～220 g，清潔級，湖南農業大學實驗動物中心提供。

1.1.2 藥物 六味地黃丸8粒為3 g，每日用量為9 g），河南宛西制藥，公司提供。批號：061263。

1.1.3 儀器 卡尺，軟尺，精度為0.00的電子秤，動脈導管，剪刀，止血鉗，OLYMPUS1X70倒置顯微鏡。Motic Image Advanced 3.0圖像分析系統。

1.2 方法

1.2.1 藥物配制方法 六味地黃丸水溶液的配制：每天新鮮配制，以48粒六味地黃丸溶入100 mL蒸餾水中，攪拌待充分混勻后放入4℃冰箱保存備用。

1.2.2 高脂高營養飼料配制方法[4]自購原料，配方由湖南中醫藥大學實驗動物中心加工。配方為：每100 g飼料中內含豬油10 g，全脂奶粉15 g，白糖10 g，花生油 10 g，基礎飼料 55 g。

1.2.3 動物分組及飼養方法 75只雄性SD大鼠，按體質量隨機分為3組，每組25只，3組大鼠平行飼養。正常組給予普通飼料，高脂飼料組（簡稱對照組）給予高脂飼料，于每天上午9：00給予蒸餾水灌胃。六味地黃丸組給予普通飼料，并于每天上午9：00給予六味地黃丸（簡稱實驗組）灌胃每只大鼠生藥量為90 mg/100 g，溶液濃度為固定濃度，4周和8周灌胃劑量隨大鼠體質量增加而變化，自由飲用潔凈水及攝食。實驗室溫度18～27℃，相對濕度：40%～70%。

1.2.4 檢測指標及方法[5]分別于第4周和第8周末，從各組隨機取出10只大鼠，根據體質量以2%戊巴比妥鈉溶液2.3 mL/kg（45 mg/kg）腹腔注射麻醉并稱體質量。取軟尺經大鼠雙側髖骨頂點繞腹1周測量大鼠腹圍，并記錄。然后再用卡尺經大鼠鼻尖至肛門測量大鼠體長，并記錄，用以計算大鼠Lee Index(肥胖評判指數)。大鼠體質指數Lee Index=體質量(g)1/3×103/體長(cm)。最后沿腹正中線打開腹腔，取出腎周、腸系膜、睪周的脂肪墊并在精度為0.00的電子秤上稱取質量，記錄，將腎周脂肪墊放入裝有甲醛固定液的瓶中，送檢。脂肪墊用甲醛固定液浸泡、脫水、切片、HE染色。在OLYMPUS1X70倒置顯微鏡下觀察脂肪組織病理學改變，用Motic Image Advanced 3.0圖像分析系統采集圖像，并將圖像用攝影鏡頭傳輸到微機顯示屏上，用Motic Image Advanced 3.0圖像分析系統測得脂肪細胞的截面積。最后計算所得的數據均值作為該部位脂肪細胞面積的最終數值。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 一般情況觀察

第1～2周：正常組大鼠攝食、活動、二便同前；實驗組、對照組大鼠攝食量均較正常組減少；實驗組大鼠有排軟便甚至腹瀉情形，墊料更換頻繁，活動減少；對照組大鼠也存在活動減少，排便軟等情況。

第3～4周：實驗組、對照組大鼠排軟便現象持續，但攝食較前增加；其中實驗組小便量多,墊料更換頻繁、活動不多、喜臥，部分大鼠腹圍開始增大但組內不均勻；對照組大鼠腹圍快速增大并組內均勻，活動不多、嗜睡、大便軟、量不多；正常組攝食一般，活動相對其他組較多，腹圍無增大現象,二便正常。

第5～8周：實驗組、對照組大鼠攝食均較正常組增多；實驗組排大便軟而多、活動減少、嗜睡、體態豐滿,但不及對照組,并組內肥胖程度不均衡,性情溫順、皮肉結實、毛色光亮、體毛分布均勻、少脫毛；對照組排大便軟而少、活動少、精神萎頓、反應遲鈍、體形肥胖、腹圍大,組內相互間均衡,皮肉松弛、毛色無光亮、多脫毛、體毛分布不均勻；正常組大鼠攝食、活動均同前,皮肉結實度和毛色光亮度均不及實驗組,偶有脫毛。

2.2 大鼠Lee’s指數及腹圍比較

4周時：對照組大鼠腹圍和Lee’s指數均較正常組和實驗組大，并且差異有統計學意義 （P＜0.05，P＜0.01），顯示肥胖對照成功；而實驗組與正常對照組之間差異無統計學意義（P＞0.05），提示此時六味地黃丸對大鼠的致肥胖作用不顯著。見表1。

8周時：對照組和實驗組大鼠Lee’s指數與腹圍均較正常對照組增大，并且差異有統計學意義（P＜0.01），提示此時六味地黃丸具有與高脂飼料相同的致肥胖作用；但對大鼠指標的影響比六味地黃丸更顯著（高脂與六味地黃丸比P＜0.01），提示六味地黃丸對大鼠致肥胖的能力要大于正常飼料，但又不及高脂飼料。見表1。

從時間上看，正常組腹圍和Lee’s指數第8周與第4周相比，無明顯差異；而對照組和六味地黃丸組的大鼠腹圍和Lee’s指數，第8周均較第4周明顯增大，差異有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。 結果見表1。

表1 六味地黃丸對大鼠腹圍與Lee’s指數數值的影響 （n=10，s）

表1 六味地黃丸對大鼠腹圍與Lee’s指數數值的影響 （n=10，s）

注：與正常組比△P＜0.05，△△P＜0.01；與對照組比*P＜0.05，**P＜0.01；與第 8 周比 #P＜0.05，#＃P＜0.01。

腹圍(cm) Lee’s指數第4周 第8周 第4周 第8周正常組 16.790±1.216 17.390±1.162# 301.673±5.751 301.692±5.858對照組 18.240±0.368△△ 24.320±0.210＃# 312.787±7.349△ 333.009±9.378△△#實驗組 16.830±0.962**19.720±2.612△△**＃ 302.062±12.942*316.265±15.134△△**#組 別

2.3 大鼠腹腔內臟脂肪含量、脂肪個數及面積

隨著飼養時間的增加，正常組脂肪個數和脂肪面積無明顯變化，而對照組和實驗組大鼠脂肪含量明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.01），脂肪細胞面積明顯增大（P＜0.01），單位視野所見的脂肪細胞個數顯著減少（P＜0.01）。但組間比較有差別。見表2。

4周時：對照組的脂肪含量最多，與正常組和實驗組比較差異有統計學意義（P＜0.01），雖然其脂肪細胞面積均值最大、脂肪細胞個數均值最少，但較正常對照組差異無統計學意義（P＞0.05），而較實驗組差異有統計學意義（P＜0.05，P＜0.01）。 實驗組的脂肪含量與正常組比差異無統計學意義（P＞0.05），但其脂肪細胞個數之多和脂肪細胞的面積之小較正常組差異有統計學意義（P＜0.01）。見表2。

8周時：正常組的脂肪細胞個數及面積，相對第4周無明顯改變（P＞0.05），而對照組和實驗組均較第4周有明顯的改變（P＜0.01）；并且六味地黃丸顯示出與高脂飼料同樣增多脂肪含量、增大脂肪面積、減少單位視野所見脂肪細胞個數的能力，即較正常對照組均差異有統計學意義 （P＜0.01）；但高脂飼料對大鼠的這種影響較六味地黃丸更為顯著 （對照組與實驗組比，P＜0.05）。見表2，圖 1～2。

表2 六味地黃丸對大鼠脂肪含量、細胞個數及面積的影響

表2 六味地黃丸對大鼠脂肪含量、細胞個數及面積的影響

注：與正常組比△P＜0.05，△△P＜0.01；與對照組比 *P＜0.05，**P＜0.01；與第 8 周比 #P＜0.05，#＃P＜0.01。

組 別脂肪含量(g) 脂肪細胞個數(個) 脂肪細胞面積(μm2)第4周 第8周 第4周 第8周 第4周 第8周正常組 11.155±1.153 12.734±0.793## 29.50±6.15 30.20±4.39# 77 751.27±19 631.62 78 153.23±17 040.09#對照組 14.825±0.901△△ 19.565±1.923△△＃ 25.90±12.47 11.90±4.70△△#＃ 128 777.8±84 848.51 270 737.0±124 656.33△實驗組 11.099±0.721** 15.370±1.537△△**#＃ 64.10±13.09△△** 18.00±5.40△△*#＃ 28 030.75±11 158.19△△* 148 746.5±42 680.81△*△#＃*

圖1 六味地黃丸對第4周大鼠脂肪細胞的影響光鏡圖（10×10）

圖2 六味地黃丸對第8周大鼠脂肪細胞的影響光鏡圖（10×10）

3 討論

從中醫理論上認識,六味地黃丸導致肥胖的原因可能是在體內形成了痰濕，而形成痰濕引起肥胖可能與以下幾個方面有關。

3.1 腎陰陽失衡

中醫認為，最理想的健康狀態，是陰陽平衡的狀態，即《黃帝內經》中記載的“陰平陽秘，精神乃治”。腎陰,又稱元陰、真陰,是人體陰液的根本,對全身各臟腑組織起滋養、濡潤的作用。腎陽,又稱元陽,是人體陽氣的根本,對全身各臟腑組織起溫煦、推動的作用。腎陰腎陽互相制約，對人體的代謝和功能起著調節作用，其中任何一方偏盛或偏衰都會導致陰陽不平衡而引起疾病。

歷代醫家認為六味地黃丸是補腎之專品，并將其視為補陰之神方。如 《校注婦人良方》、《景岳全書》、《證治準繩》皆認為六味地黃丸為“壯水之劑，夫人之生，以腎為主，凡病皆由腎虛而致，此方乃天一生水之劑，無有不可用者，世所罕知。”《醫宗已任編》從六味地黃丸的組成及藥性上分析，認為“此純陰重味潤下之方也，純陰腎之氣，重味腎之質，潤下腎之性，非此不能使水歸其壑。……自此以來，為補陰之神方矣。”

正常大鼠體質是處于陰陽平衡的狀態，服用六味地黃丸這種偏于助長腎陰一方的藥物后，勢必破壞了原先的陰陽平衡狀態，導致腎陰過度滋長，機體滋潤太過；而腎陽的一方卻相對不夠，溫煦不及，不能制約腎水，從而津液生成過多或者運行緩慢，將原來的“滋潤、灌溉”變成了水濕泛濫，水液不走常道，或滲入腸胃，則大便溏；或水液停留體內，日久聚而為痰引起肥胖。實驗中觀察到實驗組大鼠小便多，墊料易濕、更換頻繁和大便稀軟甚至不成形之現象，是否因六味地黃丸對正常體質大鼠造成腎陽溫煦不及而導致體內津液氣化失常而引起，尚待進一步研究。

3.2 脾腎功能失衡

人體之中,精微物質的生成、轉化的過程，即《素問·陰陽應象大論》中“氣歸精，精歸化”的過程。這一過程需要保持相對的動態平衡，精微物質才能被有效利用，代謝物則排出體外。反之，精微物質若失去平衡，不能轉化，則精微物質不能被機體所利用，反而形成痰濕積聚。《景岳全書》稱：“痰即人之津液，無非水谷所化。此痰也既化之物，而非不化之屬也。但化得其正，則形體強，營衛充；而痰涎本血氣，若化失其正，則臟腑病，津液敗，而血氣即成痰涎”。六味地黃丸雖然是三陰并補之方，但以滋補腎陰為主。土能克水，由于滋補腎陰太過，引起腎水泛濫，則反侮脾土，即土為水濕所困，導致脾的運化水谷精微功能失常，脾不散精，積聚濁敗，漸成痰濕積聚，反為其害。

3.3 脾胃功能失調

脾為陰土，胃為陽土，脾喜燥惡濕，而胃喜濕惡燥。雖然中醫理論認為六味地黃丸其組方有“三補”“三瀉”，“滋而不膩”“補而不滯”之說，其中茯苓、澤瀉利水祛濕，但其量效不敵熟地、山藥、山茱萸之滋膩，因而正常體質下的大鼠，其脾土仍然為水濕所困；胃喜濕惡燥，它不為濕所困，加之六味地黃丸方中山藥、茯苓又有健脾胃之功，從而形成了胃強脾弱之證。即實驗中六味地黃丸能使大鼠食欲增加，但由于不能很好的將所攝取進來的水谷精微正常地布散，故最后形成了肥胖。討論中后兩點也正符合中醫理論中“脾為生痰之源”之說。

六味地黃丸是非處方藥品，而不是保健品，它適用中醫辨證屬于腎陰虛證或見肝腎陰虛證的患者。因此，我們認為必須按照中醫的辨證，或在中醫師的指導下服用，否則不但不能保健養生，反而會適得其反。

[1]蔣俊和，六味地黃丸對人體體脂指數的影響[J].湖南中醫藥導報，1996，（11）：32.

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[3]熊 鷹，王俊芳，陳儀坤，等.高脂膳食對雌、雄大鼠肥胖程度影響差異研究[J].現代預防醫學，2006，33（4）：507-508.

[4]葛可佑.中國營養科學全書[M].北京：人民衛生出版社，2004：871-875.

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[6]肖子曾，趙 婧，戴 冰，等.六味地黃方超微飲片含藥血清對大鼠前脂肪細胞的影響[J].湖南中醫藥大學學報.2010，30（1）：22-24.