ELISA檢測中全自動加樣引起拖帶污染現象的原因分析及對策

閆曉鵬 李雪英 王文莉

全自動加樣系統具有加樣精確度高、標本處理量大、加樣速度快、不易出現人為差錯事故等優點，進一步提高了血液檢測的質量和水平，近年來在采供血系統的ELISA血液檢測中得到了廣泛應用［1］。但筆者在運用全自動加樣系統進行血液標本加樣檢測過程中，發現有強陽性標本引起的拖帶污染現象，給工作造成了一定的不利影響。經分析原因并制定相應整治措施，特別是更換使用一次性加樣針后，完全杜絕了此類現象的發生。筆者以HIV檢測為例報告如下。

1 材料與方法

1.1 血液標本 本站無償獻血者血液標本74215份(其中2008年10月至2008年12月6142份，2009年1月至2011年4月68073份)。每位獻血者均留取2份血液標本，其中1份為獻血者獻血時由采血護士留取的試管標本，作初檢用;另1份為留取的血袋導管標本，作復檢用。所有血液標本均2000 r/min離心15 min備用。

1.2 試劑 初檢用HIV抗原抗體診斷試劑盒(北京科衛臨床診斷試劑有限公司);復檢用HIV抗原抗體診斷試劑盒(法國BIO-RAD公司);2種試劑均通過中國藥品生物制品檢定所批檢合格，并在有效期內使用。

1.3 儀器設備 STAR全自動樣本處理系統(瑞士HAMILTON公司);FAME全自動酶免分析系統(瑞士HAMILTON公司);Sunrise酶標儀(奧地利TECAN公司);MK2洗板機(芬蘭Thermo公司)。

1.4 方法 分別使用初檢試劑檢測初檢標本，復檢試劑檢測復檢標本，根據HIV檢測試劑說明書的要求，在STAR全自動樣本處理系統控制微機上編輯初檢、復檢2個加樣程序。2008年使用永久性鋼針，加樣過程中，STAR全自動樣本處理系統在吸取、分配不同的血液標本或液體試劑后，按設定程序需將加樣探針清洗3次，在擦針紙上擦拭1次。2009年以后全部使用一次性加樣針，設定程序也相應取消了洗滌環節。當加樣程序完成后，將微板移至FAME全自動酶免分析系統，進行溫育、洗板、顯色及結果判讀。

以大寫字母A～H表示96孔酶標板的縱列;以阿樂伯數字1～12表示96孔酶標板的橫列，標本在酶標板的位置可分別表示為A1～A12、B1～B12……H1～H12(見圖1)。如發現ELISA微板上從A排至H排連續出現2孔或2孔以上陽性結果時，即懷疑是由拖帶污染引起的假陽性。首先進行同一檢測項目初、復檢結果比對;然后重新取1份血袋導管標本，連同初、復檢標本，分別用2種試劑進行3孔復試。

圖1 酶標板標本位置圖解

2 結果

在2008年10月至2008年12月的6142份血液標本的HIV檢測中，由STAR全自動樣本處理系統引起的強陽性標本拖帶污染現象共2次，分別見表1、表2。2009年1月～2011年4月共68073份血液標本檢測中未發現拖帶污染現象。

表1 第1例拖帶污染檢測結果

本次拖帶污染現象出現在初檢中，實驗的Cut off值為0.134，故6份標本中5份為陽性，1份為“灰區”。根據HIV檢測規程，對6份標本分別進行了3孔復試，結果H2標本仍為強陽性，檢測OD值分別為2.759、2.543和2.398;H3標本為弱陽性，檢測OD值分別為0.596、0.603和0.628;其余4份標本均為陰性。遂將H2、H3標本送焦作市疾控中心的HIV確認實驗室進行確認，結果H2標本仍為強陽性，H3標本為可疑，須3個月后進一步隨訪和復查。

表2 第2例拖帶污染檢測結果

本次拖帶污染現象出現在復檢中，實驗的Cut off值為0.204，故4份標本均呈陽性。按HIV檢測規程分別對4份標本進行3孔復試后，E9標本仍為強陽性，檢測OD值分別為3.110、3.188和3.011，其他3份樣本均為陰性。E9標本經焦作市疾控中心HIV確認實驗室確認后，仍為強陽性。

3 討論

由于全自動加樣系統的諸多優點，使其在大部分血站得到推廣應用。最初幾年，推廣使用的加樣針均為永久性鋼針，目前有部分血站仍在使用。因其在加完血液標本或試劑后，需按編好的加樣程序進行沖洗、擦拭后重復使用，所以從理論上講，隨著加樣運行方向從左→右各孔間的拖帶污染是不可避免的［2］，尤其是一根加樣針加完強陽性標本后，如果因標本存在纖維蛋白凝塊等原因而使加樣針未徹底沖洗干凈，就會造成強陽性拖帶污染情況的發生，本文中2例拖帶污染現象經分析均為標本處理不當引起。同時由加樣參數設置不當而引起的加樣量不準確、加樣針掛珠等情況以及洗針槽不潔凈、溢液通道不通暢、針爪內外壁干燥密封不好、加樣探針有內栓漏氣等均可導致拖帶污染現象發生。

針對產生拖帶污染的原因，我們采取了以下對應措施:①根據不同廠家試劑的實際情況，設置科學合理的加樣參數，避免液體試劑和標本之間的相互污染。②自2009年全面更換使用一次性加樣針，由于沒有了洗滌環節，在保持血液加樣的高精確度和自動化的前提下，可完全杜絕拖帶污染帶來的影響［3］。③建立和實施儀器設備的維護、校準和持續監控管理制度，大型和關鍵儀器設備實行專人管理、專人使用，并按照儀器使用要求做好其日維護、月維護及日常保養工作，使儀器始終處在良好的工作狀態。④對血液標本全過程進行管理，建立和實施標本采集程序、標本運送程序及標本的接收和處理程序，并嚴格執行，有效避免了標本出現溶血、污染、變質及存在懸浮顆粒等情況。

基于我們采取的綜合整治措施，2009年至今，我站共檢測獻血者血液標本近7萬人份，未發生1例拖帶污染現象，更好地發揮了全自動檢測設備的優勢，進一步提高了檢測結果的準確性及血液使用的安全性。

［1］李玉笑，鄭優榮，肖韶英，等.FAME酶標分析系統在安全輸血中的應用.廣東醫學，2002，23(5):461-463.

［2］徐樹良，談維，石斌，等.全自動加樣儀引起抗-HIV拖帶陽性分析.中國輸血雜志，2003，16(2):106-107.

［3］申俊峰，陸蓉，王軍，等.全自動加樣儀一次性加樣針在血液檢測中的應用.貴州醫藥，2009，33(3):264-265.