hMOF蛋白在子宮內膜癌組織中的表達及臨床意義

文愛平,汪海嬌,羅 樂,趙 磊,蔡 勇,金景姬,岳 瑛*

(1.吉林大學第一醫院婦產科,吉林長春 130021;2.重慶市涪陵區中心醫院婦產科;3.都江堰市醫療中心婦產科;4.吉林大學生命科學院）

表觀遺傳學是研究在沒有DNA突變的情況下組蛋白(histone）的修飾變化引起某些癌基因和抑癌基因的功能變化,從而導致癌癥的發生和發展。目前組蛋白(Histone）的修飾主要包括:乙酰化、甲基化、磷酸化等[1]。hMOF蛋白又稱人乙酰化轉移酶是組蛋白乙酰化家族MYST的MSL關鍵成分,作用于組蛋白4第16賴氨酸(H4K16）它在DNA的轉錄、DNA的修復及DNA的復制和重組及細胞周期的調控中發揮了重要作用。近年來相關研究表明hMOF蛋白在腫瘤的發生發展中扮演了重要角色,目前經研究證實表明,在乳腺癌,腦膠質瘤等hMOF蛋白的表達較正常組織明顯下降。子宮內膜癌是女性常見的生殖系統第二位惡性腫瘤,近年來子宮內膜癌在全世界內發病率呈上升趨勢,嚴重威脅目前對于女性健康,其發病機制的研究仍不十分清楚,對于子宮內膜癌的發病是否有組蛋白乙酰化,hMOF表達的異常有關,目前尚無報道,本文結合患者的臨床數據,擬探究hMOF蛋白與子宮內膜癌的發病關系。

1 材料與方法

1.1 實驗對象及材料

選取吉林大學第一醫院病理科2008年3月-2010年12月間58例子宮內膜癌(病理類型皆為子宮內膜樣腺癌）及38例癌旁組織,臨床病理分期根據參照FIGO(2000）標準Ⅰ期22例,Ⅱ期20例,Ⅲ期9例,Ⅳ期7例,組織分化程度根據WHO標準,子宮內膜癌G1:高分化20例,G2:中分化18例,G3:低分化20例。

1.2 免疫組織化學檢測

hMOF蛋白一抗為:Bethyl公司生產的hMOF蛋白多克隆抗體(產品編號:IHC-00497）;一抗稀釋比例1∶250;組織抗原修復方式:枸櫞酸鹽緩沖液(pH=6.0）內,高壓煮沸1分鐘,并置于4°孵育過夜,剩余步驟參照S試劑盒說明書進行。用PBS替換多克隆一抗作為陰性對照。

1.3 結果觀察和判定

陽性結果為隨機選取4個高倍鏡下細胞核出現棕黃色染顆粒沉著,與背景有明顯差別。根據染色強度與陽性細胞比率雙評半定量法進行評分 :A:陽性細胞百分率＜10%為0分;10-30%為1分;31-50%為2分;51-75%為3分;＞75%為 4分;B:據切片染色程度進行評分:未染色為0分,淺黃色為1分,黃色為2分,棕黃色為3分。最后據陽性細胞率的得分與染色程度得分相乘作為結果進行判定,0分定為陰性(-）,1-4分為弱陽性(+）,5-8分為陽性(++）,9-12分為強陽性(+++）。判定結果由兩位具有經驗的臨床病理醫師分別判定。

1.4 統計學分析

多組資料的單因素方差分析、Fisher檢驗應用SPSS 13.0軟件進行數據處理和分析。

2 結果

hMOF蛋白免疫組織化學結果,hMOF蛋白主要定位在細胞核內,58例患者中,23例表達為陰性(-）或弱陽性(+）,癌旁正常組織中僅有5例表達為陰性或弱陽性。hMOF蛋白在子宮內膜癌組織的表達較其癌旁組織組織明顯減少,兩者具有顯著差異,(P＜0.05。見表1）。通過hMOF蛋白的表達與患者臨床資料分析發現:hMOF蛋白的表達與患者年齡無顯著差異性(P＞0.05,見表2）,在FIGO分期中,隨著分期的不同差異越顯著,Ⅲ-Ⅳ期患者與I期患者和Ⅱ期比較hMOF蛋白的表達明顯減少,差異有統計學意義(P＜0.05,見表2）,在低分化的子宮內膜癌組織中hMOF蛋白表達的陽性率明顯低于中分化和高分化的子宮內膜癌組織,兩兩比較,差異具有統計學意義,(P＜0.05,見表2）。

表1 hMOF蛋白在正常子宮內膜組織和子宮內膜癌的表達情況

表2 hMOF蛋白表達水平與子宮內膜癌患者臨床特點的分析

3 討論

現普遍認為癌癥是在多種病因作用下的一種遺傳和表觀遺傳的疾病,由于絕大多數的表觀遺傳在癌癥的變化是可逆轉的,所以近年來表觀遺傳學研究是遺傳學家研究的熱點和重點。所謂表觀遺傳學是在沒有DNA突變的情況下組蛋白(Histone）的修飾變化引起某些癌基因和抑癌基因的功能變化,從而導致癌癥的發生和發展。目前組蛋白(Histone）的修飾主要包括:乙酰化、甲基化、磷酸化等。hMOF是組蛋白乙酰化家族MYST的MSL關鍵成分,作用于組蛋白4第16賴氨酸(H4K16）,它在DNA的轉錄、DNA的修復及DNA的復制和重組中發揮了重要作用[2-4],Frega[5]等研究發現在癌細胞株及原發惡性腫瘤中組蛋白4的第16賴氨酸(H4K16）和組蛋白4第20賴氨酸甲基化的表達水平較正常細胞明顯下降,并同時發現其減少發生于DNA重復區域;Ste fan[6]等在對乳腺癌和成神經細胞瘤患者的研究顯示hMOF的mRNA及蛋白在乳腺癌與成神經細胞瘤患者的表達水平均較相應正常組織明顯下降,同時在有淋巴及遠處轉移、組織分化較差的患者的hMOF蛋白及mRNA的表達水平較無淋巴及遠處轉移、組織分化較好的患者低,通過長期的跟蹤隨訪發現hMOF蛋白及mRNA低表達患者的總體生存率明顯降低,其認為hMOF蛋白的表達水平可作為一個判斷患者預后的一個生物標志。

圖1 hMOF蛋白在子內膜癌的表達:高分化(A）、中分化(B）、低分化(C）,D-F為癌旁正常組織(×200）

近年來表觀遺傳研究發現,hMOF蛋白為組蛋白乙酰化酶的重要的催化亞基,其主要作用對象為組蛋白H4K16,Fraga[5]等通過hMOF蛋白和H4K16在正常組織和癌癥組織中研究發現二者在癌癥組織的表達明顯減少。子宮內膜癌(carcinoma of endometrium）是發生于子宮內膜的癌變,其絕大多數為腺癌,本文討論的所有標本的病理組織類型是是子宮內膜腺癌。為女性生殖器三大惡性腫瘤之一,多見于絕經后的女性,高發年齡為58-61歲,約占女性癌癥總數的7%,占女性生殖器官惡性腫瘤的20-30%,近年來發病率有上升的趨勢,其發病率趨于接近甚至超過宮頸癌[7],在美國,子宮內膜癌是女性生殖道最常見的惡性腫瘤,子宮內膜癌中75%是子宮內膜腺癌,其發生是在多種條件下由正常子宮內膜、復雜性增生、不典型增生、原位癌直至侵潤性癌的一個漫長的、復雜的過程。流行病學研究發現,在初潮年齡較小、絕經延遲、不孕不育、肥胖、高血壓、糖尿病和長期服用雌激素等密切相關,同時大約20%內膜癌的患者有家族遺傳傾向。據估計在2008年大約有 40100新近此病被診斷,約 7470人死于此病[8]。子宮內膜癌的主要治療手段仍是手術治療,根據患者的病理分級及具體情況給予術后放療、化療及激素治療(HRT,Hormone Replacement Therapy）,經化療的患者總的生存期約13個月[9]。其臨床病理分期根據病理結果和臨床所見的FIGO(2009）分為I—Ⅳ期,同時子宮內膜癌的WTO分級系統是根據組織在鏡下腺管的排列、細胞的異性程度以及核分裂的多少分為高分化(G1）、中分化(G2）、低分化(G3）三級.近年來其發病率上升趨勢較為明顯,目前對于子宮內膜癌的患者主要治療手段為手術治療的基礎上根據患者的耐受情況和組織病理學分級予以化療或者放療,但長期生存率未明顯改善[10]。

本實驗研究結果顯示在hMOF蛋白在23例子宮內膜癌的表達較癌旁組織明顯下降(P=0.005＜0.05）,同時在分化不一的子宮內膜癌組織表達中,G1有15%的表達明顯減少、G2有44%的減少、G3有60%的減少,P值為0.013,具有顯著差異,在臨床病理分期Ⅲ-Ⅳ期(68.8%）的患者表達較Ⅱ期(40%）和Ⅰ期(18.1%）患者明顯下調,P值0.007具有顯著差異。同時,在有淋巴及遠處轉移的患者中hMOF蛋白的表達較無轉移的患者表達也明顯減少這與Stefan[6]等研究結果相同。提示hMOF蛋白在組織分化程度、臨床分期及淋巴及遠處轉移與否的表達水平具有明顯差異,而組織分化程度及淋巴和遠處轉移又直接影響到了患者對治療的反應和長期的生存率。雖然目前hMOF蛋白對于子宮內膜癌發生的具體機制尚不清楚,現有研究資料和本實驗研究結果可以推測可能與hMOF蛋白參與子宮內膜的組蛋白的乙酰化異常相關,但需進一步研究證實,從實驗結果我們認為hMOF蛋白可以作為一個判斷疾病嚴重程度和預后的分子指標。

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[6]Stefan Pfister,Setphen Rea,Mikko Taipale,et al.The histone acetyltrsanferase hMOF is frequently downregulated in primarybreast carcinoma and medulloblastoma[J].Int J Cancer,2008,22:1207.

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