鈣結合蛋白S100P在非肌層浸潤性膀胱癌組織中的表達及臨床意義〔1〕

田鑫，趙輝，王志強，李揚，朱朝陽*

(1.河南大學淮河醫院，河南 開封 475000；2.河南大學藥學院，河南 開封 475004)

膀胱癌是泌尿系統常見的惡性腫瘤之一，其中非肌層浸潤性膀胱癌(NMIBC)約占膀胱癌初發患者的70%[1]。經尿道膀胱腫瘤切除術(TURBT)是治療NMIBC的首選治療方式，但術后復發率、進展率較高[2]。因此，探索新的預后標志物和有效的基因治療靶點已成為目前研究的熱點。S100蛋白家族是一類鈣結合蛋白，在細胞分化、細胞周期活動及細胞外基質分泌等過程中發揮重要作用，并與腫瘤的浸潤和轉移有關[3]。近年研究表明[4-5]，S100P在多種惡性腫瘤中異常表達，與腫瘤的發生、發展及預后密切相關。本研究旨在探討S100P與NMIBC患者臨床病理特征及預后的關系，為NMIBC的臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年6月—2016年6月收治的NMIBC患者42 例，并經TURBT術獲得癌組織。納入標準：原發性NMIBC(術后病理學確診)且接受TURBT術及術后膀胱灌注治療；無淋巴結受侵及遠處轉移；臨床隨訪資料完整。排除標準：肌層浸潤性膀胱癌患者(腫瘤分期≥T2)；術前接受過放化療者；合并心力衰竭、慢性阻塞性肺病、肝功能不全、腎衰竭者；有腫瘤病史或自身免疫性病史。同期的16 例膀胱囊腫患者行開放性手術時取的正常膀胱組織作為對照組。本研究通過醫院倫理委員會批準，患者或家屬均對本研究知情同意。

1.2 方法

統計患者臨床資料：包括年齡、性別、吸煙史、腫瘤數量、腫瘤大小、腫瘤分期、腫瘤分級等一般資料。

統計患者術后并發癥、術后導管留置時間及住院時間等術后短期恢復指標。

Western Blot檢測蛋白的表達：取組織研磨成勻漿，采用蛋白提取試劑盒提取總蛋白，并用二喹啉甲酸法測定蛋白濃度。取40 μg蛋白樣品在聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳分離，然后將蛋白轉移到聚偏二氟乙烯膜上，并在含有5%脫脂乳的磷酸緩沖液中封閉1 h。加入一抗：S100P抗體(1∶100)和β-actin抗體(1∶2 000)，4 ℃孵育過夜，然后加入辣根過氧化物酶標記的IgG(1∶1 000)二抗，室溫下孵育1 h。洗膜后采用電化學發光劑顯色，曝光，使用凝膠圖像分析系統(Bio-RAD)進行灰度分析。目的蛋白表達水平用相對灰度值表示，并將相對灰度值>0.1定義為陽性表達，由此將NMIBC患者分為S100P(+)組和S100P(-)組。

1.3 術后隨訪

采用電話及門診定期復查等方式對患者進行隨訪。術后1 年內每3 個月隨訪1 次，1 年后每6 個月隨訪1 次，如出現復發或轉移則改為3 個月隨訪1 次，隨訪截止至2019年6月。復查內容包括尿常規、CT及膀胱鏡檢測等，依據檢查結果判斷是否復發。

1.4 統計學方法

2 結 果

2.1 S100P蛋白在NMIBC癌組織中的表達

Western Blot檢測S100P蛋白的表達(見圖1)，結果顯示，NMIBC患者癌組織中S100P蛋白的表達水平為0.44±0.11，明顯高于正常膀胱組織的0.07±0.02(P<0.05)；NMIBC患者中S100P的陽性表達率為79%(33/42)，對照組的陽性表達率為6.25%(1/16)，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。

圖1 癌組織及正常膀胱組織的S100P表達

2.2 S100P蛋白與臨床資料的關系

根據S100P是否為陽性表達將患者分為S100P(+)組和S100P(-)組。兩組患者年齡、性別、吸煙史、腫瘤數量及腫瘤大小比較，差異無統計學意義(P>0.05)；兩組患者的腫瘤分期和腫瘤分級比較，差異有統計學意義(P<0.05)(見表1)。

2.3 S100P蛋白與NMIBC患者術后短期恢復的關系

S100P(+)組患者術后并發癥發生率和住院時間均明顯高于S100P(-)組(P<0.05)，而兩組患者的術后導管留置時間比較，差異無統計學意義(P>0.05)(見表2)。

2.4 S100P蛋白與NMIBC患者無復發生存率的關系

S100P(+)組和S100P(-)組患者的1 年無復發生存率比較，差異無統計學意義(P>0.05)，但S100P(+)組的3 年無復發生存率明顯低于S100P(-)組，差異有統計學意義(P<0.05)(見表3)。

表1 S100P(+)組和S100P(-)組患者臨床資料比較 例(%)

表3 S100P(+)組和S100P(-)組患者術后無復發生存率比較 例(%)

3 討 論

S100家族是多功能信號蛋白家族，可介導鈣離子依賴的信號傳導途徑，參與調控細胞生長、分化及維持胞內外鈣離子平衡等多種生物學過程[6]。有研究報道多個S100家族成員在腫瘤組織中異常表達[7-8]。S100P是S100蛋白超家族成員之一，可通過與鈣周期結合蛋白(CaeyBP/SIP)、埃茲蛋白(Ezrin)、晚期糖基化終末產物(RAGE)、S100P結合蛋白(S100PBPR)等靶蛋白結合，參與細胞信號轉導過程，從而介導腫瘤的生長、增殖、浸潤和轉移等病理過程[9-10]。有證據顯示，S100P在多種惡性腫瘤組織中異常表達，與腫瘤發生發展密切相關[11-12]。Wang等[13]研究發現，前列腺癌組織中S100P陽性率明顯低于良性前列腺增生和正常組織，其表達水平與TNM分期及遠處轉移密切相關。麥聰等[14]研究表明，S100P在胃腺癌組織中的陽性表達下調，與腫瘤大小、分化程度、TNM分期、淋巴結轉移和浸潤深度有關。而田鑫等[15]研究發現，沉默S100P后膀胱癌細胞的增殖抑制率和凋亡率明顯升高，說明S100P與膀胱癌細胞的增殖、凋亡有關。本研究結果發現，NMIBC癌組織中S100P蛋白的表達明顯高于正常膀胱組織，且NMIBC患者中S100P表達陽性率明顯高于對照組，同時隨著腫瘤分期及腫瘤分級的增加，S100P的陽性表達率明顯升高，表明S100P的高表達可能激活NMIBC組織中的某些腫瘤相關因子或相關信號通路，進而參與NMIBC的發生與發展，推測S100P可能是NMIBC的潛在標志物，可作為NMIBC基因治療的一個候選基因。此外，近年研究表明[16]，S100P與多種惡性腫瘤的預后有關。Ge等[17]研究發現，胃癌組織中S100P的表達明顯高于正常對照組；S100P在胃癌高表達與TNM分期及預后相關，且S100P高表達患者的5 年生存率明顯低于低表達患者。Wang等[18]研究表明，上皮性卵巢癌標本中S100P表達明顯高于輸卵管組織和正常卵巢組織，且是總體生存期和無進展生存期的獨立預后因素。本研究表明，S100P表達與術后并發癥發生率、住院時間及3 年無復發生存率有關，提示S100P與NMIBC患者預后有關，但S100P是否是NMIBC患者預后的獨立影響因素有待進一步的探討。

綜上所述，S100P在NMIBC癌組織中高表達，與腫瘤分期及腫瘤分級密切相關，且與術后短期恢復及3 年無復發生存率有關，推測其可作為NMIBC的臨床診斷和預后評估指標。但是本研究的樣本較少，且為單中心臨床研究，可能導致研究結果存在偏倚，后續還需擴大樣本量進行多中心深入研究。