山羊傳染性胸膜肺炎病原及診斷方法的研究進展

劉 遠，林仕欣，李文楊

（福建省農業科學院畜牧獸醫研究所，福州 350013）

山羊傳染性胸膜肺炎（contagious caprine pleruopneumonia，CCPP）是由山羊支原體山羊肺炎亞種（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumonia，Mccp）引起的山羊獨有的一種急性或慢性呼吸道傳染病，以纖維素性胸膜肺炎為主要特征［1］。該支原體最早由MacOwan和Minette分離得到，被感染羊群無明顯年齡和性別差異，發病率和死亡率均較高，廣泛流行于非洲和亞洲養羊國家，危害極大，已經被世界動物衛生組織（OIE）列入重要疾病目錄［2］。盡管CCPP的發生至今已有近百年的歷史，但對其病原的認識一直比較混亂。國內在分離到Mccp以前，長期認為絲狀支原體山羊亞種（M.mycoides subsp.Capri，Mmc）才是該病的病原［3］，除此之外，綿羊肺炎支原體（M.ovipneumoniae，Mo）感染山羊后也能引起類似山羊傳染性胸膜肺炎的臨床癥狀，經常被誤認為是CCPP的病原之一［4］。造成這種病原認識不清的主要原因是由于支原體分離培養非常困難，且臨床上又常可能被其它呼吸道疾病干擾而最終不能確診［5］。長期以來，內蒙古、寧夏、甘肅、四川、湖南、福建等地均有該病暴發的報道［6］，但各地病原分離試驗也證實了各地引起該病的病原差異性和復雜性。

1 病原

1.1 絲狀支原體山羊亞種

在國內，絲狀支原體山羊亞種長期被當作是山羊傳染性胸膜肺炎的病原。王棟等最早用血清學方法鑒定了國內4株分離自傳染性胸膜肺炎山羊的支原體，并認為Mmc在我國廣泛存在［3］。一般認為Mmc不感染綿羊，加之長期以來對支原體基因組序列研究的缺乏，導致國內其它研究者也認為該支原體是引起我國傳染性胸膜肺炎的病原［7］。

隨著支原體研究的深入，逐漸形成了直接根據支原體基因組序列在進化上的關系進行支原體的分類。李媛等應用序列分析等手段對引起國內傳染性胸膜肺炎病原的支原體進行了分子特征研究，結果認為該病原應歸為Mccp［8］。雖然Mmc并不是真CCPP的病原，但可引起臨床上類似于CCPP的胸膜肺炎，感染山羊高熱、不食，解剖可見損傷主要在肺部、胸膜和心包。肺小葉不同程度肝樣變，小葉間隔擴大。胸膜常被滲出性纖維覆蓋并與膈膜、心包和胸壁粘連。病變器官的淋巴結，尤其支氣管、縱膈、下頜及咽后淋巴結增大、水腫、出血。

1.2 綿羊肺炎支原體

綿羊肺炎支原體是引起綿羊肺炎支原體病的病原，以咳嗽、喘氣、漸進性消瘦以及肺間質增生性炎癥為特征的慢性呼吸道疾病。該支原體最先由Mackay于1963年從發生肺炎的綿羊肺中分離到。隨后Cottew在澳大利亞綿羊的病肺中也發現該霉形體，并由Carmichael等證明了這種霉形體的致病性，建議將其命名為MO［9］。

MO還能感染山羊，最早是Linvingston等（1979）從患肺炎西班牙和安哥拉山羊中分離。我國王棟等1991年就報道了從疑為山羊傳染性胸膜肺炎的病料中分離到12株MO和1株精氨酸霉形體，通過人工感染試驗，證明了對山羊的致病性，同年鄧光明等也報道了MO是甘肅省華池縣山羊傳染性胸膜肺炎的病原［4］。楊發龍等從四川省樂至縣發生胸膜肺炎性傳染病的山羊群中檢測到了綿羊肺炎支原體，且未發現絲狀支原體簇成員，表明綿羊肺炎支原體是引起山羊群發生胸膜肺炎的病原，同時說明綿羊肺炎支原體仍然是目前山羊支原體性肺炎的重要病原之一［10］。

1.3 山羊支原體山羊肺炎亞種

山羊支原體山羊肺炎亞種（M.capri.ssp.capripneumoniae，Mccp）最早是MacOwan等1976年在肯尼亞分離出來的，原稱生物型F38（模式株）。Mccp只感染山羊，現已被國際公認為山羊傳染性胸膜肺炎的唯一病原。但因為這種支原體在體外極難培養，目前分離到病原的不多。我國辛九慶等從患肺炎山羊分離到一株支原體，經分子生物學試驗初步鑒定為Mccp，這是我國首次報道有Mccp的存在［11］。CCPP特征性病變僅限于胸腔，單純Mccp感染不伴隨其它器官的損害。CCPP典型病例表現為極度高熱（41～43℃），感染羊無年齡性別差異，懷孕羊易發生流產。高熱2～3 d，呼吸加速，顯得痛苦，有時還發出呼嚕聲，持續性劇烈咳嗽。最后山羊不能運動，兩前肢分開站立，脖子僵硬前伸，有時嘴里不斷流出涎水。死后剖檢顯示胸腔纖維蛋白性滲出（稻草色），肺部伴有大范圍的肝樣變和纖維性胸膜炎。

2 診斷方法

2.1 臨床診斷

一般而言，根據病程和臨床癥狀，可分為最急性、急性和慢性3種類型。最急性病初體溫增高，可達41～42℃，極度萎頓，食欲廢絕，呼吸急促而有痛苦的鳴叫，數小時后出現肺炎癥狀，呼吸困難，咳嗽，并流漿液性帶血鼻液，肺部叩診呈濁音或實音，聽診肺泡呼吸音減弱、消失或呈捻發音。1～2 d后病羊臥地不起，呼吸極度困難并伴有全身顫動，粘膜高度充血發紺，最后衰弱，窒息死亡，病程一般為4～5 d。急性最常見，病初體溫升高，繼之出現短而濕的咳嗽，伴有漿性鼻漏，4～5 d后一側胸膜出現肺炎癥狀，高熱稽留不退，食欲銳減，呼吸困難和痛苦呻吟，腰背拱起，多數懷孕母羊發生流產，最后病羊極度萎頓衰弱而死，幸而不死者轉為慢性。慢性多見于夏季，病程可維持2個月以上，病羊全身癥狀輕微，間有咳嗽和腹瀉，被毛粗亂無光。

2.2 血清學診斷

根據不同支原體株在抗原結構上的差異，可以用血清學方法進行支原體疾病的診斷。目前，該病的血清學診斷方法有生長抑制試驗、代謝抑制試驗、表面熒光抗體試驗（間接法）、直接補體結合試驗（微量法）、間接血凝試驗（IHA）、間接酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。然而，血清學方法的特異性較低，且支原體之間有交叉反應。近年來微量間接血凝試驗（MIHA）常用來進行該疾病的流行病學調查，其原理是將可溶性抗原（或抗體）吸附于與免疫無關的小顆粒（載體）表面，此吸附抗原（或抗體）的載體顆粒在有電解質存在的適宜條件下可與相應的抗體（或抗原）發生凝聚反應，該方法操作簡便，所需時間較少，但作為病原的確定靈敏性不高［12］。

2.3 分子生物學診斷

分子生物學的發展，一方面提供了支原體在基因組層面的進化關系，為羊傳染性胸膜肺炎病原的確定提供了理論依據；另一方面，可以利用PCR技術檢測病原的部分保守序列對疾病的病原進行確診。李媛等（2007）應用序列分析對引起國內CCPP病原的支原體進行了分子特征研究，結果認為該病原應該歸為Mccp。同時，張莉等、儲岳峰等分別參照Mo、Mmc、Mccp標準株序列設計引物，建立了各病原相應的PCR快速診斷方法［12-14］。另外，鑒于臨床上的復雜性，儲岳峰等、宋勤葉等分別建立了可以同時特異性檢測Mmc和Mo的雙重PCR方法，大大提高了診斷效率，為該病的防治提供了有效的技術支持［15-16］。

3 研究展望

CCPP的流行早已為國內廣大獸醫工作者共識，但直到2007年才有1例Mccp被分離成功和鑒定的報道，這與中國生產實際中CCPP的流行情況存在極大的差異。目前，已知的3種支原體均能引起國內山羊群體羊傳染性胸膜肺炎病，僅通過臨床癥狀和病理觀察難以區分臨床發生的羊支原體肺炎是由哪種病原引起，確診需要進行支原體分離鑒定，但受生長速度慢、培養困難等諸多因素限制，支原體分離率較低。國內外對CCPP的研究將仍然集中在病原的確定及快速診斷方法的建立兩個方面。

雖然分離到的3種病原的血清學特征存在明顯的交叉反應，然而三者的抗原特性、藥敏性等方面均存在較大差別。因此，利用分子生物學技術，根據支原體基因組序列特征研究各支原體株在進化上的關系，并以此為依據進行支原體的分類，為羊傳染性胸膜肺炎病原的確定提供科學依據，是科學防治該疾病的重點方向之一。Mccp株的發現表明該支原體也可能是我國羊支原體肺炎的優勢病原之一，且臨床感染情況更為復雜。因此，引進Mccp標準株，建立Mccp-Mmc-Mo三重PCR技術，是下一步我國羊支原體肺炎病原快速診斷技術的另一重點方向［15］。

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