小兒肺炎支原體感染3種檢測方法陽性率的觀察

李冬盎 官瑞霞

支原體廣泛存在于自然界中，已從所有哺乳動物類和禽類動物體內(nèi)分離到，它們常作為共生菌定植于口腔、呼吸道。支原體可以從它們定植的初始部位播散到身體的其他部位。肺炎支原體是引起人類原發(fā)性肺炎最常見的病原體之一，首先引起上呼吸道感染，然后下行感染病理變化主要是間質(zhì)性肺炎、急性細支氣管炎。除呼吸道感染外，還可以引起腦炎、腎炎、心肌炎、免疫性溶血性貧血等肺外疾病[1]。近年來小兒肺炎支原體感染發(fā)病率呈上升趨勢，如不能及時、準確治療，嚴重影響小兒的身心健康。我院對200例疑似小兒肺炎支原體感染患者同時進行超高倍顯微鏡、支原體快速培養(yǎng)、血清抗體測定3種方法檢測，探討它們在小兒肺炎支原體感染早期診斷的價值，現(xiàn)將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料200例患者中，男122例，女78例，年齡3個月～12周歲，臨床癥狀有咳嗽、咳痰，病程多在1周以上，使用一般抗生素治療效果不佳。

1.2 超高倍顯微鏡法儀器為清華同方THMI-UP超高倍顯微鏡.患者用消毒棉簽采取咽后壁深部的咽腔分泌物，采取時避免觸及舌、腮等部位，以防止污染。取出后將咽拭子上滴加適量生理鹽水，然后在玻片上充分擠壓，使分泌物充分分布于玻片上，最后壓上蓋玻片，置于超高倍顯微鏡下觀察。在超高倍顯微鏡下可見到寄生于上皮細胞中或白細胞中的支原體呈蜂窩狀排列，為細小均勻散在的黑色顆粒、活動性強。觀察10個視野，至少觀察到1個視野內(nèi)上皮細胞有支原體包含體附著或看見不停泳動的支原體;白細胞或吞噬細胞內(nèi)吞噬數(shù)量不等、不能消化、大小不一、泳動異常的支原體判為陽性。

1.3 支原體快速培養(yǎng)法肺炎支原體快速培養(yǎng)基由上海爾健醫(yī)療用品有限公司提供。按照使用說明書操作，用無菌的咽拭子在被檢者口腔咽喉部捻數(shù)次采集分泌物標本，打開培養(yǎng)基瓶蓋，把咽拭子置于瓶內(nèi)攪動數(shù)次后再把咽拭子對著瓶壁擠壓，盡量擠出其中液體，取出咽拭子棄之，蓋上瓶蓋，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h觀察結果。培養(yǎng)基變成清亮的淡黃色為陽性，培養(yǎng)基原來紅色不變或者顏色不清亮的黃色判斷為陰性。

1.4 肺炎支原體抗體檢測試劑由蘭州雅華生物技術有限公司提供。撕開鋁膜袋取出測試板平放，在檢測板右側的加樣孔中加入10 μl血清，再加入100 μl稀釋液后平放，等待3～5 min觀察檢測部視窗的結果，兩根紅線為陽性。

2 結果

超高倍顯微鏡法、支原體快速培養(yǎng)法、血清抗體檢測法3種方法的檢查陽性率見表1。經(jīng)χ2檢驗，超高倍顯微鏡法和支原體快速培養(yǎng)法差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，超高倍顯微鏡法和血清抗體檢測法差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，支原體快速培養(yǎng)法和血清抗體檢測法差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

表1 3種檢測方法陽性率比較

3 討論

支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，是介于細菌和病毒之間能在無活性細胞的人工培養(yǎng)基上生長繁殖的最小微生物。支原體肺炎主要通過飛沫傳播，潛伏期可達2到3周，對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素敏感[2]。支原體肺炎是呼吸道急性感染，尤其是下呼吸道感染的最常見的菌原之一，咳嗽、咳痰等臨床表現(xiàn)多不典型，癥狀多且輕重不一，x線胸片多無特征性改變。早期查體無明顯陽性體征，且常伴有肺外合并癥，容易誤診，確診主要靠實驗室檢查，因此對此病的及時診斷和治療有著積極的臨床意義。支原體的主要檢測方法有:形態(tài)學檢查、支原體培養(yǎng)、抗原檢測、血清學方法和分子生物學方法。超高倍顯微鏡充分運用了現(xiàn)代的光、光電學和醫(yī)學影像學的最新成果，在保持高分辨率的前提下，把普通光學顯微鏡的放大倍數(shù)提高到2萬倍以上。在放大的標本鏡像上面可以直接觀察是否有支原體存在。此方法簡單、方便、快捷，其結果不受支原體數(shù)量和體內(nèi)藥物濃度的影響，對于臨床用藥治療和療效觀察都有很大的幫助。肺炎支原體快速鑒定培養(yǎng)基是一種人工合成的液體培養(yǎng)基，其組成材料是根據(jù)肺炎支原體繁殖所需要營養(yǎng)成分合理配置的一套蛋白質(zhì)、磷脂、碳水化合物、膽固醇、微量元素及復合抑菌因子等混合而成的營養(yǎng)豐富、特異性強的專用培養(yǎng)基，它的原理是快速繁殖增長的肺炎支原體分解葡萄糖產(chǎn)酸使培養(yǎng)基的pH下降，產(chǎn)生的顏色變化來判斷肺炎支原體生長，標本中的其他細菌被加入的青霉素、醋酸鉈和生物抑菌劑抑制[3]。人體感染肺炎支原體以后能夠產(chǎn)生IgM和IgG抗體，IgM抗體出現(xiàn)較早，一般在感染1周出現(xiàn)，3～4周達到高峰，以后逐漸下降。IgM抗體陽性率容易受年齡、時間和B細胞功能和敏感性等影響，這也是抗體檢測法和超高倍顯微鏡法、支原體快速培養(yǎng)法有顯著性差異的原因。

經(jīng)統(tǒng)計學處理，超高倍顯微鏡法和支原體快速培養(yǎng)法差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，超高倍顯微鏡法和血清抗體檢測法差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，支原體快速培養(yǎng)法和血清抗體檢測法差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。支原體抗體檢測雖然目前被臨床接受和廣泛采用，但是受到諸多因素的干擾，假陰性比例比較高。而且實際工作中需要抽取靜脈血，特別是1歲和1歲以內(nèi)的幼兒需要抽取頸靜脈血而不被家長接受，給臨床工作帶來一定的困難。超高倍顯微鏡法和支原體快速培養(yǎng)法雖無顯著性差異，但兩者相比，前者檢查時間短，大約20 min左右即可診斷，后者則需24 h，超高倍顯微鏡法檢測呼吸道感染成本低，結果直觀、準確，患兒和家長容易配合，更具有優(yōu)越性，有較高的臨床應用價值。

[1]楊錫強，易著文.兒科學.第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社:2004:318.

[2]方曉琴.阿齊霉素治療兒童支原體肺炎的體會.兒科藥學雜志，2004，10(2):49.

[3]錢新宏，張國威，許東亮.肺炎支原體鑒定培養(yǎng)基在兒童支原體感染快速診斷中的應用.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2006，21(5):71-72.