Versican在肝細胞癌中的表達

胡行前,周 雄,竇慧強,張科明,王 彤

(江蘇省無錫市人民醫院腔鏡外科,江蘇無錫,214000)

肝癌是我國常見惡性腫瘤之一,死亡率高。早期診斷、早期治療、根據不同病情進行綜合治療是提高療效的關鍵,但總體療效不甚理想,治療失敗和死亡的主要原因是肝癌細胞具有轉移的特性。其中survivin、cappase-3、NF-kB等參與了肝癌發生、發展的調控[1]。最近研究發現[2],細胞外基質蛋白聚糖(Versican)參與細胞黏附、遷移、細胞通訊、增殖、血管生成等多種功能,在腫瘤浸潤、轉移機制中起到關鍵作用。本研究通過免疫組化方法對肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及其癌旁組織測定Versican的表達水平,證實其在腫瘤中的高表達。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取本院2008年～2010年臨床與病理資料完整的HCC患者標本40例(男30例,女10例;年齡41～67歲,平均59.4歲),另取相應癌旁0.5～1.0 cm內肝組織和肝血管瘤旁正常肝臟組織(9例)作為對照。所有標本均經過40 g/L甲醛固定,石蠟包埋,5 μ m 厚連續切片。

1.2 實驗方法

試劑均購自上海索萊寶生物科技有限公司。采用免疫組織化學染色法(SP法),分別檢測3組標本中Versican的表達情況,實驗過程嚴格按照說明書操作。用已知陽性組織切片作陽性對照,每一個指標以PBS液代替一抗作陰性對照。

1.3 免疫組化結果評價標準

使用Leica Qwin病理圖像分析系統,采用雙盲法閱片。

Versican指標以細胞內特定部位出現黃色顆粒,染色強度高于背景的非特異性染色判定為陽性細胞。陽性結果參照文獻進行腫瘤細胞陽性記分。選擇10個高倍視野(×400)進行計數。根據染色程度和染色細胞百分率進行綜合評分,染色程度按癌細胞著色的深淺記分為:基本不著色為0分,呈淺黃色1分,呈棕黃色為2分,呈棕褐色為3分;染色細胞占計數細胞百分率≤5%為0分,6%～25%為1分,26%～50%為2分,≥51%為3分。將每張切片平均染色程度得分與平均染色細胞百分率得分各自相乘,得出該例標本的免疫組化的陽性分度:0～1分為陰性(-),2～3為(+),4～6分為( ),6分以上( )。

2 結 果

Versican陽性率肝癌組織明顯高于癌旁組織(χ2=5.20,P<0.05)及肝正常組織(χ2=17.71,P<0.05),差異有統計學意義;癌旁組織高于肝正常組織(χ2=6.06,P<0.05),差異有統計學意義(表1)。

表1 Versican在肝癌組織、癌旁組織、肝正常組織中的表達

3 討 論

Versican[3-4]是一種分子量很大的硫酸軟骨素蛋白聚糖,由一個氨基端的G1亞基、一個羧基端的G3亞基和二者之間的GAG鏈結合區域所組成。G1區包含一個類免疫球蛋白基元、兩個蛋白聚糖串聯重復序列,又稱透明質酸結合重復序列(HABR)。G3區則由兩個類表皮生長因子重復序列、一個碳水化合物識別區域又稱為類凝集素基元(CRD)及一個互補結合蛋白基元(CBP)所組成。GAG側鏈在不同的組織和分子中都有所不同,根據GAG鏈結合區的不同可分為4個亞型V0、V1、V2和V3。Versican的不同亞型以及能與多種細胞因子結合決定了其功能多樣性。

研究發現[5],增強的Versican表達已在多種不同的人類腫瘤中檢測得到,包括乳房癌、前列腺癌、腦瘤、胃癌、腸癌和皮膚癌。多功能蛋白聚糖可與成纖維細胞生長因子、轉化生長因子等多種因子結合在細胞黏附,遷移,增殖和分化過程中都發揮作用[6-7]。

研究人員發現[8-9],Versican通過Toll樣受體TLR2和TLR6刺激宿主免疫系統中的炎性反應細胞,產生白介素-6和炎性蛋白 TNF-a,TNF-a能增強轉移酶的功能,極大地促進癌細胞的轉移生長。其中受體 TLR2和 TNF-a是Lewis肺癌(lewis lung carcinoma,LLC)轉移的關鍵因素。Versican通過刺激炎癥細胞活性來促進腫瘤轉移。

本研究結果顯示:Versican在HCC組織中陽性表達率72.5%,而在癌旁組織和肝正常組織的表達率分別為47.5%、22.2%,差異有統計學意義(P<0.05);在癌旁組織陽性表達率高于肝正常組織(P<0.05)。我們觀察到Versican陽性表達主要位于癌細胞的胞質和核膜周圍,偶見核內表達(圖1)。這表明HCC組織中Versican呈異常高表達,并且接觸越接近腫瘤浸潤區域,Versican表達越高。提示Versican在HCC的發生發展中可能有重要作用,是預后的不良因子。但Versican陽性表達率是否與肝癌分化程度、有無門靜脈浸潤、腫瘤病灶的單發與多發、腫瘤直徑等有關需進一步研究。

由此可見:①Versican在HCC中特異性高表達,在癌旁組織和肝正常組織的弱表達或者不表達,提示它參與了肝癌的發生與發展;②通過搶奪宿主免疫系統中的炎癥因子,Versican建立了一個炎癥環境,幫助癌癥轉移擴散[10]。Verscican、TLR2的拮抗劑可以抑制腫瘤細胞的活性,因此可以通過改變腫瘤細胞的微環境,來抑制腫瘤的擴散,為腫瘤的治療提供一個新思路。

[1] 秦 安,王 彤.生存素(survivin)在肝癌治療中的研究進展[J].中華肝膽外科雜志,2009,15(12):951.

[2] Wang W,Xu G L,Jia W D,et al.Ligation of T LR2 by versican:a link between inflammation and metastasis[J].Arch Med Res,2009,40(4):321.

[3] Du W W,Yang B B,Shatseva T A,et al.Versican G3 promotes mouse mammary tumor cell growth,mig ration,and metastasis by influencing EGF receptor signaling[J].PLoS One,2010,5(11):e13828.

[4] Ju H,Lim B,Kim M,et al.Genetic variants A1826H and D2937Y in GAG-beta domain of versican influence susceptibility to intestinal-type gastric cancer[J].J Cancer Res Clin Oncol,2010,136(2):195.

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[6] Kischel P,Waltregny D,Dumont B,et al.Versican overexpression in human breast cancer lesions:known and new isoforms for stromal tumor targeting[J].Int J Cancer,2010,126(3):640.

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[9] Domenzain-Reyna C,Hernández D,Miquel-Serra L,et al.Structure and regulation of the versican promoter:the versican promoter is regulated by AP-1 and TCF transcription factors in invasive human melanoma cells[J].J Biol Chem,2009,284(18):12306.

[10] Wang W,Xu G L,Jia W D,et al.Ligation of T LR2 by versican:a link between inflammation and metastasis[J].Arch M ed Res,2009,40(4):321.