金鈕扣不同提取物止咳化痰作用研究Δ

馮承恩，黃慶芳，房志堅(jiān)#，梅全喜（.廣東藥學(xué)院中山校區(qū)，中山市58458；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院，中山市 58400）

金鈕扣，別名一面針、刺茄、山顛茄、金鈕頭或小登茄[1]。來(lái)源于茄科植物水茄Solanum torvumSwartz.的干燥莖和根，有活血、散瘀、消腫、通經(jīng)、止咳、止痛之功效，味辛、微苦，微涼，有小毒[2]。前人對(duì)金鈕扣的研究主要集中在果實(shí)和葉的化學(xué)成分上。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，金鈕扣醇提取物對(duì)止咳、化痰有一定療效，現(xiàn)對(duì)醇提取物作進(jìn)一步的提取分離，尋找止咳和化痰作用的有效部位，以期為臨床應(yīng)用與合理開(kāi)發(fā)利用藥材資源提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

YLS-8A型多功能誘咳引喘儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）；UV1102型紫外分光光度計(jì)（上海天美科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試藥

金鈕扣由廣東益和堂提供，經(jīng)廣東藥學(xué)院中山校區(qū)實(shí)驗(yàn)中心田素英副教授鑒定為真品；氫溴酸右美沙芬片（廣州白云山光華制藥股份有限公司，批號(hào)：20100620）；氯化銨（呼和浩特制藥廠，批號(hào)：20100112）；其他試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

KM種小鼠80只，♀♂兼半，體重18～22 g；豚鼠80只，♀♂兼半，體重150～200 g，均由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2006-0015）。由廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，室內(nèi)溫度控制在（20±2）℃，濕度為60%。

2 方法與結(jié)果

2.1 金紐扣提取物的制備

按常規(guī)回流提取法，用95%乙醇回流提取金鈕扣莖部，濃縮得醇提取物浸膏151.5 g。取95.5 g醇提取浸膏，加水溶解后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取至萃取液無(wú)色為止，濃縮分別得石油醚浸膏6.2 g、氯仿浸膏9.8 g、乙酸乙酯浸膏5.5 g、正丁醇浸膏14.0 g和水溶部分浸膏15.1 g。4℃貯藏，備用。

2.2 金紐扣提取物對(duì)豚鼠枸櫞酸引咳的影響[3]

篩選豚鼠：取豚鼠置于誘咳引喘儀中，17.5%枸櫞酸噴霧1 min，以豚鼠出現(xiàn)響亮的咳嗽聲為標(biāo)準(zhǔn)，記錄5 min內(nèi)豚鼠的咳嗽次數(shù)，次數(shù)多于10次的豚鼠為合格動(dòng)物，用于實(shí)驗(yàn)。

取豚鼠80只，隨機(jī)均分為8組，即空白對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照、金鈕扣醇提取物和金紐扣石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水溶性部分組。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h，金紐扣各提取物組按17.12 g·kg-1ig給藥，每天1次，連續(xù)3 d；陽(yáng)性對(duì)照組于金紐扣各提取物組ig給藥第2天按0.3 g·kg-1ig給予氫溴酸右美沙芬，每天1次，連續(xù)2 d；空白對(duì)照組ig等體積生理鹽水。末次給藥后1 h，將豚鼠放入誘咳引喘儀中，并使豚鼠接受恒壓17.5%枸櫞酸刺激至預(yù)定時(shí)間引咳，噴霧刺激時(shí)間為1 min，記錄豚鼠的咳嗽潛伏期以及在5 min內(nèi)咳嗽次數(shù)。

2.3 金紐扣提取物對(duì)小鼠氣管酚紅分泌的影響[3]

以 5%NaHCO3作為溶劑，測(cè)定濃度為 0.25、0.50、0.75、1.00、1.50、2.00、2.50、3.00 μg·mL-1酚紅的吸光度（OD）值，通過(guò)酚紅濃度和OD值計(jì)算出回歸方程，再根據(jù)回歸方程計(jì)算出各小鼠的氣管酚紅的排泄量。

取小鼠80只，分組同“2.2”項(xiàng)下方法。實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12 h，金紐扣各提取物組按17.12 g·kg-1ig給藥，每天1次，連續(xù)7 d；陽(yáng)性對(duì)照組于金鈕扣各提取物組ig給藥第6天按1 g·kg-1ig給予氯化銨，每天1次，連續(xù)2 d；空白對(duì)照組給予等體積生理鹽水。末次給藥后30 min，ip2.5%酚紅生理鹽水溶液0.5 mL/只，注射30 min后，頸椎脫臼處死小鼠，鈍性分離甲狀軟骨至氣管分支處段氣管，用5%NaHCO3溶液反復(fù)抽洗氣管3次，每次0.5 mL，合并洗出液，裝入試管中，1 500 r·min-1離心10 min，取上清液，用分光光度計(jì)測(cè)546 nm波長(zhǎng)處OD值。根據(jù)回歸方程計(jì)算出酚紅的分泌量，根據(jù)酚紅分泌量和動(dòng)物體重計(jì)算出酚紅校正量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 金紐扣提取物對(duì)枸櫞酸所致豚鼠咳嗽的影響

與空白對(duì)照組比較，金鈕扣乙酸乙酯、正丁醇、醇提物組咳嗽潛伏期顯著延長(zhǎng)（P＜0.05），咳嗽次數(shù)顯著減少（P＜0.05）；金紐扣石油醚、氯仿、水溶部分組咳嗽潛伏期和咳嗽次數(shù)均有改善趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異。金紐扣提取物對(duì)枸櫞酸所致豚鼠咳嗽的影響見(jiàn)表1。

3.2 金紐扣提取物對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量的影響

與空白對(duì)照組比較，金鈕扣乙酸乙酯、正丁醇、醇提物組的酚紅分泌量顯著增加（P＜0.05），酚紅校正值也相應(yīng)顯著增加（P＜0.01）；金紐扣石油醚、氯仿、水溶部分組酚紅分泌量、酚紅校正值有改善趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異。金紐扣提取物對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量的影響見(jiàn)表2。

表1 金紐扣提取物對(duì)枸櫞酸所致豚鼠咳嗽的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effects of extraction of S.paniculata on citric acid-induced cough in guinea pig（s±s，n＝10）

表1 金紐扣提取物對(duì)枸櫞酸所致豚鼠咳嗽的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effects of extraction of S.paniculata on citric acid-induced cough in guinea pig（s±s，n＝10）

與空白對(duì)照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.blank control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別空白對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組金紐扣石油醚組金紐扣氯仿組金紐扣乙酸乙酯組金紐扣正丁醇組金紐扣水溶部分組金紐扣醇提取物組劑量/g·kg-1-0.30 17.12 17.12 17.12 17.12 17.12 17.12咳嗽潛伏期/s 87.8±21.89 152.8±16.60＊＊78.6±19.45 101.3±20.16 138.4±18.94＊137.1±24.57＊76.9±11.23 133.5±19.70＊咳嗽次數(shù)/次16.0±2.8 5.0±1.5＊＊13.0±2.2 9.0±1.9 8.0±2.0＊8.0±2.6＊13.0±3.8 7.0±2.9＊

表2 金紐扣提取物對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量的影響（±s，n＝10）Tab 2 Effects of extraction of S.paniculata on phenol red secretion in mice（±s，n＝10）

表2 金紐扣提取物對(duì)小鼠氣管酚紅分泌量的影響（±s，n＝10）Tab 2 Effects of extraction of S.paniculata on phenol red secretion in mice（±s，n＝10）

與空白對(duì)照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.blank control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別空白對(duì)照組陽(yáng)性對(duì)照組金紐扣石油醚組金紐扣氯仿組金紐扣乙酸乙脂組金紐扣正丁醇組金紐扣水溶部分組金紐扣醇提取物組酚紅校正值/μg·g-1 0.026±0.004 0.055±0.016＊＊0.027±0.012 0.023±0.002 0.045±0.012＊＊0.053±0.024＊＊0.018±0.014 0.045±0.020＊＊?jiǎng)┝?g·kg-1-1.00 17.12 17.12 17.12 17.12 17.12 17.12酚紅分泌量/μg 0.656±0.086 1.338±0.024＊＊0.655±0.087 0.623±0.099 1.014±0.023＊1.262±0.021＊0.563±0.058 1.031±0.069＊

4 討論

金鈕扣為茄屬植物，茄屬植物具有降壓等多種功效[4]，而金鈕扣則有散瘀、通經(jīng)、消腫、止痛、止咳之功效，是中華老字號(hào)廣東益和堂生產(chǎn)的傳統(tǒng)名藥沙溪涼茶的主要成分之一[5]。本課題組前期的研究已發(fā)現(xiàn)金鈕扣水提取物和醇提取物具有止咳和化痰的功效，但以醇提取物的療效更佳。根據(jù)溶劑極性大小，筆者對(duì)醇提取物進(jìn)一步萃取分離，探究金鈕扣止咳、化痰有效成分的部位。結(jié)果顯示，止咳化痰的有效成分主要集中在乙酸乙酯和正丁醇萃取部分，極性較小的石油醚、氯仿和極性較大的水溶性部分未明顯顯示其止咳、化痰的功效。

謝綱等[6]研究發(fā)現(xiàn)，金鈕扣主要成分為生物堿類、黃酮及苷類、甾類、揮發(fā)油、有機(jī)酸及其衍生物等。最近，陸園園等[7]在金鈕扣中發(fā)現(xiàn)甾體、生物堿、皂苷、蘆丁、山柰酚和槲皮素等。另外，舒?zhèn)セ⒌萚8]在金鈕扣95%醇提取物的乙酸乙酯部位分離出酰胺類、甾體、苷類、黃酮和有機(jī)酸等11種成分。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，金鈕扣中的有效成分為生物堿、揮發(fā)油、黃酮類和三萜類等[9]，生物堿、皂苷類往往具有止咳、化痰作用[10]。筆者推測(cè)金鈕扣醇提取物不同萃取物中具有止咳、化痰作用的有效成分可能與生物堿及皂苷類的成分有關(guān)，此為其藥理作用的化學(xué)基礎(chǔ)，下一步將對(duì)其藥理活性進(jìn)行研究。

[1] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊(cè)）[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2001：718.

[2] 梅全喜主編.廣東地產(chǎn)藥材研究[M].廣州：廣東科技出版社，2011：430.

[3] 徐叔云，卞如濂，謝強(qiáng)敏.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)（第3版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：1 359.

[4] 湯丹靈.烏點(diǎn)規(guī)醇溶性成分降壓作用研究[J].中國(guó)藥房，2008，19（9）：659.

[5] 房志堅(jiān)，劉基柱主編.藥用植物學(xué)野外實(shí)習(xí)手冊(cè)[M].廣州：羊城晚報(bào)出版社，2007：121.

[6] 謝 綱，李 沖.茄屬植物化學(xué)成分和生物活性[J].國(guó)外醫(yī)藥植物藥分冊(cè)，2006，21（2）：63.

[7] 陸園園，羅建光，孔令義.水茄的化學(xué)成分[J].中國(guó)天然藥物，2011，9（1）：30.

[8] 舒?zhèn)セⅲ芄庑郏~文才.水茄的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2011，42（13）：424.

[9] 吳冬凡，房志堅(jiān).金鈕扣根化學(xué)成分研究[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，24（2）：139.

[10] 沈映君，陳長(zhǎng)勛.中藥藥理學(xué)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2008：160.