均勻設計法優選胡黃連中胡黃連苷的提取工藝Δ

段曉穎，高衛芳，吳彩麗，張輝（.河南中醫學院第一附屬醫院國家中醫藥管理局中藥制劑三級實驗室，鄭州市 450000；.河南新鄉醫學院第一附屬醫院，衛輝市 45300）

均勻設計法優選胡黃連中胡黃連苷的提取工藝Δ

段曉穎1＊，高衛芳2，吳彩麗1，張輝1（1.河南中醫學院第一附屬醫院國家中醫藥管理局中藥制劑三級實驗室，鄭州市 450000；2.河南新鄉醫學院第一附屬醫院，衛輝市 453100）

目的：優選胡黃連中有效成分胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的最佳提取工藝。方法：選用均勻設計試驗，以胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的總轉移率為指標，考察乙醇濃度、提取時間、提取次數及乙醇用量對胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ提取的影響。結果：最佳提取工藝為胡黃連飲片加65%乙醇10倍量，提取3次，每次2h。結論：所優化的工藝可靠，適用于胡黃連中胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的提取。

胡黃連；胡黃連苷Ⅰ；胡黃連苷Ⅱ；均勻設計；提取工藝

胡黃連為玄參科植物胡黃連Picrorhiza scrophularii flora Pennell的干燥根莖。具有退虛熱、除疳熱、清濕熱的功能，主要用于骨蒸潮熱、小兒疳熱、濕熱瀉痢、黃疸尿赤、痔瘡腫痛，早在《唐本草》就有記載。現代藥理研究表明，本品具有較好的保肝作用，并可促進肝細胞再生，同時具有降血糖、降血脂、抗炎及抗潰瘍的作用[1]。胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ是胡黃連的主要有效成分，為環烯醚萜苷類化合物，是胡黃連及其制劑的主要質量控制指標成分。為了更好的利用胡黃連，提高胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的轉移率，筆者采用均勻設計法進行胡黃連提取工藝研究，考察了提取次數、乙醇濃度、提取時間及乙醇用量對有效成分轉移率的影響，確定了最佳工藝條件。

1 儀器與試藥

LC-10A高效液相色譜儀（日本島津公司）；CP225D電子天平（德國賽多利斯公司）；RE-520旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；DZF-250真空干燥箱（鄭州長城科工貿有限公司）。

胡黃連藥材，購于安徽亳州，由河南中醫學院第一附屬醫院陳天朝主任藥師鑒定為玄參科植物胡黃連P.scrophularii flora Pennell的干燥根莖；胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號分別為111727-20050、111596-20030）；磷酸、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 試驗設計

選擇對提取率影響較大的4個因素：乙醇濃度（X1）、乙醇用量（X2）、提取時間（X3）和提取次數（X4），進行9次均勻設計試驗。因素水平見表1。

2.2 樣品溶液的制備

表1 因素水平Tab 1 Factors and levels

取胡黃連藥材200g，按試驗設計，加入一定濃度、一定體積的乙醇，加熱回流提取，收集提取液，濾過，合并，備用。

2.3 胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ含量測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Agilent XDB-C18柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水-磷酸（35∶65∶0.1）；檢測波長：275nm，流速：1mL·min-1，柱溫：25℃。

2.3.2 對照品溶液的制備 精密稱取胡黃連苷Ⅰ對照品4.97mg、胡黃連苷Ⅱ對照品6.09mg，置25mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品貯備液。精密量取其1mL，置于5mL量瓶中，加甲醇稀釋，搖勻，作為混合對照品溶液（每1mL含胡黃連苷Ⅰ39.76μg、胡黃連苷Ⅱ48.72μg）。2.3.3 供試品溶液的制備 精密吸取各樣品溶液適量，置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3.4 樣品含量測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入色譜儀，按上述色譜條件測定胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ色譜峰面積。分別以峰面積積分值（Y）為縱坐標，胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ進樣量（X）為橫坐標，進行線性回歸，得胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的回歸方程分別為Y胡黃連苷Ⅰ＝2408171.25X胡黃連苷Ⅰ+5921.70、Y胡黃連苷Ⅱ＝977847.69X胡黃連苷Ⅱ+1007.00，r均為0.9999。結果表明，胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的進樣量分別在0.08～0.40、0.12～0.60μg范圍內與各自峰面積積分值呈良好線性關系。根據線性范圍分別計算供試品中胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ含量，并按下式分計算提取液中胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ總轉移率：總轉移率＝胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ總含量×提取液體積/（藥材質量×藥材含量）×100%。

2.4 均勻設計試驗結果及數據處理與分析

以胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ總轉移率為評價指標優選提取工藝。均勻設計試驗結果見表2。

以各因素為自變量，總轉移率為因變量，采用DPS統計軟件進行多元回歸，得方程：Y＝11.0501+0.7444X1+0.8285X2+6.9676X3+17.1388X4（R＝0.9764，F＝20.4624，P＝0.0063），方程不具有顯著性。在此基礎上以a＝0.05水平進行逐步回歸，得方程：Y＝19.1911+6.9817X3+16.9867X4（R＝0.9598，F＝35.1024，P＜0.001），方程具有極顯著性。

由以上方程可知，影響胡黃連中胡黃連苷提取率的各因素作用大小順序為X4＞X3＞X2＞X1，即提取次數＞提取時間＞乙醇用量＞乙醇濃度，其中提取次數和提取時間取值越大越好，即Y值最大。X4、X3的取值分別為3、2；乙醇用量和乙醇濃度在a＝0.05水平下未能進入逐步回歸，說明X4、X3對方程貢獻值較大，而X2，X1對方程貢獻不大，可能X2、X1對胡黃連苷提取率的影響不呈線性，結合SPSS統計學軟件對X2、X1進行三維分析，結果見圖1。

表2 均勻設計試驗結果Tab 2 Results of uniform design test

圖1 三維效應圖A.從X1軸所在平面觀察三維圖；B.從X2軸所在平面觀察三維圖；C.乙醇濃度與乙醇倍數對轉移率的影響Fig 1 Three-dimensional response diagramA.three-dimensional response diagram in the plane of X1axis；B.three-dimensional response diagram in the plane of X2axis；C.effects of alcohol concentration and amounts on transfer rate

由圖1可知，胡黃連提取率與X1、X2呈拋物線相關，Y值最大時X1取值在65%～70%之間均可，X2取值為10。綜合上述分析結果，胡黃連提取的最佳工藝條件為：加65%～70%乙醇10倍量，回流提取3次，每次2h。

為進一步確定最佳工藝參數，對乙醇濃度進行了考察。結果顯示，65%與70%乙醇提取胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ總轉移率分別是94.5%和93.8%，數據接近，為節省資源，最終確定胡黃連醇提最佳工藝參數為加65%乙醇10倍量，回流提取3次，每次2h。

2.5 驗證試驗

按優選工藝對胡黃連中胡黃連苷進行提取，分別提取3次。結果，胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ的總轉移率分別為92.9%、91.5%、93.8%，表明該工藝提取率較高、重現性較好。

3 討論

胡黃連中胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ是環烯醚萜類化合物，易溶于水和甲醇，可溶于乙醇、丙酮和正丁醇等。但因其在水中易被水解，生成的苷元為半縮醛結構，化學性質活潑，容易進一步聚合[2]，通常不用水為溶劑進行提取。筆者也分別以中濃度乙醇回流和水煎法提取胡黃連，比較有效成分的轉移率，發現前者胡黃連苷Ⅰ、Ⅱ轉移率較高。因此，為使有效成分得到充分提取，采用中等濃度乙醇作為提取溶劑。

[1] 楊 潔，李 萍，張玉萌，等.胡黃連的藥理作用研究進展[J].解放軍藥學學報，2003，3（19）：217.

[2] 吳立軍.天然藥物化學[M].北京：人民衛生出版社，1988：229.

Optimization of the Extraction Technology of Picroside from Picrorhiza scrophulariiflora with Uniform Design Method

DUAN Xiao-ying，WU Cai-li，ZHANG Hui（The Third Grade Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine，The First Affiliated Hospital of Henan University of TCM，Zhengzhou 450000，China）
GAO Wei-fang（The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College，Weihui 453100，China）

OBJECTIVE：To optimize the extraction technology of picrosideⅠand picrosideⅡ from Picrorhiza scrophulariiflora by uniform design method.METHODS：Taking total transfer rate of picrosideⅠ and picrosideⅡ as index，the effects of the concentration of alcohol，solvent amount，extraction time and extraction frequency on extraction technology were evaluated by uniform design method.RESULTS：The optimal technology was as follows：10-fold 65%alcohol，extracting for 3times，2hours each time.CONCLUSION：The extraction process is reliable，and it is suitable for extraction of picrosideⅠ and picrosideⅡ in P.scrophulariiflora.

Picrorhiza scrophulariiflora；PicrosideⅠ；PicrosideⅡ；Uniform design；Extraction technique

R284.2；R283

A

1001-0408（2011）39-3675-02

2010-12-06

2011-07-30）