紫外-可見分光光度法測(cè)定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量Δ

陳化，陳竹，梁斌，趙俊，馮子坤（1.貴州興義市人民醫(yī)院，興義市56400；.貴州省人民政府云巖賓館醫(yī)務(wù)室，貴陽市 550004；.貴州興義市吉仁堂藥業(yè)公司，興義市 56400）

紫外-可見分光光度法測(cè)定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量Δ

陳化1＊，陳竹2，梁斌3，趙俊3，馮子坤3（1.貴州興義市人民醫(yī)院，興義市562400；2.貴州省人民政府云巖賓館醫(yī)務(wù)室，貴陽市 550004；3.貴州興義市吉仁堂藥業(yè)公司，興義市 562400）

目的：建立測(cè)定環(huán)草石斛中石斛多糖含量的方法。方法：采用紫外-可見分光光度法，以D-無水葡萄糖為對(duì)照，檢測(cè)波長(zhǎng)為490nm。結(jié)果：D-無水葡萄糖的進(jìn)樣量在0～0.10440mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系（r＝0.9997）；平均加樣回收率為98.09%，RSD＝1.62%（n＝6）。結(jié)論：本法操作簡(jiǎn)便、快捷、結(jié)果準(zhǔn)確，可用于環(huán)草石斛中石斛多糖的含量測(cè)定。

環(huán)草石斛；石斛多糖；D-無水葡萄糖；紫外-可見分光光度法

環(huán)草石斛為蘭科植物環(huán)草石斛Dendrobium loddigesii Rolfe.的新鮮或干燥莖，鮮用者采收后除去根及泥沙；干用者采收后除去雜質(zhì)，用開水略燙或烘軟，再邊搓邊烘曬，至葉鞘搓凈，干燥[1]。多糖類成分是環(huán)草石斛中的一類有效成分，具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力的作用。筆者采用紫外-可見分光光度法測(cè)定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量，以為環(huán)草石斛的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

UV-2450型紫外-可見分光光度計(jì)、AUW120D型電子天平、AUY220型電子天平（日本島津公司）；HS10260D型超聲波清洗器（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司，工作頻率：40kHz，功率：40～100W）。

濃硫酸、苯酚、乙醇均為分析純，水為蒸餾水；D-無水葡萄糖對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110833-200503，供含量測(cè)定用）；環(huán)草石斛采自貴州省興義市環(huán)草石斛主產(chǎn)區(qū)，經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院普春霞教授和楊耀文教授鑒定為真品，標(biāo)本存于貴州省興義市吉仁堂藥業(yè)公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取105℃干燥至恒重的D-無水葡萄糖對(duì)照品適量，加水制成每1mL含0.1044mg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液 取本品粗粉0.15g，精密稱定，置250mL圓底燒瓶中，用5.0mL石油醚（60～90℃）回流提取0.5h，過濾，殘?jiān)鼡]干溶劑后用50mL 80%乙醇回流提取1h，趁熱過濾，殘?jiān)脽?0%乙醇洗滌3次，每次10mL，殘?jiān)鼡]干溶劑后用100mL蒸餾水回流提取2次，每次1.5h，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10mL，合并濾液及洗滌液，放冷，轉(zhuǎn)移至250mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

2.2 測(cè)定方法依據(jù)

以D-無水葡萄糖為對(duì)照品測(cè)定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量，用硫酸-苯酚顯色法，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

分別對(duì)空白（水）顯色前后樣品、D-無水葡萄糖對(duì)照品溶液顯色前后樣品、石斛多糖溶液顯色前后樣品，在紫外-可見分光光度計(jì)上進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，掃描范圍為300～900nm，得吸收光譜，詳見圖1。

從圖1中可以看出，空白（水）顯色前后樣品、D-無水葡萄糖對(duì)照品溶液顯色前樣品與石斛多糖溶液顯色前樣品沒有明顯的吸收峰，而D-無水葡萄糖對(duì)照品溶液顯色后樣品與石斛多糖溶液顯色后樣品在490nm波長(zhǎng)處均有最大吸收，故選擇490nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

圖1 吸收光譜圖A.顯色前的空白樣品（水）；B.經(jīng)硫酸-苯酚顯色后的空白樣品（水）；C.顯色前的D-葡萄糖對(duì)照品溶液；D.經(jīng)硫酸-苯酚顯色后的D-葡萄糖對(duì)照品溶液；E.顯色前的石斛多糖溶液；F.經(jīng)硫酸-苯酚顯色后的石斛多糖溶液Fig 1 Absorption spectrumA.blank sample before color developing（water）；B.blank sample after color developed by phenol-sulphate acid（water）；C.D-glucosum anhydricum control before color developing；D.D-glucosum anhydricum control after color developed by phenol-sulphate acid；E.dendrobium polysaccharide solution before color developing；F.dendrobium polysaccharide solution after developed by phenol-sulphate acid

精密量取對(duì)照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，分別置10mL具塞試管中，加水至2.0mL，加5%苯酚溶液1.0mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5.0mL，放置5min，置沸水浴加熱20min，取出，立即置冰水浴中冷卻2min后取出，室溫放置10min（硫酸-苯酚顯色法）；另以2.0mL蒸餾水同法操作，作空白對(duì)照。照紫外-可見分光光度法[2]在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（c）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為A＝5.17579c+0.00573（r＝0.9997，n＝7）。結(jié)果表明，D-無水葡萄糖的進(jìn)樣量在0～0.10440mg范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

2.5 樣品測(cè)定方法

精密量取供試品溶液1mL，置于10mL干燥具塞試管中，照“2.4”項(xiàng)下方法自“加水至2.0mL”起依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中所含D-無水葡萄糖的重量（mg），計(jì)算，即得。

2.6 精密度試驗(yàn)

取同一樣品適量，顯色后重復(fù)測(cè)定6次吸光度。結(jié)果，RSD＝1.48%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液適量，顯色后分別于0、10、20、30、40、50、60min測(cè)定吸光度。結(jié)果，RSD＝0.32%（n＝7），表明供試品溶液在60min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一環(huán)草石斛藥材粉末適量，照“2.1.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，照上述方法測(cè)定石斛多糖含量。結(jié)果，平均含量為10.11%，RSD＝1.56%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量（10.11%）的同一環(huán)草石斛藥材粉末6份，每份約0.10g，精密稱定，照“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密加入D-無水葡萄糖對(duì)照品溶液（1.0326mg·mL-1）10mL，加水至刻度，搖勻，照上述方法測(cè)定石斛多糖含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery test（n＝6）

2.10 樣品含量測(cè)定

取14批環(huán)草石斛藥材粉末各適量，分別照“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述方法測(cè)定樣品中石斛多糖的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

2010年版《中國藥典》（一部）石斛的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測(cè)定項(xiàng)[2]，環(huán)草石斛的含量測(cè)定方法也未見報(bào)道。以石斛多糖作為含量測(cè)定指標(biāo)，有利于全面評(píng)價(jià)環(huán)草石斛藥用部位的質(zhì)量。因此，本試驗(yàn)對(duì)環(huán)草石斛樣品采用石油醚（60～90℃）脫脂，80%乙醇除去醇溶性糖等，經(jīng)熱水提取水溶性活性成分石斛多糖[3～5]，應(yīng)用紫外-可見分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果證明，該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、專屬性強(qiáng)。

本試驗(yàn)對(duì)14批環(huán)草石斛藥材樣品進(jìn)行含量測(cè)定，得到石斛多糖的含量范圍為5.34%～15.61%，據(jù)此研究結(jié)果建議制定環(huán)草石斛中石斛多糖的含量標(biāo)準(zhǔn)為本品按干燥品計(jì)算，含石斛多糖以無水葡萄糖（C6H12O6）計(jì)，不得少于6.0%。

[1] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2000年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2000：70.

[2] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄30、85.

[3] 孫卓然，劉 圓，李曉云，等.石斛不同種、不同藥用部位中多糖含量測(cè)定[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009，20（8）：1886.

[4] 范俊安，王繼生，張 艷，等.鐵皮石斛組培品與野生品 的形態(tài)組織學(xué)和多糖含量比較研究[J].中國中藥雜志，2005，30（21）：1648.

[5] 黃民權(quán)，黃步漢，蔡體育，等.鐵皮石解多糖的提取、分離和分析[J].中草藥，1994，25（3）：128.

Content Determination of Dendrobium Polysaccharides in Dendrobium loddigesii by UV-VIS Spectrophotometry

CHEN Hua（Xingyi Municipal People’s Hospital of Guizhou Province，Xingyi 562400，China）
CHEN Zhu（Infirmary of Yunyan Guest House of Guizhou Provincial People’s Government，Guiyang 550004，China）
LIANG Bin，ZHAO Jun，F(xiàn)ENG Zi-kun（Xingyi City Jirentang Herbal&Pharmaceutical Co.，Ltd.of Guizhou Province，Xingyi 562400，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of dendrobium polysaccharides in Dendrobium loddigesii.METHODS：UV-VIS spectrophotometry method was adopted.The spectrophotometry was used with D-glucosum anhydricum as control.The detection wavelength was set at 490nm.RESULTS：The linear range of D-glucosum anhydricum was 0～0.10440mg（r＝0.9997）with an average recovery of 98.09%（RSD＝1.62%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，rapid and accurate for the content determination of dendrobium polysaccharides in D.loddigesii.

Dendrobium loddigesii；Dendrobium polysaccharides；D-glucosum anhydricum；UV-VIS spectrophotometry

R284.1；R927.2

A

1001-0408（2011）39-3690-03

Δ國家科技支撐計(jì)劃子課題（2006BAI06A11-11）

＊副主任藥師，執(zhí)業(yè)藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)與藥物研發(fā)。電話：0859-3520567。E-mail：18908597099＠189.cn

2010-10-05

2011-04-14）