TMB在糞便隱血中的應用

葉昌遠

（河源市中醫院，廣東 河源 517000）

糞便隱血試驗是診斷消化道出血，腸道腫瘤的重要指標，對早期發現和診斷消化道出血性疾病有重要意義[1]，TMB作為辣根過氧化物酶的底物廣泛應用于免疫學檢驗，本文通過對200例確診有消化道出血糞便標本，其中133例為上消化道出血，67例下消化道出血，和100例正常人糞便標本分別用匹拉米洞法、鄰聯甲苯胺法、單克隆抗體膠體金試紙條法、TMB法做隱血試驗進行比較，，探討TMB應用于糞便隱血試驗的可行性，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

TMB試劑應用乙型肝炎檢測試劑盒中顯色劑A液B液；匹拉米洞試劑盒；鄰聯甲苯胺法試劑（10g/l鄰聯甲苯胺溶液和3%過氧化氫溶液）；萬華普曼生物工程有限“速而準”潛血試紙。

1.1.2 標本

要求標本新鮮，盛裝容器干燥無污染無吸水性，送檢標本1h內檢驗完成。

1.2 方法

1.2.1 標本檢測

TMB法用竹簽挑取少量糞便涂在消毒棉簽上或濾紙帶上，先滴加B液2～3滴，再加A液2～3滴，2min內觀察顏色變化。10s內出現深綠色為4+；30s出現綠色且顏色逐漸加深為3+；1min出現綠色為2+；1～2min出現淺綠色為1+；2min以上未出現顏色為陰性。匹拉米洞法、鄰聯甲苯胺法、單克隆抗體膠體金法嚴格按照操作說明操作。

1.2.2 靈敏度試驗

挑取黃豆大小正常人糞便加入到刻度試管中，加蒸餾水至2mL刻度并調成糊狀，加入純化血紅蛋白質控品并倍比稀釋成不同濃度的Hb混合液，分別用四種方法檢測。血紅蛋白質控品采用四川省新成生物科技有限責任公司提供經校準的，Hb為110g/l。

1.2.3 特異性試驗

收集雞血、豬血分別用4種方法檢測。

1.2.4 干擾試驗

分別采用VitC和鐵劑加入糞便混合液中，用四種方法檢測。

2 結 果

2.1 標本檢測結果

表2 靈敏度試驗結果

上消化道出血的患者糞便隱血試驗TMB法陽性率低于鄰聯甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于單克隆抗體膠體金試紙條法；下消化道出血的患者糞便隱血試驗TMB法陽性率低于鄰聯甲苯胺法，接近于匹拉米洞法，低于單克隆抗體膠體金試紙條法；TMB法假陽性率低于鄰聯甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于單克隆抗體膠體金試紙條法，真陰性率高于聯甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、低于單克隆抗體膠體金試紙條法，見表1。

2.2 靈敏度試驗結果[2]

TMB法檢出血紅蛋白(Hb)濃度≥3.36μg/mL；匹拉米洞法檢出血紅蛋白濃度≥3.36μg/mL；鄰甲聯苯胺法檢出血紅蛋白濃度≥6.71μg/mL；金標法檢出血紅蛋白濃度0.21～859.38μg/mL。見表2。

2.3 特異性試驗結果

TMB法，匹拉米洞法、鄰聯甲苯胺法特異性試驗均陽性，金標法特異性試驗為陰性。

2.4 干擾試驗結果

在含有大劑量VitC和鐵劑時，TMB法，匹拉米洞法、鄰聯甲苯胺法呈陰性，而金標法不受干擾。

3 討 論

糞便隱血試驗是檢測糞便中微量（出血量少于5mL，肉眼及鏡檢不能發現的）血液的試驗，當消化道、消化器官出血或存在腫瘤時，糞便隱血試驗可出現陽性，糞便隱血試驗對消化性潰瘍和消化道腫瘤的診斷和鑒別有重要意義，消化道惡性腫瘤可呈持續陽性，消化道潰瘍呈間斷陽性[2,3]。糞便隱血試驗大致分為化學法（匹拉米洞法、鄰聯甲苯胺法）和免疫法，本文討論的TMB法也屬于化學法，其原理是紅細胞中血紅蛋白具有類似過氧化酶的作用，催化過氧化氫，氧化TMB而顯示色，從而證實血紅蛋白的存在。

本試驗通過對匹拉米洞法、鄰聯甲苯胺法、單克隆抗體膠體金試紙條法、TMB法的比較表明：①上消化道出血的患者糞便隱血試驗TMB法陽性率低于鄰聯甲苯胺法，接近于匹拉米洞法、高于單克隆抗體膠體金試紙條法；下消化道出血的患者糞便隱血試驗TMB法陽性率低于鄰聯甲苯胺法，接近于匹拉米洞法，低于單克隆抗體膠體金試紙條法。②TMB法和匹拉米洞法最低可以檢出6.7μg/mL的血紅蛋白，鄰聯甲苯胺法最低可以檢出13.4μg/mL的血紅蛋白，金標法最低可以檢出0.21～859.38 μg/mL的血紅蛋白，TMB法靈敏度適中。③TMB法屬于化學法，特異性與干擾性與鄰聯甲苯胺法，匹拉米洞法相同，與人血和動物血都呈陽性反應，易受VitC和鐵劑的干擾，而免疫法具有高度特異性，只與人血呈陽性反應不易受VitC和鐵劑的干擾。

經上述分析TMB法糞便隱血試驗對消化道出血有很高的檢出率，靈敏度適中，適宜臨床常規檢查，但存在特異性不強，易受干擾，不能僅憑單一方法來判斷隱血試驗的結果，應根據患者三天內飲食及用藥情況綜合判斷，以降低假陽性及假陰性率。

[1] 李鵬宇,陳激揚.糞便潛血兩種檢測方法的評價和選擇[J].武警醫學院學報,2009,18(5):458-459.

[2] 黃彥,劉燕玉,王娜.糞便隱血兩種檢測方法的結果比較[J].福建醫藥雜志,2006,28(1):178-179.

[3] 張時民,陳靜.檢驗與臨床診斷.全科醫師分冊[M].北京:人民軍醫出版社,2009:214.