NF-κB基因多態性與中國漢族2型糖尿病及其血管并發癥的關系研究

鄒伏英 王友蓮 何 丹 張 娜

（江西省人民醫院，江西 南昌 330006）

潛在的慢性亞臨床炎性反應是胰島素抵抗（IR）和T2DM的發病機制。核因子-κB（NF-κB）是一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因增強子κB系列（GGGACTTTCC）特異性結合的核蛋白因子[1]，是炎癥信號通路的關鍵因子。NF-κB激活介導了許多炎性因子水平升高，從而引起IR和胰島β細胞功能損傷，最后導致T2DM發生。Apiradee等[2]研究表明，IκB/NF-κB炎癥通路活化是骨骼肌IR的機制。通常情況下，IκB通過自身的重復錨蛋白結構域與NF-κB結合，導致NF-κB不能入核。但NF-κB能為眾多因素激活而游離出來，成為活性狀態進入細胞核，調控炎性反應和免疫應答相關基因的表達[3]。本研究是探討NF-κB的（CA）基因多態性與2型糖尿病（T2DM）及其血管病變的相關性。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

對照組：我院健康體檢者中隨機選取，無糖尿病，年齡 40～80歲；T2DM組：我院住院患者中選取，符合1999年WHO糖尿病診斷標準，年齡40～80 歲。漢族，無血緣關系。

1.2 材料

①熒光標志物為 5’-FAM；②按穩態模式評估法計算IR及β細胞功能；③DNA的抽提、 PCR 擴增；④凝膠電泳分析；⑤基因型分析；⑥測序。

1.3 統計學處理

計量資料用均數±標準差表示，正態資料兩組間比較采用t檢驗，非正態資料應用 Wilcoxon 檢驗；計量資料組間采用χ2檢驗以及 Fisher精確檢驗，統計學處理采用 SPSS13 .0 統計軟件進行。P＜0.01 有顯著差異。

2 結 果

2.1 兩組間一般資料的比較

兩組年齡、性別構成無統計學差異，T2DM組體重指數、腰臀圍比例、低密度脂蛋白、空腹血糖及胰島素均顯著高于對照組，而高密度脂蛋白低于對照組，且均有統計學差異。

2.2 兩組間基因頻率比較

①共發現了14個等位基因，將116bp上的等位基因稱為“A1”型，以此類推118bp（A2）、120 bp（A3）等；②A4 、A5、A7、A8、A9 、A10為常見等位基因。見圖1。

圖1 兩組間基因頻率比較

2.3 兩組間等位基因比較

①等位基因A5在對照組中明顯高于T2DM組；等位基因A9在對照組中明顯低于T2DM組，且均有顯著差異；②常見等位基因A4、A7、A8、A10在兩組中無顯著差異。

2.4 共發現40種基因型

A4 / A5及A5 / A5在 CON 組中均明顯高于T2DM 組；A4 / A9 在CON 組中明顯低于DM 組，且均有顯著差異。

2.5 單純T2DM組（72例）、T2DM并冠心病組（39例）、T2DM并腎病組（49例）三組比較發現，常見等位基因A4 、A5、A7、A8、A9、A10無顯著差異。

3 結 論

①A4 、A5、A7、A8、A9 、A10為中國漢族人常見等位基因；A9可能為參與T2DM發病的基因，而A5可能為T2DM保護基因。②正常人群以基因型A4/A5（16%）及A5/A5（12 %）為主；而T2DM患者以A4/A9基因型為主（22.9 %）。③ 糖尿病組間（不管有無并發癥）其等位基因分布無顯著差異。

4 討 論

胰島素抵抗和B細胞分泌缺陷是2型糖尿病（T2DM）發病機制的兩個主要環節。涉及胰島素抵抗的機制有很多，近10年來，針對大量人群的研究將胰島素抵抗與全身炎癥聯系起來。而NF-κB是一類能與多種基因啟動子部位的κB點發生特異性結合促進轉錄的DNA結合蛋白總稱，它幾乎存在所有細胞中，并能夠和許多基因啟動子區域的固定核苷酸序列結合而啟動基因轉錄，在免疫應答、炎性反應、細胞凋亡和增殖等多種細胞活動中起關鍵的作用。

隨著對T2DM的深入研究，部分已知致病基因的糖尿病從T2DM中獨立出去，但T2DM是一個多基因疾病，且大多數T2DM致病基因不明。 Horikawa等[4]應用SNP 作為遺傳標記通過基于連鎖不平衡的相關分析，在墨西哥裔美國人群和北歐人群中發現了第一個DM易感基因，且與北歐人群的 T2DM 的遺傳易感性相關。近年來，國外大量研究發現炎癥因子NF-κB的基因多態性與T2DM的發病有關。1999 年，Ota[5]等確定了在NF-κB 1靠近編碼區存在這種短串聯重復序列，并且發現了13個等位基因。2001年，Hegaz[6]等通過對 321名英國人的研究發現18個等位基因并且認為等位基因138bp在1型糖尿病的易感性中起到了重要作用。

本研究的結果共發現了14種等位基因，中國漢族人群以A4（122 bp）、A5（124 bp）、A7（128 bp）、A8（130bp）、A9（132 bp）、A10（134bp）等位基因為主；A5等位基因頻率在 CON 組中明顯高于 T2DM組，A9等位基因頻率在T2DM組中明顯高于CON 組。糖尿病組間，不管有無并發癥，其等位基因分布無顯著差異。由于病例資料少，故本研究并不能說明NF-κB的基因多態性在糖尿病血管并發癥中就無意義。期待更多的病例資料來證實。

[1] Singh H,Sen R,Baltimore D,et al.A nuclear factor binds to a conserved sequence motif in transcriptional control elements of immunoglobulin genes[J].Nature,1986,319 ( 6049 ) : 154 -158.

[2] Apiradee S,Roberts CC,Berria R,et al.Reduced skeletal muscle inhibitor of κB β content is associated with insulin resistance in subjects with type 2 diabetes reversal by exercise training[J].Diabetes,2006,55(3):760-767.

[3] Cardozo A K,Heimberg H,Heremans Y,et al.A comprehensive analysis of cytokine-induced and nuclear factor- B-dependent genes in primary rat pancreaticβ-cells[J].J Biol Chem,2001,276(52): 48879- 48886.

[4] Horikawa YOda N,Cox NJ,et al.Genetic variation in the gene encoding calpain-10 is assiociated with type 2 diabetes mellitus [J] .Nat Genet,2000,26 (2): 163 -175.

[5] Ota N.,Nakajima T,Shirai Y,et al.Isolation and radiation hybrid mapping of a highly polymorphic CA repeat sequence at the nuclear factor kappa - beta subunit (NF -κB 1) locus[J].J Hum Genet,1999,144(1):129.

[6] Hegazy DM,O' Reilly DA,Yang BM,et al.NF-κB polymorphisms and susceptibility to type 1 diabetes[J].Genes Immun,2001,2(3):304.