蟲草靈芝合劑對肝損傷小鼠的預防和治療作用

宗序玲 孟國梁 黃金華*

（1 如皋人民醫院藥劑科，江蘇 如皋 225000；2 南通大學藥學院，江蘇 南通 226001）

冬蟲夏草為麥角菌科真菌冬天寄生在蛾科昆蟲的幼蟲體內到夏天形成的干燥子座和蟲體的復合體，簡稱蟲草；主要成分為蟲草多糖，是從冬蟲夏草菌絲中提取的；現代醫學證實，蟲草多糖具有多種藥理學活性，如提高免疫活性、抗腫瘤、抗病毒、降血糖等；靈芝為靈芝菌科靈芝屬真菌的總稱，通常所稱靈芝是指靈芝屬中赤芝的子實體部分，靈芝多糖是靈芝中的主要活性物質，具有免疫調節、抗腫瘤、抗衰老以及活血化瘀等多種生物活性；蟲草靈芝合劑以蟲草多糖為主，佐以靈芝多糖等精制而成。

本研究通過觀察蟲草靈芝合劑對小鼠肝損傷的影響，并初步探討其對肝損傷有預防和保護作用機制，以期為進一步開發利用提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：健康ICR小鼠，體質量18～22g，雌雄兼用，由南通大學動物實驗中心提供，動物許可證號：SCXK[（蘇）2002-0019]；蟲草靈芝合劑（江蘇南通安惠生物科技公司，批號090918），以0.4%CMC配置成溶液；四氯化碳油劑（宜興市第二化學試劑廠，批號20060701）。

1.2 處理

小鼠摘眼球取血，迅速離心，取上層血清冰箱4℃保存，用全自動生化分析儀測定天冬氨酸轉氨酶（AST），丙氨酸轉氨酶（ALT），谷氨酰轉移酶（GGT）。取血同時切取小鼠肝組織放到10%中性福爾馬林中固定處理，其余肝組織置液氮冷凍保存，再經石蠟包埋切片，進行HE染色觀察。

1.3 統計學處理

2 方法與結果

2.1 蟲草靈芝合劑對CCl4致小鼠肝損傷的預防作用

取 ICR小鼠40只，雌雄兼備，隨機分蟲草靈芝合劑低、中、高劑量組和正常對照組4組，每組10只。從分組后第1天起給藥，低、中、高劑量蟲草靈芝合劑灌胃，劑量分別為（40、80、160mg/kg）；正常對照組以生理鹽水灌胃，到第5天每天上午各組繼續給藥，第5天下午小鼠背部皮下注射0.1%CCl4溶液0.lmL/10g（體質量），第6天上午稱完小鼠體質量后摘眼球取血清，置4℃冰箱保存；隨即剖腹取出肝臟，稱重后于10%福爾馬林溶液中固定，以做組織學觀察。結果見表1。

從表1可知，蟲草靈芝合劑中劑量與高劑量組三種酶皆非常顯著低于對照組（P＜0.01）。用藥的高劑量組小鼠體質量較用藥前有顯著增加；正常組及中劑量組也有增加，但于對照組比統計不顯著。對照組體質量無變化，用藥3組每l0g體質量的肝重皆無顯著性差異。

2.2 蟲草靈芝合劑對CCl4致肝損傷小鼠的治療作用

取ICR小鼠50只，雌雄兼備，隨機分為5組，分別為蟲草靈芝合劑低、中、高劑量組、對照組和正常組，每組10只。實驗前稱體質量；給藥組及對照組皆從實驗第1天起從小鼠背部皮下注射1%CCl4油溶液0.lmL/10g（體質量）。同日下午給藥組以蟲草靈芝合劑灌胃，其三組劑量分別為（40、80、160mg/kg）；對照組以生理鹽水灌胃，第2～8天每天上午繼續給藥，第5天下午再重復注射CCl4一次，第8天上午稱小鼠體質量后摘眼球取血清，用賴氏法測定ALT等三種酶。隨后剖腹取肝臟，稱重后于10%福爾馬林溶液中固定，以備組織學觀察。正常組小鼠不給任何藥物，從1～8d以相同條件飼養，至第8天的試驗同其他組。結果見表2。

表1 蟲草靈芝合劑對CCl4致小鼠肝損傷的治療作用(n=10，±s)

表1 蟲草靈芝合劑對CCl4致小鼠肝損傷的治療作用(n=10，±s)

*P＜0.01與對照組比較；△P＜0.01與實驗前比較

對照組 341.3±135.5 149.8±78.6 4.7±37 25.3±1.1 27.6±2.0 0.59±0.06低劑量組 338.9±132.6 142.9±39.7 1.7±1.0 24.8±1.4 25.9±1.8 0.57±0.06中劑量組 202.3±44.1* 88.6±20.3* 1.2±0.7* 24.6±1.7 26.9±2.0△ 0.57±0.05高劑量組 145.6±37.3* 48.3±18.6* 0.9±0.5* 25.3±2.0 28.8±2.1△ 0.58±0.06

表2 對CCl4致小鼠肝損傷的預防作用（n=10，±s）

表2 對CCl4致小鼠肝損傷的預防作用（n=10，±s）

*P＜0.01與對照組比較；△P＜0.01與實驗前比較

對照組 338.8±136.4 153.6±81.3 4.6±3.7 28.6±1.2 29.2±1.4 0.60±0.06正常組 78.3±57.2 14.3±9.1 0.7±0.6 27.9±1.4 28.8±1.9 0.59±0.05低劑量組 324.6±134.8 129.3±40.1 4.4±3.5 26.2±1.8 27.3±1.8 0.60±0.06中劑量組 213.8±51.1* 92.7±34.3* 2.2±0.9* 25.4±1.7 27.8±1.9△ 0.60±0.05高劑量組 155.6±53.3* 55.2±17.9* 1.0±0.8* 25.1±1.6 27.1±1.8△ 0.59±0.06

從表2可見，對照組的ALT、GGT兩種酶約為正常組的幾倍，蟲草靈芝合劑低、中、高3個劑量組的AST 、ALT、GGT皆低于對照組，經t檢驗除低劑量組與對照組比無顯著性差別外，中與高劑量組與正常組比有顯著性增加（P＜0.01） 且各劑量組之間存在量效關系；正常組，對照組與低劑量組的實驗前后體質量無顯著變化，中、高2個劑量組實驗后體質量有所增加，與實驗前差別非常顯著（P＜0.01）。各組之間以每l0g體質量所計的肝重則無顯著性差異，

2.3 病理檢查

實驗各組的小鼠肝臟用10%福爾馬林液固定后，經石蠟包埋病理切片，再經HE染色后鏡檢的結果如下：對照組小鼠因CC14的損傷其肝小葉結構嚴重紊亂，胞質內可見嚴重的脂肪變性，纖維組織顯著增生，纖維間隔大量形成，肝細胞中央帶出現出血性壞死，肝小葉整體呈彌漫性水樣性；蟲草靈芝合劑的低劑量組與對照組相似，未見用藥后有明顯改善；但蟲草靈芝合劑中劑量組只有輕度水樣性病變，且較少有出血性壞死，纖維化明顯改善，顯示肝組織結構正逐步接近正常組；蟲草靈芝合劑大劑量組小鼠肝小葉結構則出現明顯改善，小葉分布均勻，多呈放射狀分布，匯管區內無出血性壞死。

3 討 論

本研究運用四氯化碳的肝損傷小鼠經典模型，配以3種劑量的蟲草靈芝合劑給予灌胃治療，結合血清學指標檢測，結果發現蟲草靈芝合劑能夠明顯降低3種指標酶的血清含量，表明其對受損肝臟有治療作用;此外從組織病理切片上發現用藥組的肝纖維化病變明顯改善，并且呈現劑量相關性。

大量研究顯示[1-3]，肝纖維化的形成 MMP-2是肝臟最重要的致肝纖維化因子，其在肝纖維化中的主要作用是促進細胞外基質的合成并抑制其降解；而靈芝多糖能通過減輕 MM-2對肝臟正常基底膜的破壞，從而間接抑制HSC的激活，阻止肝損傷的進一步發生發展。

國內外對冬蟲夏草已經有較深入的研究[4-7]，發現天然冬蟲夏草具有看氧化作用，可通過清除體內羥自由基，抑制脂質過氧化反應，減少膽固醇沉積，從而減輕肝臟纖維化及對其臟器細胞起保護作用。

蟲草靈芝合劑主要是以冬蟲夏草和靈芝為主的合劑，此實驗結果表明，其具有明顯的抗肝損傷的作用，可以預防和抗肝纖維化，希望通過進一步研究開發來應用于臨床。

[1] 王明宇,劉強,車慶明,等.蟲草靈芝合劑類化合物對3種小鼠肝損傷模型的影響[J].藥學學報,2000,35(5):326-329.

[2] 徐濟良,羅琳,陳潔,等.靈芝三萜對大 鼠肝纖 維化 的保護作用及其機制研究[J].中國醫院藥學雜志,2008,28(9):694-697.

[3] 李敏,仇雯倩,黃金華.靈芝三萜對小鼠肝損傷的預防和保護作用研究現代[J].中西醫結合雜志,2009,18(32):3933.

[4] Komoda Y,Shmize M,Sonoda Y,et al.Ganoderic acid and itsderivatives as cholesterol synthesis inhibitors[J].Chem PharmBull,1989,37(2):531-533.

[5] Zhu M,Chang Q,Wong LK,et al.Triterpene antioxidantsfrom Ganoderma lucidm[J].Phytother Res,1999,13(6):529-531.

[6] Kanzier S,Lohse AW,keii A,et al.TGF-betai in liver fibrosis:an induchic transgenic mouse model to study liver fibrogrnesis[J].AM J Physiol,1999,276(4):1059-1065.

[7] 李保森,游紹莉,趙志海,等.實驗性肝纖維化形成過程中幾種基質金屬蛋白酶表達的研究[J].世界華人消化雜志,2003,11(4):483-485.