癲癇全面強(qiáng)直－陣攣發(fā)作患者的氧化應(yīng)激水平

吳 琴 左 芳 尹義軍

吳 琴，左 芳，尹義軍

湖北省黃石市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，黃石435000

癲癇發(fā)作是大腦神經(jīng)元異常放電引起的一過性腦功能障礙，可導(dǎo)致腦部神經(jīng)元的壞死或凋亡及神經(jīng)生化等改變［1］。全面強(qiáng)直－陣攣發(fā)作（Generalized Tonic－Clonic Seizure，GTCS）是臨床常見的癲癇發(fā)作形式，主要特征為意識喪失、雙側(cè)強(qiáng)直后出現(xiàn)陣攣。研究［2］發(fā)現(xiàn)，癲癇發(fā)作導(dǎo)致機(jī)體氧耗增加、呼吸暫停和血管舒縮功能異常而繼發(fā)腦缺血、缺氧反應(yīng)，氧化性損傷參與癲癇的神經(jīng)組織損傷。8－羥 基 脫 氧 鳥 苷 酸 （8－Hydr oxy－Guanine，8－OHd G）是羥自由基在DNA堿基位置上與脫氧鳥嘌呤核苷酸殘基結(jié)合并進(jìn)一步氧化生成的，通過檢測血清8－OHd G可以間接反映氧化應(yīng)激的水平［3］。本研究通過測定GTCS患者的血清8－OHd G以及超氧化物歧化酶（Superoxide Distamuse，SOD）、丙二醛（Malondial dehyde，MDA）、總抗氧化力（Total Anti－Oxidation Capacity，T－AOC）水平，探討氧化應(yīng)激在癲癇發(fā)作期神經(jīng)組織損傷過程中可能的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年1月～2011年6月在我院神經(jīng)內(nèi)科初診住院的30例癲癇GTCS患者（癲癇組），其中男18例，女12例，年齡19～62歲，平均年齡40.30±11.40歲，均符合1981年國際抗癲癇聯(lián)盟（ILAE）制定的癲癇發(fā)作癥狀學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)。病程4～25年，每年發(fā)作2～12次。其中癥狀性癲癇15例，特發(fā)性癲癇3例，隱源性癲癇12例。同期從本院體檢中心健康體檢人員中選擇30例健康者作為對照組，其性別和年齡與癲癇組相匹配。入選者均知情同意。

1.2 檢測方法

1.2.1 標(biāo)本采集：采集靜脈血5 ml，室溫靜置1h凝固，然后4℃4 000r／min離心10 min，取上層血清，分裝于聚丙烯EP管中，立即凍存于－80℃保存。癲癇組采血時(shí)間為癲癇發(fā)作12h內(nèi)，對照組為清晨空腹。

1.2.2 檢測方法：檢測前從－80℃取出樣本，常溫解凍，所有檢測血清均1次凍融。ELISA檢測血清8－OHd G、SOD、MDA、T－AOC含量。8－OHd G試劑盒購自美國Cay man Chemical Company，SOD、MDA、T－AOC試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。標(biāo)本均為同批測定，各項(xiàng)操作嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行，RT6000型酶標(biāo)儀為深圳霄杜生命科學(xué)有限公司生產(chǎn)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

癲癇組和對照組血清8－OHd G、SOD、MDA和T－AOC水平的比較結(jié)果見表1。癲癇組血清8－OHd G、MDA水平高于對照組（t值分別為3.62和3.07，P＜0.01）；而血清SOD、T－AOC水平低于對照組（t值分別為2.44和3.09，P＜0.01）。

3 討 論

氧化應(yīng)激是指機(jī)體內(nèi)氧自由基生成增加和清除能力降低，導(dǎo)致活性氧類自由基（Reactive Oxygen Species，ROS）在體內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)蓄積而引起的氧化損傷過程［4］。由于氧自由基具有高度化學(xué)反應(yīng)性，其半衰期短暫，因此直接檢測這些活性氧或自由基水平非常困難。臨床常用其氧化產(chǎn)物水平反映氧化應(yīng)激水平作為評估機(jī)體氧化應(yīng)激或者活性氧水平的生物標(biāo)志［5］。DNA損傷是氧化損傷的重要表現(xiàn)之一，當(dāng)DNA受到氧自由基攻擊時(shí)，鳥嘌呤最易被氧化修飾，形成產(chǎn)物8－OHd G［6］，已成為DNA 氧化損傷中常用生物標(biāo)志物。MDA是氧自由基與細(xì)胞膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物之一，其含量可以間接反映體內(nèi)氧自由基的含量和氧化損傷的程度。體內(nèi)自由基的清除主要靠內(nèi)源性自由基清除系統(tǒng)，包括SOD等。T－AOC是體內(nèi)抗氧化物質(zhì)對抗過氧化損傷能力的總和，代表體內(nèi)酶性和非酶性抗氧化物的總體水平，可綜合反映組織和體液對抗氧自由基損傷機(jī)體能力。當(dāng)體內(nèi)氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，氧自由基過多即形成氧化應(yīng)激，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能［7］。本研究采用這幾個(gè)指標(biāo)觀察了GTCS患者氧化應(yīng)激水平的變化。

表1 癲癇組與對照組氧化應(yīng)激水平比較（±s，n均＝30）

表1 癲癇組與對照組氧化應(yīng)激水平比較（±s，n均＝30）

注：與對照組比較，1）P＜0.01

組別 8－OHd G（ng／ml） SOD（U／ml） MDA（n mol／ml） T－AOC（U／ml）0.32±0.08 91.01±12.76 7.21±1.81 10.18±2.33癲癇組 0.41±0.11 1） 80.31±14.19 1） 8.19±1.25 1） 8.94±1.78 1）對照組

癲癇發(fā)作是大腦神經(jīng)元異常放電引起的一過性腦功能障礙，發(fā)作時(shí)大腦神經(jīng)元超同步化放電，因神經(jīng)元缺血缺氧、興奮性氨基酸大量釋放、細(xì)胞內(nèi)Ca2＋超載等多重因素而導(dǎo)致相應(yīng)神經(jīng)元損傷。很早就有病理學(xué)研究顯示，癲癇發(fā)作后存在膠質(zhì)細(xì)胞增生、神經(jīng)元損傷、中樞神經(jīng)髓鞘脫失等病理變化［8］，進(jìn)而出現(xiàn)相應(yīng)的認(rèn)知、情感等高級神經(jīng)功能的減退。

本研究觀察到GTCS后外周血清DNA氧化損傷標(biāo)志物8－OHd G和細(xì)胞膜氧化損傷標(biāo)志物MDA水平較正常對照組升高，而內(nèi)源性自由基清除系統(tǒng)SOD和體內(nèi)抗氧化損傷能力指標(biāo)T－AOC水平較正常對照組降低，證實(shí)癲癇發(fā)作后體內(nèi)氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，氧化應(yīng)激參與了癲癇發(fā)作的病理生理過程，但氧化應(yīng)激與癲癇發(fā)作、神經(jīng)元損傷之間的因果關(guān)系，尚需進(jìn)一步研究。

1 Fisher RS，vall Erode Boas W，Bl ume W，et al.Epileptie seizures and epilepsy：definitions proposed by the international league against epilepsy（ILAE）and the international bureau for epilepsy（IBE）.Epilepsia，2005，46（4）：470～472.

2 Hirseh LJ.Breathing new life into the fight against sudden death in epilepsy.Epilepsy Curt，2009，9（5）：137～139.

3 Wu LL，Chiou CC，Chang PY，et al.Urinary 8－OHd G：a mar ker of oxidative stress to DNA and a risk factor for cancer，atherosclerosis and diabetics.Clin Chi m Acta，2004，339（1～2）：1～9.

4 Singh U，Jialal I.Oxidative stress and atherosclerosis.Pathophysiology，2006，13（1）：129～142.

5 Kehrer JP.Free radicals as mediators of tissue injury and disease.Critical Reviews in Toxicology，1993，23（1）：21～48.

6 Valavanidis A，Vlachogianni T，F(xiàn)iotakis C.8－h(huán)ydroxy－2’－deoxyguanosine（8－OHd G）：A critical biomar ker of oxidative stress and carcinogenesis.J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev，2009，27（1）：120～139.

7 Lushchak VI.Free radical oxidation of proteins and its relationship with functional state oforganisms.Biochemistry（Mosc），2007，72（8）：809～827.

8 Sutula TP，Hagen J，Pitkanen A.Do epileptic seizures damage the brain.Curr Opin Neurol，2003，16（2）：189～195.