原發性肝癌的體外化療藥物敏感性探析

崔茹龍

（吉林省敦化市醫院腫瘤泌尿外科，吉林 敦化 133700）

原發性肝癌是常見的惡性腫瘤之一，惡性度高，且近年來發病有上升的趨勢[1]，原發性肝癌的治療方法較多，現在主張早期徹底、積極的綜合治療，其中，化療在原發性肝癌的治療屬于較為有效的手段之一，但由于患者對藥物的敏感性不盡相同臨床上化療藥物的選擇是進行化療的難題之一，本研究旨在通過測定5例肝癌患者對7種化療藥的敏感率，以探究 原發性肝癌的體外化療藥物敏感性。

1 資料與方法

1.1 入選標準與排除標準

入選標準：符合原發性肝癌的診斷標準（影像學檢查有＞2cm的原發病灶且影像檢查手段超過兩種，AFP超過400μg/L，經組織病理證實為原發性肝癌），無其他嚴重心、肺、腦、腎等嚴重疾病以及貧血等血液方面疾病，之前從未進行過化療，對化療藥物不過敏，在我院進行全程治療并隨訪完整。排除標準：缺乏組織病理檢查，對化療藥物過敏，哺乳妊娠期婦女除外。

1.2 一般資料

選取我院2005年1月至2010年12月間確診的原發性肝癌患者50例，男41例，女9例，年齡17～75歲，平均年齡53歲，所有患者均符合入選標準，患者行手術治療后，第一時間采集新鮮肝癌樣本50例，并在無菌條件下及時送至實驗室。

1.3 化療藥物及其濃度

本實驗所選的化療藥物均為注射液，且均為臨床上常用的治療原發性肝癌的化療藥物，藥物體外濃度根據體內最大血藥濃度：阿霉素（ ADM，意大利進口，0.4μg/mL） 、5-氟脲嘧啶（5-Fu，上海啟東制藥廠產品，10μg/mL） 、順鉑（DDP，錦州九泰藥業有限公司產品，4μg/mL） 、絲裂霉素（ MMC，日本進口，3μg/mL） 、長春新堿（VCR，中國民生藥廠，0.5μg/mL）、羥基喜樹堿（黃石李時珍藥業生產，4μg/mL）、甲氨蝶呤（ MTX，上海12制藥廠產品，2μg/mL） 。

1.4 儀器與試劑

酶標儀、倒置顯微鏡、圖像分析儀、100級工作臺、二氧化碳培養箱、小牛血清、二甲亞砜、四甲基氮唑藍、RPMT-1640培養液、96孔培養板、Ficoll分離液。

1.5 方法

標本處理方法：所有標本均為肝癌患者手術中在無菌環境下切取，將各標本周緣的壞死組織、脂肪以及纖維組織等切掉，剩下生長較好的腫瘤組織塊，將腫瘤組織塊放進D-Hank液中充分洗滌，洗凈之后將組織塊剪成1mm大小的碎塊，將0.25%的胰蛋白酶注入組織碎塊中，并在37°C下放置30min，使組織塊充分消化，然后采用鋼篩進行過濾，制備單細胞懸液，將制備好的細胞懸液放于含Ficoll分離液的分離管中進行離心，取懸液上層的乳白色層，將其放于RPMT-1640培養液，采用臺盼藍染色，并進行活細胞計數，在96孔培養板接種，各孔均加入100μL細胞懸浮液。MTT檢測法：在二氧化碳培養箱中放入96孔培養板，培養箱溫度37°C，5%CO2飽和濕度，培養時間24h，將所有孔分為兩組，實驗孔與對照孔，化療藥物加入實驗孔中，等量PBS液加入對照孔中，延長培養時間至48h，在各孔中加入MTT25μL，在培養6h，在每孔中加DMSO100μL，通過震蕩使藍色結晶盡快溶解，結晶徹底溶解后將培養板放于酶標儀上并測量各個孔的光密度值，檢測波長為570nm。參考波長630nm。計算抑制率，公式為：抑制率=（1-實驗孔平均OD值/對照孔平均OD值）×100%。高度敏感為IR＞50，敏感為30＜IR＜50，不敏感為IR＜30。

2 結 果

經過數據采集，在所檢測的化療藥物中，羥基喜樹堿敏感率最高，為100%，長春新堿敏感率最低，為18%，肝癌患者對化療藥物的敏感率由高到低的順序為羥基喜樹堿＞5-氟脲嘧啶＞絲裂霉素＞順鉑＞阿霉素＞甲氨蝶呤＞長春新堿（表1），各組敏感性具有明顯的差異（P＜0.05）。

表1 體外藥敏試驗結果

3 討 論

原發性肝癌是常見的惡性腫瘤之一，惡性度高，且近年來發病有上升的趨勢，原發性肝癌的治療方法較多，現在主張早期徹底、積極的綜合治療[2]，將多種治療手段序貫結合應用，例如，原發性肝癌動脈化療栓塞治療后合并采用手術切除治療、手術治療后合并采用放、化療等其他治療手段。在原發性肝癌的治療上，采用全身化療取得的臨床效果不明顯，且在患者合并腹水、黃疸以及全身衰竭等情況下不能采用全身化療，同時，肝癌患者對化療藥物的敏感性反應也參差不齊，即使同種病理類型的肝癌敏感性反應也不盡相同，因此，在原發性肝癌的化療中，檢測患者對藥物的敏感性是非常必要的。

在本研究的所用7中化療藥物中，羥基喜樹堿敏感率最高，為100%，長春新堿敏感率最低，為18%，肝癌患者對化療藥物的敏感率由高到低的順序為羥基喜樹堿＞5-氟脲嘧啶＞絲裂霉素＞順鉑＞阿霉素＞甲氨蝶呤＞長春新堿，各組敏感性具有明顯的差異（P＜0.05），5-氟脲嘧啶在臨床治療肝癌中較為常用，但本研究的結果中，敏感率最高的化療藥物為羥基喜樹堿，在臨床應用中，可以考慮將兩種藥物聯合應用，以減少毒副作用以及耐藥性的發生，5-氟脲嘧啶屬抗代謝藥[3]，能夠阻斷DNA的合成以及干擾RNA的合成，羥基喜樹堿能夠與DNA拓撲異構酶發成反應，從而抑制DNA合成，二者合用可以起到更好的療效，長春新堿能夠影響微管蛋白聚合影響癌細胞有絲分裂，并可以干擾蛋白質代謝，對腫瘤具有一定的殺傷作用，但在本研究中，長春新堿的敏感率為18%，在所用7中化療藥物中最低，具體機制有待進一步探究。本研究中所采用的藥敏試驗為MTT比色法，MTT比色法屬于藥敏試驗中的一種，具有簡便、經濟、重復性好的特點，并且能夠篩選多種藥物[4]，可以為臨床上腫瘤個體化治療提供較為可靠的依據。

綜上所述，原發性肝癌對化療藥物的敏感性不同，即使同種病理類型的肝癌同同種化療藥物的敏感性亦有差別，臨床治療應該根據藥敏試驗的結果進行個體化綜合治療。

[1]傅建民,張偉,彭向紅,等.多耐藥相關蛋白在肝細胞中的表達及其臨床意義[J].中華普通外科雜志,1999,26(1) ：22.

[2]余少鴻,嚴律南.多藥耐藥相關蛋白2與肝膽疾病的關系[J].重慶醫學,2005,34(7)： 1092.

[3]姜圣亮,王天翔,項明,等.腫瘤細胞和TIL 對化療藥物敏感性的測定[J].癌癥,2000,19 (12) ： 1119-1123.

[4]李小民,蔣芹,謝曉東,等.MTT 法測定癌細胞對抗癌藥物敏感性的實驗研究[J].四川腫瘤防治,2000,13 (3) ： 145-147.