奧拉西坦膠囊含量測定方法研究

姜 成

（遼寧雪松醫藥連鎖有限公司，遼寧 沈陽 110101）

奧拉西坦是由意大利ISF公司1974年研究開發的吡咯烷酮類衍生物，為新一代腦代謝改善藥，可改善老年性癡呆和記憶障礙癥患者的記憶和學習功能。我國于1991年開始研制，目前已開發上市的制劑有片劑、膠囊、口服溶液、注射劑、凍干粉針、大輸液。目前，奧拉西坦含量的測定方法有柱切換法、柱前衍生化法、凱氏定氮法和高效液相色譜法[1-7]。奧拉西坦類似物吡拉西坦[10]已經收錄在中國藥典中，為了更有效的控制奧拉西坦及其制劑的質量，在參考有關文獻[1-10]與部頒標準WS 1005（X-750）-2002的基礎上，本文采用氮測定法和高效液相色譜法對實驗室自制奧拉西坦膠囊制劑中奧拉西坦含量進行研究，并比較兩種方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀（安捷倫儀器公司）；AUW220D型分析天平（島津儀器制作所）；KQ-300 型超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司)；凱氏定氮瓶。

1.2 試藥

奧拉西坦原料（湖北奧翔精細化工有限公司，純度：99.8%）；奧拉西坦對照品（中國藥品生物制品檢定所，純度：100%，批號：101032-200901）；乙腈（天津市康科德科技有限公司）；奧拉西坦膠囊（自制，批號：110412、11413、110414）；氫氧化鈉（天津市博迪化工有限公司）；硼酸（天津市科密歐化學試劑開發中心）；硫酸（沈陽經濟技術開發區試劑廠）；水為重蒸餾水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 凱氏定氮法

奧拉西坦分子結構中具有酰胺基團，該基團可被氫氧化鈉水解，產生的氨氣用水蒸氣蒸餾，并用硼酸溶液吸收，用標準酸液進行滴定，計算其含量。取本品適量（約相當于奧拉西坦0.2g），精密稱定，參照中國藥典2010年版二部附錄Ⅶ D氮測定法中的第一法[8]，測定本品含量，測定結果，見表2。實驗中空白輔料對測定無干擾，滴定度為每1mL硫酸滴定液（0.05mol/L）相當于7.908mg的C6H10N2O3，方法重復性良好，RSD為0.3%，回收率為99.6%。

2.2 高效液相色譜法

2.2.1 色譜條件

采用Inertsil NH2色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為水-乙腈（20∶80）；檢測波長214nm；流速1mL/min；進樣量20μL。

2.2.2 標準溶液的制備

取奧拉西坦標準品，配制成濃度為每1mL中含奧拉西坦為1mg的標準溶液，備用。

2.2.3 空白供試品溶液的制備

取按處方配制不含奧拉西坦的空白輔料，精密稱定，用流動相制成空白供試品溶液，過濾，備用。

2.2.4 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項下的內容物適量（約相當于奧拉西坦0.05g），精密稱定，溶解后置50mL容量瓶中，流動相定容，濾過，即得。

2.2.5 專屬性試驗

分別取空白供試品溶液、標準品溶液、供試品溶液20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，結果見圖1。

2.2.6 精密度試驗

圖1 A輔料空白；B奧拉西坦標準品；C奧拉西坦膠囊

在上述色譜條件下，取奧拉西坦供試品溶液，連續進樣6次，每次進樣20μL，色譜峰面積RSD為0.20%。

2.2.7 線性關系考察

取奧拉西坦標準品約50mg，精密稱定，溶解后置10mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，再分別精密吸取0.1、0.5、1.0、1.5、2.0至5mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，各稀釋液與母液一起構成系列標準液，各取樣20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以奧拉西坦標準品質量濃度X為橫坐標，以色譜峰面積Y為縱坐標，進行線性回歸分析，結果表明奧拉西坦標準品在0.099～1.998mg/mL質量濃度范圍內，其峰面積與質量呈良好的線性關系，回歸方程為：Y=22250X-122.8，r=0.9999（n=5）。

2.2.8 回收率試驗

取空白輔料與奧拉西坦原料藥，精密稱定，按處方工藝，配成主藥濃度為標示量的80%、100%、120%的模擬樣品各三份，溶解后置100mL量瓶中，水定容至刻度，過濾，取濾液加流動相稀釋4倍，配制成供試液，用0.45μm微孔濾膜過濾，各進樣20μL，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算回收率，結果見表1。

表1 回收率結果

2.2.9 溶液穩定性試驗

取本品適量，按含量測定項下供試品溶液的配制方法操作，制成的供試品溶液于室溫條件下放置，分別在0，2，4，8和24h各進樣20μL，峰面積RSD值為0.4%。表明供試品溶液在24h內是穩定的。

2.2.10 樣品測定

表2 奧拉西坦膠囊中奧拉西坦含量測定結果

按供試品溶液的制備方法制備3批供試品溶液，分別進樣20μL，測定峰面積，計算3批樣奧拉西坦膠囊中奧拉西坦的含量，結果見表2。

3 討 論

奧拉西坦是一種極性很強的小分子物質，水溶性好，在有機相中分配系數小，因此采用高效液相色譜法法測其含量是使用氨基色譜柱。在參考相關文獻和部頒標準的基礎上，本文分別采用氮測定法和HPLC法對奧拉西坦膠囊中奧拉西坦含量進行測定，并對兩種方法進行方法學研究，對3批樣品的含量測定結果進行比較，結果表明兩種方法的方法學試驗結果都可準確的用于本品含量測定，兩種方法測得3批樣品的含量基本一致，但HPLC法具有專屬性強、靈敏度高、重復性好等特點，為更好的控制奧拉西坦制劑質量，建議在制定質量標準中，采用HPLC法測定奧拉西坦制劑含量。

根據測定結果，結合生產實際，擬定本品含量限度：含奧拉西坦（C6H10N2O3）應為標示量的95.0%～105.0%。

[1]崔巍,李健和,陽巧鳳,等.奧拉西坦注射劑中奧拉西坦2種含量測定方法的比較[J].中南藥學,2010,8(11)：845-847.

[2]Lecaillon JB,Souppart C,Le Duiqou F,et al.Determination of oxiracetam in plasma and urine by column 2 switching high performance liquid chramatography[J].J Chrarnatogr,1989,497(12)：223-230.

[3]Pemcca E,Albriei A,Gatti G,et al.Pharmacokinetics of oxiracetam following intravenous and oral administration in healthy volunteers[J].Eur J Drug Metab Pharmacokinet,1984,9(3)：267-274.

[4]林冬,陳詠昕.HPLC法測定奧拉西坦注射液中奧拉西坦的含量[J].廣東藥學院學報,2006,22(1)：51-52.

[5]劉萍,夏釗,彭艷梅.高效液相色譜法測定奧拉西坦口服液中奧拉西坦的含量[J].中南藥學,2008,6(3)：304-306.

[6]國家藥品監督管理局.奧拉西坦質量標準[S].WS-1005(X-750)-2002.

[7]周鳳英,李慧敏,李楠.奧拉西坦膠囊含量測定方法的改進[J].中國藥品標準,2006,7(4)：62-64.

[8]國家藥典委員會.中國藥典,2010版.二部[S].北京：中國醫藥科技出版社,2010： Ⅶ D.

[9]崔躍,張敏月,王紅雷.奧拉西坦膠囊的制備及穩定性考察[J].藥學研究,2008,5(17)：32-33.

[10]國家藥典委員會.中國藥典,2010版.二部[S].北京：中國醫藥科技出版社,2010： 337-339.