Ezrin蛋白和CD44－V6蛋白在結腸腺癌中的表達及其意義

趙樹鵬 齊鳳杰 (遼寧醫學院附屬第一醫院普通外科，遼寧 錦州 121001)

腫瘤的侵襲和轉移是一個多因素參與的多步驟發展過程。研究表明，Ezrin和CD44－V6蛋白在腫瘤的浸潤和轉移過程中起著重要作用。但有些研究結果尚未達成共識。Moilanen等〔1〕報道Ezrin蛋白在卵巢漿液性囊腺癌中表達越低，其預后越差，而Akisawa等〔2〕報道在胰腺癌中Ezrin蛋白高表達則預示患者預后不良。Hiscox等〔3〕在體外結腸癌細胞株研究顯示Ezrin蛋白的缺失與腫瘤細胞的運動能力和侵襲性增加有關。上述研究結果均說明Ezrin蛋白在腫瘤轉移過程中存在著更復雜的作用機制，可能參與腫瘤轉移的多個環節。本研究通過檢測Ezrin和CD44－V6蛋白在結腸癌中的表達情況及其與臨床病理參數之間的關系，探討其在結腸癌侵襲及轉移中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2006年1月至2009年1月遼寧醫學院附屬第一醫院行結腸癌手術切除病例共100例，其中包括癌旁腸組織20例;結腸腺癌80例，高分化17例，中－低分化63例;未侵及全層15例，侵及全層65例;有淋巴結轉移48例，無淋巴結轉移32例。所有病例術前均未采取放療、化療及免疫治療。

1.2 試劑 鼠抗人Ezrin單克隆抗體，鼠抗人CD44－V6單克隆抗體，濃縮型DAB顯色液以及S－P染色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 方法 將蠟塊標本制成4 μm連續切片，經脫蠟、脫苯、水化后進行HE和免疫組化染色。以已知陽性組織為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗為陰性對照。采用雙評分法進行判定，隨機選擇5個高倍鏡視野(400×)，按陽性細胞百分率(A值)評分:＜25%為1分，25～50%為2分，＞50%為3分;按染色強度(B值)評分:無顯色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;染色陽性細胞數與染色強度的乘積得分作為判定標準:0～4分者為陰性;5分以上為陽性。

1.4 統計學處理 采用SPSS13．0統計軟件。計數資料應用χ2檢驗、Fisher精確概率法;等級相關檢驗用 Spearman相關檢驗。

2 結果

2.1 Ezrin和CD44－V6蛋白在結腸癌及癌旁腸組織中的表達 Ezrin和 CD44－V6蛋白分別定位于胞質和胞膜。Ezrin及CD44－V6蛋白在癌旁腸組織中陽性表達率分別為35．0%、25．0%，腸腺癌組織中的陽性表達率分別為83．75%、82．5%，兩種蛋白的陽性表達率分別高于癌旁組織差異顯著(P＜0．01)。

2.2 Ezrin及CD44－V6蛋白在結腸腺癌中的表達與臨床病理參數的關系 Ezrin及CD44－V6蛋白在結腸高分化腺癌組的陽性表達顯著低于低－中分化腺癌組，在有漿膜層浸潤組顯著高于無漿膜層浸潤組，有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組，各組間的表達差異具有統計學意義(P＜0．01)。在Dukes分期中，兩種蛋白在Dukes C、D期的表達顯著高于Dukes A、B期，差異有統計學意義(P＜0．01)。Ezrin及CD44－V6蛋白在結腸腺癌中的表達與性別、年齡、腫物最大直徑無明顯相關性(P＞0．05)。見表 1，圖 1。

2.3 Ezrin及CD44－V6蛋白在結腸腺癌中表達的相關性分析 Ezrin及CD44－V6蛋白在80例結腸腺癌中同時陽性表達的例數為60例，占總數的75．00%(60/80)，而兩者同時陰性表達的例數為7例，占總數的8．75%(7/80)，應用Spearman相關檢驗檢測結腸腺癌中Ezrin及CD44－V6蛋白表達的相關性，兩者表達呈正相關(r's=0．421，P=0．000)。進一步觀察發現，在60例Ezrin及CD44－V6蛋白同時陽性表達的患者中，淋巴結轉移率高達65．0%;7例兩者同時陰性表達的患者，只有1例腸系膜淋巴結出現轉移，轉移率僅為14．29%，兩者表達上的差異具有統計學意義(P＜0．01)。

表1 Ezrin及CD44-V6蛋白在結腸腺癌中的表達與臨床病理參數的關系〔n(%)〕

圖1 Ezrin及CD44-V6蛋白在結腸癌中的表達(SP法，×200)

3 討論

侵襲和轉移是惡性腫瘤的主要生物學特征，惡性腫瘤發生轉移的基礎是腫瘤細胞之間的黏附力下降，因此腫瘤細胞表面黏附分子的去黏附作用在腫瘤侵襲和轉移過程中起著非常重要的作用。Ezrin屬于埃絲蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ERM)蛋白家族，Ezrin蛋白通過調整黏附因子和信號轉導等途徑，參與細胞與細胞、細胞與基質之間的相互作用，從而進一步影響腫瘤細胞侵襲及轉移等生物學行為〔4〕。CD44分子是一種分布廣泛的細胞表面黏附分子，是細胞與細胞、細胞與細胞外基質(ECM)相互識別和作用的分子基礎，并且具備一系列的生理功能。某些CD44分子的異常表達可顯著提高惡性腫瘤細胞的轉移能力，與惡性腫瘤轉移密切相關〔5〕。有研究發現，Ezrin與CD44及其變異體形成復合物，在腫瘤細胞中共同表達〔6〕。本研究結果提示結腸腺癌的發生及浸潤轉移潛能的獲得可能與Ezrin與CD44蛋白的表達上調有關。Ezrin與CD44兩種蛋白在結腸腺癌的發生發展中可能起著協同作用。CD44－V6蛋白通過與其細胞內羧基端與Ezrin蛋白連接，影響細胞骨架的構象，從而改變腫瘤細胞的運動能力。本研究亦為上述的觀點進一步提供了實驗佐證。但腫瘤的侵襲和轉移是一個復雜的過程，Ezrin蛋白在腫瘤轉移過程中扮演不同的重要角色〔7〕。Khanna 等〔8〕和 Yu〔9〕等通過實驗表明，Ezrin 在具有高轉移特性的鼠橫紋肌肉瘤及骨肉瘤細胞株中高度表達，抑制橫紋肌肉瘤細胞及骨肉瘤細胞中Ezrin的表達能顯著抑制腫瘤的肺轉移，提示Ezrin蛋白是腫瘤轉移的關鍵因素，并且Ezrin蛋白的表達與腫瘤的預后密切相關。但另有一些研究發現，卵巢漿液性囊腺癌中Ezrin的低表達提示預后差，因此，Ezrin蛋白在腫瘤轉移過程中存在著更復雜的作用機制。

1 Moilanen J，Lassus H，Leminen A，et al．Ezrin immunoreactivity in relation to survival in serous ovarian carcinoma patients〔J〕．Gynecol Oncol，2003;90(2):273－81．

2 Akisawa N，Nishimori I，Iwamura T，et al．High levels of ezrin expressed by human pancreatic adenocarcinoma cell lines with high metastatic potential〔J〕．Biochem Biophys Res Commun，1999;258(2):395－400．

3 Hiscox S，Jiang WG．Ezein regulates cell－cell and cell－matrix adhesion，a possible role with E－cadherin/beta－catenin〔J〕．J Cell Sci，1999;112(18):3081－90．

4 M?kitie T，Carpén O，Vaheri A，et al．Ezrin as a prognostic indicator and its relationship to tumor characteristics in uveal malignant melanoma〔J〕．Invest Ophthalmol Vis Sci，2001;42(11):2442－9．

5 Slven M，Krupinski J，Gaffney J，et al．Hyaluronan－mediated angiogenesis in vascular disease:uncovering RHAMM and CD44 receptor signaling pathways〔J〕．Matrix Biol，2007;26(1):58－68．

6 Set?l? L，Lipponen P，Tammi R，et al．Expression of CD44 and its varant isoform v3 has no prognostic value in gastric cancer〔J〕．Histopathology，2001;38(1):13－20．

7 McClatchey AI．Merlin and ERM proteins:unappreciated roles in cancer development〔J〕?Nat Rev Cancer，2003;3(11):877－83．

8 Khanna C，Wan X，Bose S，et al．The membrane－cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis〔J〕．Nat Med，2004;10(2):182－6．

9 Yu Y，Khan J，Khanna C，et al．Expression profiling identifies the cytoskeletal organizer ezrin and the developmental homeoprotein Six－1 as key metastatic regulators〔J〕．Nat Med，2004;10(2):175－81．