p53和c-erbB-2的表達與胃癌浸潤的多因素分析

沈長兵,喻 鋼

(揚州大學醫學院附屬姜堰市人民醫院普外科,江蘇姜堰,225500)

胃癌的發生和發展牽涉許多腫瘤抑制基因和腫瘤相關基因,其中較為引人注目的是p53和c-erbB-2。大量研究表明,p53和c-erbB-2與胃癌的生物學行為密切相關,但對其在胃癌發展過程中的作用則尚未完全明了。浸潤性生長是胃癌最具特征性的生物學行為之一,我們采用免疫組化的方法對不同浸潤深度的胃癌手術切除標本進行研究,初步探討p53和c-erbB-2的表達與胃癌浸潤的關系。

1 材料和方法

收集姜堰市人民醫院普外科2005年5月至2008年5月行手術切除的胃癌病例139例,均經病理證實,包括黏膜內癌23例、浸潤至黏膜下層31例、浸潤至肌層47例、浸潤至漿膜38例。其中男性78例,女性61例,年齡最大 77歲,最小38歲。胃癌病例術前均未經放療、化療。

p53和c-erbB-2鼠抗人單克隆抗體(Santa Cruz公司),免疫組化SP試劑盒和DAB顯色試劑盒(北京中山生物技術有限公司)。

標本常規福爾馬林固定,石蠟包埋切片,分別作蘇木精-伊紅(HE)和免疫組化染色。采用免疫組化SP試劑盒檢測,操作按說明書進行。用已知陽性切片作陽性對照,PBS代替一抗作陰性對照,光鏡觀察。

p53、c-erbB-2均以細胞核或細胞核伴有胞漿出現棕黃色顆粒作為陽性細胞,只有胞漿陽性視為非特異染色。按陽性細胞率分:陽性細胞數無或<10%為(-),陽性細胞數≥10%為弱陽性(Ⅰ),陽性細胞數≥25%為陽性(Ⅱ),陽性細胞數≥50%為強陽性(Ⅲ)[1]。

2 結 果

2.1 不同浸潤深度的胃癌中p53的表達陽性率及強度比較(表1)

表1 不同浸潤深度的胃癌中p53的表達陽性率及強度比較

2.2 不同浸潤深度的胃癌中c-erbB-2的表達陽性率及強度比較(表2)

表2 不同浸潤深度的胃癌中c-erbB-2的表達陽性率及強度比較

2.3 p53和c-erbB-2的陽性表達與胃癌浸潤深度的關系(表3)

表3 p53和c-erbB-2的陽性表達與胃癌浸潤深度的關系

多分類有序反應變量logistic回歸分析,將p53和c-erbB-2的表達強度與胃癌浸潤深度進行累計 Logit回歸模型多因素分析(Ordinal過程)。以胃癌浸潤深度為有序分類應變量。似然比檢驗,χ2=47.134,P=0.000<0.05,模型擬合有統計學意義;適合優度檢驗,Pearson檢驗,χ2=6.179,P=0.519,Deviance檢驗,χ2=8.330,P=0.304,模型擬合良好;平行性檢驗,χ2=6.513,P=0.164,平行性成立。

2.4 p53和c-erbB-2的表達強度與胃癌浸潤深度的關系(表4)

表4 p53和c-erbB-2的表達強度與胃癌浸潤深度的關系

多分類有序反應變量logistic回歸分析,將p53和c-erbB-2的表達強度與胃癌浸潤深度進行累計 Logit回歸模型多因素分析(Ordinal過程)。以胃癌浸潤深度為有序分類應變量。似然比檢驗,χ2=67.120,P=0.000<0.05,模型擬合有統計學意義;適合優度檢驗,Pearson檢驗,χ2=24.845,P=0.962,Deviance檢驗,χ2=29.358,P=0.869,模型擬合良好;平行性檢驗,χ2=14.784,P=0.253,平行性成立。

3 討 論

p53基因是抑癌基因,位于人類17號染色體17p13.1[2],編碼相對分子質量為530 00的磷酸化蛋白,可分為野生型和突變型。正常的p53基因又稱野生型p53基因,是腫瘤抑制基因,通過產生p53蛋白參與細胞周期和細胞增殖的調節,防止細胞癌變。因為正常細胞中p53蛋白含量較低,半衰期短,所以正常組織測不到p53蛋白表達。當p53基因發生突變時,所表達的p53蛋白構型發生變化,穩定性增加,在細胞內半衰期延長,這種構型發生變化的蛋白具有促進正常細胞惡性轉化,導致細胞惡性增殖的功能,此時惡變組織中可檢測出p53蛋白,p53蛋白積聚意味著其抑癌功能喪失[3]。

c-erbB-2基因(又稱HER2/neu)是癌基因,定位于人類染色體17q21,編碼產物為185 000的糖蛋白[4],即c-erbB-2蛋白(ERBB2)。它和表皮生長因子受體(EGFR)具有高度同源性,同屬于受體酪氨酸激酶(RTK)Ⅰ家族,該家族包括 ERBB1(EGFR)、ERBB2、ERBB3和ERBB4。ERBB受體家族成員間形成異源二聚體是ERBB受體家族介導細胞信息傳遞的普遍方式,在形成異源二聚體的過程中,ERBB2是其他家族成員優先選擇的對象[5]。在生理條件下,ERBB2與其他RTKⅠ受體形成異二聚體而被激活,參與細胞關鍵功能的調控,涉及細胞生存、增殖、凋亡、遷移和分化。當某些因素導致ERBB2過表達時,將導致異常的ERBB2同型二聚體形成以及通過包含ERBB2的異二聚體增強信號傳遞,導致RTKⅠ調控網絡瓦解,并具有腫瘤轉化活性[6]。

作者用免疫組化的方法對139例胃癌標本進行了研究,結果顯示p53的陽性率為48.9%,而c-erbB-2的陽性率則為44.6%(表1、2)。在不同浸潤深度的胃癌中,p53和c-erbB-2的陽性率并不相同,隨著浸潤深度的增加,p53和 cerbB-2的陽性率都顯示出一種上升的趨勢(分別P<0.05、P<0.01),與張志強等[7]的研究結果基本一致。但p53的表達強度在不同的浸潤深度沒有顯著差別;而c-erbB-2則隨著胃癌浸潤深度的增加,其表達強度也隨之增強,在胃癌浸潤至漿膜或漿膜外時,其表達強度最高。

本研究結果顯示:p53及c-erbB-2的陽性表達對胃癌的浸潤均有促進作用,OR值分別為1.972和8.256。進一步分析p53和c-erbB-2的表達強度的影響,結果顯示:c-erbB-2在任何表達強度對胃癌浸潤深度均有影響,且OR值隨著表達強度的增加而逐步上升;p53只有在達到較大的表達強度時,才對胃癌浸潤深度有影響。

作者還發現,p53和c-erbB-2表達的時機也不相同。在胃癌發生最初的黏膜內癌階段就已經出現p53過表達的現象(陽性率達30.4%),此時并沒有出現c-erbB-2過表達,在胃癌進展到黏膜下癌階段開始浸潤發展時c-erbB-2過表達的現象才開始出現,2者都伴隨著胃癌浸潤發展的全過程。實際上,p53的表達并不是從黏膜內癌階段才開始的。有研究發現[8],在幽門螺旋桿菌相關慢性胃炎的病例中就已經有p53蛋白的陽性表達,并且陽性率與胃黏膜萎縮及化生等癌前病變密切相關。Zhang等[9]在對轉基因小鼠的研究中發現,在已經發生p53基因突變的小鼠中,p53依賴的細胞凋亡減少可以促進口腔癌與胃食管癌的生長和演化。而 Lee等[10]則發現,ERBB2過表達在進展期胃癌中存在,ERBB2突變導致ERBB2介導的信號途徑的改變可能促成癌癥的發展。在乳腺癌的研究中,認為p53基因功能的崩潰在致癌過程中發揮中樞作用[11],而在高分化的病例中c-erbB-2的擴增被認為是一個獨立的預后因素[12]。推測p53的突變與胃癌的起源相關,并且在胃癌的發展過程中,由于突變的p53失去了抑癌功能,不能修復損傷的DNA,有利于癌基因激活并發揮作用。

[1] 任秋華,肖明明,侯慧,等.ER,PR,CerbB-2,p53和Ki67蛋白在乳腺癌中的表達及其意義[J].中國腫瘤臨床與康復,2010,17(1):13.

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[6] Gilbertson RJ.ERBB2 in pediatric cancer:innocent until proven guilty[J].Oncologist,2005,10(7):508.

[7] 張志強,姜林,李斌,等.P53、C-erbB-2和 VEGF在胃癌中的表達及其臨床意義[J].武警醫學院學報,2010,19(7):513.

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