磷酸二酯酶選擇性抑制劑吡拉米司特抗炎作用的實驗研究

許 格，李 軍

(四川省廣元市第二人民醫院藥劑科，四川 廣元 628017)

磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDF4)抑制劑通過調節細胞內第二信使cAMP及cGMP的水平，對細胞活動起重要調控作用，從而發揮多種生物效應［1］。近年來，選擇性PDF抑制劑的潛在價值被重新認識，而具有抗炎和平滑肌舒張活性的磷酸二酯酶Ⅳ(PDF4)抑制劑的治療用途同樣得到學者的重視［2］。本研究采用角叉菜膠誘導小鼠腹腔中性粒細胞聚集及小鼠足趾腫脹模型，觀察腹腔灌洗液白細胞總數、中性粒細胞數量，以及足趾腫脹程度，為新一類抗炎免疫調節藥物治療炎癥性疾病和哮喘提供理論和實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 健康ICR小鼠50只，雄性，體重(20±5)g;角叉菜膠(遼寧省約物研究所提供)溶于生理鹽水中，配置成10 g/L的溶液，超聲2 h;吡拉米司特(相對分子質量381.26，北京昭衍中心，批號:20010411)懸液加入10 g/L羥丙基甲基纖維素溶液中，配成所需懸液;吲哚美辛(SIGMA公司，批號:065K1378)加人10 g/L羥丙基甲基纖維素溶液中，配成所需懸液;羥丙基甲基纖維素(HPMC);肝素(華美生物工程公司，批號:0470);C011型928560光學顯微鏡(日本OLYmpus公司);Eppendorf高速冷凍離心機(德國Eppendorf公司);灌洗液:配置含5 IU/L肝素的生理鹽水，臨用前配置。

1.2 分組與模型的建立 50只小鼠隨機分為6組，分別為正常組、模型組、吡拉米司特低、中、高3個劑量組和吲哚美辛組。

1.2.1 小鼠腹腔炎模型 除正常組外，另5組均灌胃給藥PDF4(劑量0.2 ml/10 g)，均用角叉菜膠2 mg/kg每只0.5 ml腹腔注射致炎。致炎8 h后用相同劑量再灌胃給PDF4一次。模型組以10 g/L羥丙基甲基纖維素懸液灌胃，吡拉米司特低、中、高3個劑量組分別以吡拉米司特1、3、10 mg/kg懸液灌胃;吲哚美辛組以吲哚美辛懸液2 mg/k灌胃。

1.2.2 小鼠足趾腫脹模型 除正常組外，其余5組均灌胃給藥PDF4(劑量0.2 ml/10 g)，均用1%角叉菜膠于右側足趾皮下注射，每個足趾0.05 ml;生理鹽水于左側足趾皮下注射，每個足趾0.05 ml。于足趾致炎4h后采用頸椎脫臼法處死小鼠，并于膝關節中縫處分別剪下左右足趾，分別稱重，比較取其差值(mg)。

1.3 數據觀測 ①腹腔致炎24 h后采用頸椎脫位法處死小鼠。每只小鼠腹腔注射灌洗液5 ml，輕揉片刻后吸出腹腔灌洗液。將腹腔灌洗液低溫2000 r.min－1離心10 min后，棄去上清液，用移液器打勻后涂片。待涂片在室溫下干后，Wright-Giemsa染色10 min。用自來水小心將染料沖洗干凈，在光學顯微鏡40倍鏡下進行白細胞分類計數。②足趾腫脹模型組于足趾致炎4 h后采用頸椎脫位處死小鼠并于膝關節中縫處分別剪下左右足趾，分別稱重，比較其差值(mg)。

1.4 統計學方法 數據資料以均數±標準差表示，采用SPSS 12.0統計軟件處理，t檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 吡拉米司特對角叉菜膠誘導小鼠腹腔炎的影響 表1顯示，角叉菜膠致炎的模型組與正常組比較，腹腔灌洗液白細胞總數明顯升高(P＜0.01)，中性粒細胞數明顯上升(P＜0.01)吡拉米司特3及10 mg/kg劑量、吲哚美辛2 mg/kg可明顯減少白細胞總數(P＜0.05)和中性粒細胞數(P＜0.01)，但吡拉米司特1 mg/kg劑量組與模型組相比較差異無統計學意義(P＞0.05)。吡拉米司特呈劑量依賴性抑制中性粒細胞數。

表1 吡拉米司特對角叉菜膠誘導小鼠腹腔炎的抑制作用和對角叉菜膠致炎小鼠足趾腫脹的影響

2.2 吡拉米司特對角叉菜膠誘導小鼠足趾腫脹的影響 模型組足趾腫脹程度明顯增高，與正常組比較，差異有統計學意義(P＜0.01)。吡拉米司特3和10 mg/kg劑量、吲哚美辛組足趾腫脹程度明顯減輕，與模型組比較，差異有統計學意義(P＜0.05);吡拉米司特l mg/kg劑量組雖然足趾腫脹程度有所降低，但差異無統計學意義(P＞0.05)。

3 討論

本實驗用角叉菜膠小鼠腹腔注射來建立腹腔炎模型，具有制備方便、模型成熟時間短(白細胞總數和中性粒細胞數量均在24 h后達到高峰)等特點，其主要特點是中性粒細胞數量明顯增高(本次實驗中中性粒細胞達到了70%的比例)，通過檢測中性粒細胞的數量可以有效地評價急性炎癥的程度。用角叉菜膠制備足趾腫脹模型是一種常用且較為理想的炎癥模型，其腫脹程度在制備4h后最為明顯，并且檢測方便。為避免因個體差異引起的誤差，通過比較足趾腫脹的程度來驗證和分析吡拉米司特藥效學作用。

孫超淵等［3］報道，吡拉米司特在多種動物模型上能抑制白細胞的數量。本實驗證明了吡拉米司特對角叉菜膠誘導的腹腔炎模型，能有效地抑制中性粒細胞的募集，并且對由角叉菜膠誘導的足趾腫脹模型有明顯的抑制和治療作用，證實PDF4抑制劑具有明顯抗炎、抗過敏、抗血小板活化作用。有人認為PDF4抑制劑的抗炎仵用僅次于腎上腺皮質激素［4，5］。本實驗結果顯示，吡拉米司特可以明顯呈劑量依賴性降低致炎小鼠的白細胞總數及中性粒細胞數量和比例，可以明顯降低致炎小鼠的足趾腫脹程度。因此，吡拉米司特能抑制白細胞的激活與游走和中性粒細胞的募集，對炎癥反應有較好的抑制和治療作用;對角叉菜膠制備的足趾腫脹模型也有較好的抑制作用，具有開發價值。

［1］ Richard FJ.Regulation of meiotic maturation［J］.J Anim Sci，2007，85(13 Suppl):E4-6.

［2］祁紅，張勇，陳紅專.新型磷酸二酯酶Ⅳ抑制劑Ariflo對內皮素－1誘發離體人子宮平滑肌收縮的影響［J］.中國臨床藥理學與治療學，2004，9(3):299-301.

［3］孫超淵，張莉，程克棣，等.磷酸二酯酶4研究進展［J］.中國藥理學通報，.2006，22(10):1161-1166.

［4］Palmer MJ，Bell AS，Fox DN，et al.Design of second generation phosphodiesterase5inhibitors［J］.Curr Top Med Chem，2007，7(4):405-419.

［5］Omori K，Kotera J.Overview of PDEs and their regulation［J］.Circ Res.2007，100(3):309-327.