昆布多糖對(duì)家兔血小板聚集和釋放的影響＊

曾惠芬，徐 露

(1.南方醫(yī)科大學(xué)附屬小欖醫(yī)院，廣東 中山 528415;2.重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院·重慶市生化與分子藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400016)

昆布為海帶科植物海帶或翅藻科植物昆布的干燥葉狀體，含藻膠酸、氨基酸、多糖、甘露醇、多種維生素和豐富的碘。昆布多糖(thallus laminariae polysaccharides，TLP)是昆布的主要活性成分之一，現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，其具有調(diào)脂、改善血液流變學(xué)異常等作用，能抑制花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶和氯化鈣誘導(dǎo)的血小板聚集[1]。筆者觀察了昆布多糖對(duì)血小板活化因子(PAF)誘導(dǎo)的血小板聚集和釋放作用的影響，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

TYXN－96型多功能智能血液凝聚儀(上海通用技術(shù)研究所);ELX－800型酶標(biāo)儀(美國(guó)寶特公司)。日本大耳白兔，體重(2.0±0.2)kg，雌雄各半，由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。昆布多糖(上海百沃科技有限公司);血小板活化因子(Cayman公司，溶解在pH=7.6的含0.25%小牛血清蛋白的Tris－NaCl溶液中，濃度為3.6 nmol/L);枸櫞酸鈉(北京中杉金橋生物技術(shù)公司，用蒸餾水配制成3.8%的溶液。雙抗夾心放射免疫測(cè)定試劑盒(天津四方放射醫(yī)學(xué)研究所)。

1.2 試驗(yàn)方法

分組及給藥方法:取日本大耳白兔40只，隨機(jī)均分為生理鹽水(對(duì)照)組、昆布多糖高劑量組、昆布多糖中劑量組和昆布多糖低劑量組，每組10只。各組每天灌胃給藥1次，高、中、低劑量組昆布多糖灌胃劑量分別為400，200，100 mg/kg，生理鹽水組給予等容積生理鹽水。

血小板聚集率測(cè)定:各組動(dòng)物給藥3 d后，心臟取血6 mL，用3.8%枸櫞酸鈉1∶9抗凝，800 r/min離心10 min，取上清液得富血小板血漿(PRP)，剩余部分以3000 r/min離心15 min，得貧血小板血漿(PPP)。用貧血小板血漿調(diào)節(jié)富血小板血漿，使富血小板血漿血小板數(shù)目為360×109/L。測(cè)定并記錄在1 μL血小板活化因子誘導(dǎo)劑下1 min和5 min血小板聚集率及最大血小板聚集率。血小板聚集抑制率(%)=(對(duì)照組血小板最大聚集率－給藥組血小板最大聚集率)/對(duì)照組血小板最大聚集率×100%。

血漿GMP－140含量測(cè)定:取100 μL富血小板血漿，加入1 μL的血小板活化因子，誘導(dǎo)血小板顆粒膜蛋白(GMP－140)的釋放。另取10只健康家兔富血小板血漿100 μL，不加入血小板活化因子，作為陽(yáng)性對(duì)照。用雙抗夾心放射免疫法測(cè)定各組血漿GMP－140含量，酶標(biāo)儀讀取數(shù)據(jù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)均以表示，組間比較采用 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 家兔血小板聚集率檢測(cè)結(jié)果

和生理鹽水組相比，高、中、低3種劑量的昆布多糖均能抑制血小板活化因子誘導(dǎo)的家兔血小板聚集(P＜0.05或 P＜0.01)，隨著劑量的增加，血小板聚集抑制率增高。見(jiàn)表1。

表1 家兔血小板聚集率檢測(cè)結(jié)果(，n=8)

表1 家兔血小板聚集率檢測(cè)結(jié)果(，n=8)

注:與生理鹽水組相比，▲P ＜0.01，△P ＜0.05。

組別 劑量(mg/kg)生理鹽水組昆布多糖高劑量組昆布多糖中劑量組昆布多糖低劑量組等容積4002001001 min 33.36 ± 5.8121.22 ± 4.23▲24.36 ± 4.42▲26.43 ± 4.72△給藥后聚集率(%) 聚集抑制率(%)5 min 64.27 ± 7.4833.16 ± 6.35▲39.02 ± 6.26▲41.21 ± 6.48▲最大聚集率68.58 ± 10.1741.47 ± 5.83▲44.45 ± 6.10▲54.66 ± 8.24△39.5335.1920.30

2.2 血漿GMP－140含量檢測(cè)結(jié)果

和生理鹽水組相比，高、中、低3種劑量的昆布多糖均能顯著降低血漿 GMP－140含量(P ＜0.01或 P ＜0.05)，見(jiàn)表 2。

3 討論

血小板聚集有多種誘導(dǎo)機(jī)制，花生四烯酸、二磷酸腺苷、凝血酶、氯化鈣和血小板活化因子可通過(guò)5種不同的機(jī)制來(lái)誘導(dǎo)血小板聚集，而血小板活化因子是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的血小板聚集劑[2]。已有研究證明，昆布多糖能夠抑制花生四烯酸、二磷酸腺苷、凝血酶和氯化鈣4種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的血小板聚集[3]。GMP－140是一種膜糖蛋白，存在于靜息血小板a顆粒膜上。它是血小板活化后的釋放產(chǎn)物，是反映血小板活化和釋放的特異性標(biāo)志，可以直接反映血小板的激活程度[4]。當(dāng)加入誘導(dǎo)劑血小板活化因子后，隨著血小板的活化，有部分GMP－140蛋白顆粒釋放到血液中，血漿中GMP－140的含量會(huì)大幅升高[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，昆布多糖能顯著抑制誘導(dǎo)的血小板聚作用和GMP－140的釋放，說(shuō)明昆布多糖具有抑制血小板聚集和活化作用。

表2 昆布多糖對(duì)家兔血漿GMP－140含量的影響

[1]Chang－Mok.Effect of sea tangle(Laminaria japonica)extract and fucoidan componments on lipid metabolism of mouse[J].Journal of the Korean Fisheries Society，2000，32(2):124.

[2]Guo NJ，Chang YL，Xiao DJ，et al.Activation of Platelet－neutrophil mediated by platelet－activating factor[J].J Exp Hematol，2005，13:447－451.

[3]孫立靖，王 彥，臺(tái) 杰，等.昆布藥理作用研究概述[J].中國(guó)藥業(yè)，2009，18(2):59 －60.

[4]彭 波，項(xiàng) 輝，趙金華，等.褐藻多糖硫酸酯影響血小板聚集及血栓形成[J].中山大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，22(1):331－333.

[5]邵 磊，辛現(xiàn)良，耿美玉，等.昆布多糖藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)海洋藥物，2005，24(2):112 －114.